雌酚酮衍生物EA303对小鼠腹泻的抑制作用

[e-mail]世界华人消化杂志2009年9月18日;17(26):2727-2731ISSN1009-3079CN14-1260/R研究快报RAPIDCOMMUNICATION雌酚酮衍生物EA303对小鼠腹泻的抑制作用朱岚,付守廷,李建婷,韦元元,王冰,汪慧慧,陈国良朱岚,付守廷,李建婷,韦元元,王冰,汪慧慧,陈国良,沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁省沈阳市110016作者贡献分布:朱岚与付守廷对此文所作贡献均等;此课题由朱岚、付守廷、李建婷、韦元元、王冰及汪慧慧设计;研究过程由朱岚、付守廷、李建婷、韦元元、王冰及汪慧慧操作完成;研究所用新试剂及分析工具由朱岚与陈国良提供;数据分析由朱岚、李建婷、韦元元、王冰及汪慧慧完成;本论文写作由朱岚与付守廷完成.通讯作者:付守廷,教授,110016,辽宁省沈阳市文化路103号,沈阳药科大学生命科学与生物制药学院[e-mail]电话:[phone]收稿日期:2009-05-31修回日期:2009-07-12接受日期:2009-07-24在线出版日期:2009-09-18Anti-diarrheaeffectofEA303(anestronederivative)inmiceLanZhu,Shou-TingFu,Jian-TingLi,Yuan-YuanWei,BingWang,Hui-HuiWang,Guo-LiangChenLanZhu,Shou-TingFu,Jian-TingLi,Yuan-YuanWei,BingWang,Hui-HuiWang,Guo-LiangChen,SchoolofLifeScienceandBiopharmaceutics,ShenyangPharmaceuti-calUniversity,Shenyang110016,LiaoningProvince,ChinaCorrespondenceto:ProfessorShou-TingFu,SchoolofLifeScienceandBiopharmaceutics,ShenyangPharmaceuticalUniversity,103WenhuaRoad,Shenyang10016,LiaoningProvince,[e-mail]:2009-05-31Revised:2009-07-12Accepted:2009-07-24Publishedonline:2009-09-18AbstractAIM:Toinvestigatetheanti-diarrheaeffectofEA303(anestronederivative)inmiceandexplorethemechanismsinvolved.METHODS:Diarrheawasinducedinmicebycathartics(castoroil,magnesiumsulfateorliq-uidparaffin).AtvarioustimepointsfollowingoraladministrationofasingledoseofEA303(14.87,29.74or59.48mg/kg),thediarrheaindexwasdetermined.TheeffectofEA303onintesti-nalpropulsionwasevaluatedusingthecharcoalmealmethod.Theeffectofdifferentconcentra-tionsofEA303(10-5,3×10-5and10-4mol/L)onisolatedintestinalsmoothmuscleofrabbitswasalsoevaluated.RESULTS:Comparedwithnormalsaline,EA303atvariousdosestestedcouldsignifi-cantlydecreasediarrheaindicesatvarioustimepointsfollowingdosing;high-doseEA303(59.48mg/kg)couldsignificantlyreducetheintestinalpropulsionrateofcharcoalmealinmice(58.53%±14.12%vs78.41%±15.91%,P0.01);andEA303atvariousdosestested(high-,medium-andlow-dose)couldsignificantlypostponethedefecationofmice(116.40±17.69min,114.40±45.76minand101.50±50.02minvs78.10±15.98min,respectively;allP0.01).Comparedwithpretreatmentbaselinevalues,EA303atconcentrationsof3×10-5mol/Land10-4mol/Lsignificantlyinhibitedthecontractionamplitudeofisolatedintestinalsmoothmusclefromrab-bits(43.26%±14.83%and16.70%±10.89%vs100.00%±0.00%,respectively;bothP0.01),whileEA303ataconcentrationof10-4mol/Lsignificantlydecreasedthecontractiontensionofisolatedintestinalsmoothmusclefromrabbits(58.94%±7.16%vs100.00%±0.00%,P0.01).CONCLUSION:EA303canexertananti-diarrheaeffectperhapsthroughloweringcontractionam-plitudeandtensionofintestinalsmoothmuscle.KeyWords:Anti-diarrhea;Estrone;Diarrheaindex;AdvanceZhuL,FuST,LiJT,WeiYY,WangB,WangHH,ChenGL.Anti-diarrheaeffectofEA303(anestronederivative)inmice.ShijieHuarenXiaohuaZazhi2009;17(26):2727-2731摘要目的:研究雌酚酮衍生物EA303对小鼠腹泻的抑制作用及机制.方法:采用小鼠的蓖麻油、硫酸钠、液体石蜡等腹泻模型及炭末推进法观察低、中、高剂量(14.87mg/kg、29.74mg/kg、59.48mg/kg)的EA303对小鼠在体内胃肠道的作用.通过离体运动实验法分析不同浓度(10-5mol/L、3×10-5mol/L、10-4mol/L)的EA303对家兔离体肠道平滑肌的作用.结果:EA303高、中、低3个剂量组灌胃给药后在不同时间段与生理盐水组相比可明显降低蓖麻油、硫酸钠、液体石蜡所致的小鼠腹泻的腹泻指数;高剂量组与生理盐水组相比可明显降低正常小鼠的小肠推进率(58.53%±®■背景资料雌酚酮类衍生物EA303于2005年由John对其抗癌活性进行了初步考察.结果表明,该化合物有较弱的抗癌活性,但至今未见有关EA303对胃肠消化系作用的报道,本文经多方面实验筛选,首次发现该化合物具有肠管平滑肌解痉及止泻作用,使雌酚酮类衍生物的研究进入了一个新的阶段,撤起了研究、开发和利用的热潮.■同行评议者张绪清,副教授,中国人民解放军第三军医大学附属西南医院全军感染病研究所14.12%vs78.41%±15.91%,P0.01);高、中、低剂量组与生理盐水组相比均可明显延缓正常小鼠的排便时间(116.40±17.69min,114.40±45.76min,101.50±50.02minvs78.10±15.98min,均P0.01);中、高剂量的EA303与未给药前相比能显著降低小肠平滑肌自主活动的振幅(43.26%±14.83%,16.70%±10.89%vs100.00%±0.00%,均P0.01),高剂量组与未给药前相比还显著降低小肠平滑肌自主活动的张力(58.94%±7.16%vs100.00%±0.00%,P0.01).结论:EA303具有抑制肠运动和抗腹泻作用,其作用机制可能是降低肠管平滑肌振幅和张力.关键词:止泻;雌酚酮;腹泻指数;推进率朱岚,付守廷,李建婷,韦元元,王冰,汪慧慧,陈国良.雌酚酮衍生物EA303对小鼠腹泻的抑制作用.世界华人消化杂志2009;17(26):2727-2731引言胃肠疾病已成为目前普遍的流行疾病之一.最常见的胃肠疾病当数腹泻.他一直是严重影响人类健康,是经济社会发展的多发病之一[1].目前上市的止泻药也有很多,但大多数都有其自身的弊端.目前发现雌孕激素对其他器官也有重要的作用,如心血管系统,神经系统等[2],妊娠的妇女常出现便秘,提示雌孕激素可能影响消化器官的功能活动,但其作用机制报道甚少.由此可见,研究雌激素对于肠痉挛、腹泻和各种胃肠疾病的治疗均有指导意义和参考价值.本实验研究的雌酚酮类衍生物EA303(化学结构见图1),易溶于水和醇.本实验采用小鼠止泻实验和炭末推进实验,进行对EA303止泻作用的药效学研究,并通过离体标本运动实验法分析EA303对离体兔肠道平滑肌的作用.为探索其新的药理作用和开发研究奠定一定的基础.1材料和方法1.1材料昆明种小鼠,雌雄兼用,体质量18-22g,沈阳药科大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(辽)2003-008;新西兰兔:雌雄兼用,体质量2.0-3.0kg,由沈阳药科大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(辽)2009-0002;酚酮衍生物EA303:沈阳药科大学药物化学教研室;盐酸洛哌丁胺胶囊:每粒2mg,西安杨森制药有限公司,批号080702060;蓖麻油:沈阳市虎石台化学试剂厂,批号940805;硫酸钠:开原化学试剂厂,批2728ISSN1009-3079CN14-1260/R世界华人消化杂志2009年9月18日第17卷第26期号890201;液体石蜡:沈阳市和平化工厂,批号911109;活性炭粉:天津市大茂化学试剂厂,批号20040305;阿拉伯树胶粉:上海化学试剂分装厂,批号840302;氯化钠注射液:沈阳志鹰制药厂,批号04090702;其他普通试剂均为市售分析纯.实验用Tyrode's液(mmol/L):NaCl145,KCl4.7,NaHCO37,MgSO41.2,KH2PO4·H2O0.6,CaC123andglucose5,pH7.4;HSS-1(B)型恒温浴槽:成都仪器厂;MR6240B型多道生理信号采集处理系统:成都仪器厂;JZJ01型肌肉张力换能器:成都仪器厂;TG-328A电光分析天平:上海天平仪器厂;T-500型电子天平:常熟双杰测试仪器厂;医用供氧器:河北省冀州市福利医疗器械厂;微量移液器:上海荣泰生化工程有限公司.1.2方法1.2.1EA303对小鼠3种腹泻模型腹泻指数的影响:昆明种小鼠50只,随机分为5组,每组10只,禁食过夜,自由饮水,第1组灌胃给予生理盐水0.2mL/10g作为生理盐水组;第2组灌胃给予盐酸洛哌丁胺2.2mg/kg作为阳性对照组;第3、4、5组分别灌胃给予EA30359.48mg/kg、29.74mg/kg、14.87mg/kg作为高剂量、中剂量和低剂量组,给药容量均为0.2mL/10g,1h后,各组分别灌胃蓖麻油0.2mL/10g.给药后将每只小鼠放在垫有直径约15cm滤纸的鼠笼,每隔1h换1次垫纸[3].以正常鼠便为