食品卫生微生物学检验菌落总数测定

食品卫生微生物学检验菌落总数测定发布单位:太原市质量技术监督局报送时间:2007年12月19日浏览次数:342附件1GB/T4789.2-2003食品卫生微生物学检验菌落总数测定1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。本标准适用于各类食品中菌落总数的测定。2术语菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。3引用标准GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂4设备和材料4.1冰箱：0～4℃。4.2恒温培养箱：36±1℃。4.3恒温水浴锅：46±1℃。4.4均质器或灭菌乳钵。4.5架盘药物天平：0g～500g,精确至0.5g。4.6菌落计数器。4.7放大镜4X。4.8灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。4.9灭菌锥形瓶：500mL。4.10灭菌玻璃珠。5mm。4.11灭菌培养皿：直径90mm。4.12灭菌试管。16X16mm。4.13广口瓶或三角瓶：容量为500mL。4.14电炉。4.15试管架。4.16酒精灯。。4.17灭菌镊子、灭菌刀或剪子等。5培养基和试剂5.1营养琼脂培养基：按GB/T4789.28中4.7规定。5.2磷酸盐缓冲稀释液：按GB/T4789.28中3.22规定。5.30.85%灭菌生理盐水。5.475%乙醇。6检验程序菌落总数的检验程序如下。检样→选择2～3个适宜的稀释度各取1mL分别加入灭菌培养皿内做成几个适当倍数的稀释液每皿内加入适量营养琼脂菌落计数36℃±1℃48h±2h报告7操作步骤7.1检样稀释及培养7.1.1以无菌操作,取样25mL或25g放入225mL灭菌生理盐水中，经充分振摇作成1：10均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后,最好置均质器中以8000r/min～10000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。7.1.2用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1∶100的稀释液。7.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL火菌吸管。7.1.4根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。7.1.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基(可放置于46±1℃水浴保温)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照7.1.6待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h。7.2菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。7.3菌落计数的报告7.3.1平板菌落数的选择选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。7.3.2稀释度的选择7.3.2.1应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见表1中例1)。7.3.2.2若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字(见表中例2及3)。7.3.2.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例4)。7.3.2.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例5)。7.3.2.5若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之(见表1中例6)。7.3.2.6若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表1中例7)。7.3.3菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示(见表1中“报告方式”栏)。表1稀释度选择及菌落数报告方式例次稀释液及菌落数两稀释液之比菌落总数[cfu/g(mL)]报告方式[cfu/g(mL)]10-110-210-31多不可计16420-1640016000或1.6X1042多不可计295461.63775038000或3.8X1043多不可计271602.22710027000或2.7X1044多不可计多不可计313-313000310000或3.1X105527115-270270或2.7X1026000-1X10107多不可计30512-3050031000或3.1X104附件2GB/T4789.3-2003食品卫生微生物学检验大肠菌群测定1范围本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。本标准适用于食品中大肠菌群的测定。2术语大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。3引用标准GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂4设备和材料4.1温箱：36±1℃。4.2冰箱：0～4℃。4.3恒温水浴：44.5±0.5℃。4.4天平。4.5显微镜。4.6均质器或乳钵。4.7平皿：直径为90mm。4.8试管。4.9吸管。4.10广口瓶或三角烧瓶：容量为500mL。4.11玻璃珠：直径约5mm。4.12载玻片。4.13酒精灯。4.14试管架。5培养基和试剂5.1乳糖胆盐发酵管：按GB/T4789.28中4.9规定。5.2伊红美蓝琼脂平板：按GB/T4789.28中4.25沥规定。5.3乳糖发酵管：按GB/T4789.28中4.10规定。5.4EC肉汤：按GB/T4789.28中4.11规定。5.5磷酸盐缓冲稀释液：按GB/T4789.28中3.22规定。5.6生理盐水。5.7革兰氏染色液：按GB4789.28中2.2规定。6检验程序大肠菌群检验程序如下：（图略）稀释检样乳糖胆盐发酵管36℃±1℃48h±2h产气大肠菌群阴性伊红美蓝琼脂平板36℃±1℃48h±2h不产气报告革兰氏染色乳糖发酵管36℃±1℃48h±2h革兰氏阳性革兰氏阴性无芽胞杆菌产气不产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性大肠菌群阴性报告报告报告7操作步骤7.1检样稀释7.1.1以无菌操作将检样25mL(或g)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000～10000r/min的速度处理1min，做成1∶10的均匀稀释液。7.1.2用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1∶100的稀释液。7.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。7.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。7.2乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。7.3分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。7.4证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。7.5报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值(见表1)。阳性管数MPN100mL(g)95%可信限1mL(g)X30.1mL(g)X30.01mL(g)X3下限上限00000000012330306090590000011110123306090120513000002222012360901201600000333301239013016019011110000012340701101505102002101111111101237011015019010302303602222000001239014020026010303603703333000001232303906409504070150120013003800注1:本表采用3个稀释度[1mL(g)、0.1mL(g)、0.01mL(g)]，每稀释度三管表1大肠菌群最可能数（MPN）检索表附件3附件3GB/T4789.15-2003食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数1范围本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。本标准适用于食品中大肠菌群的测定。2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3.1冰箱：0～4℃。3.2恒温培养箱：25～28℃。3.3恒温振荡器。3.4显微镜：10X～100X。3.5架盘药物天平：0～500g，精确至0.5g。3.6灭菌具玻塞锥形瓶：300mL。3.7灭菌广口瓶：500mL。。3.8灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。3.9灭菌平皿。注2：表内所列数量如改用10mL(g)、1mL(g)和0.1mL(g)时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.1mL(g)、0.01mL(g)、0.001mL(g)时，则表内数字应相应增加10倍。其余可类推。3.10灭菌试管：16mmX160mm。3.11载玻片、盖玻片。3.12灭菌牛皮纸袋、塑料袋。3.13灭菌金属勺、刀。4培养基和试剂4.1马铃薯-葡萄糖琼脂培养基，附加抗菌素按GB/T4789.28中4.78规定。4.2孟加拉红培养基：按GB/T4789.28中4.25沥规定。4.3灭菌蒸馏水。5检验程序检样粮食块状食品粉状食品液状食品糊状食品25g+225ml无菌水25ml+225ml无菌水做成几个适当倍数的稀释液选择三个适宜稀释度，各取1mL加入灭菌平皿内每皿加入适量培养基（可先用马铃薯-葡萄糖琼脂附加抗菌素、高盐察氏培养基或孟加拉红培养基）菌落计数25℃～28℃5d报告6操作步骤6.1以无菌操作将检样25mL(或g)放于含有225mL灭菌生理盐水的具塞锥形瓶中，振摇30min，即为1∶10稀释液。6.2用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液10mL，注入灭菌试管中，另用1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。6.3取1mL1∶10稀释注入含有9mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1：100稀释液。6.4按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每