搜索
TCA-丙酮蛋白浓缩TCAproteinprecipitationprotocolStockSolutions:100%(w/v)Trichloroaceticacid(TCA)recipe:dissolve500gTCA(asshipped)into350mldH2O,storeatRT.PrecipitationProtocol:1.Add1volumeofTCAstockto4volumesofproteinsample.i.e.in1.5mltubewithmaximumvol.,add250µlTCAto1.0mlsample.2.Incubate10minat4°C.3.Spintubeinmicrocentrifugeat14Krpm,5min.4.Removesupernatant,leavingproteinpelletintact.Pelletshouldbeformedfromwhitish,fluffyppt.5.Washpelletwith200µlcoldacetone.6.Spintuneinmicrofugeat14Krpm,5min.7.Repeatsteps4-6foratotalof2acetonewashes.8.Drypelletbyplacingtubein95°Cheatblockfor5-10mintodriveoffacetone.9.ForSDS-PAGE,add2Xor4Xsamplebuffer(withorwithoutbME)andboilsmaplefor10minin95°Cheratblockbeforeloadingsmapleontopolyacrylamidegel.TCA蛋白浓缩步骤：储存液：100%（W/V）三氯乙酸（TCA）配制：将500gTCA溶解到350mldH2O中，室温储存。浓缩步骤：1.加1倍体积的TCA储存液到4倍体积的蛋白样品中。如：在1.5ml的离心管中，1ml样品中加入250ul的TCA。2.4度孵育10min。3.14000rpm离心5min。4.弃上清5.加入200ul预冷的丙酮洗涤沉淀。6.14000rpm离心5min。7.重复步骤4-6两次。8.95度5-10min，晾干沉淀以彻底出去丙酮。9.加入2X或4X样品buffer，煮沸样品10min，SDS-PAGE改进版：TCA蛋白浓缩步骤：储存液：100%（W/V）三氯乙酸（TCA）配制：将500gTCA溶解到350mldH2O中，室温储存。浓缩步骤：10.TCA储存液加到样品蛋白中，终浓度为10%，TCA缓慢滴入蛋白样品中；蛋白样品不易过多，2ml左右即可，使用10ml离心管。11.冰浴30-60min，时间久一点。12.14000rpm离心5min。13.弃上清14.加入400ul预冷的丙酮洗涤沉淀，（丙酮事先放入-30℃冰箱内冷冻至少半个小时以上）。15.14000rpm离心5min。16.重复步骤4-6两次。17.室温晾干沉淀，不易过干10-15min。18.加入水溶解，若有结块或不溶可用8M尿素溶解；19.区样品做跑胶样品处理，跑SDS胶。