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yong037整理12012年福建省各地市5月份质检选修试题2013．9．171．人外周血单核细胞能合成白介素2（IL－2），该蛋白可增强机体免疫功能，但在体内易被降解。研究人员将IL－2基因与人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一个融合基因，并在酵母菌中表达，获得具有IL－2生理功能、且不易降解的IL－2－HAS融合蛋白。其技术流程如图。请回答：（1）培养人外周血单核细胞的适宜温度为℃；图中②表示过程。（2）表达载体1中的位点，应为限制酶BglⅡ的识别位点，才能成功构建表达载体2。（3）表达载体2导入酵母菌后，融合基因转录出的mRNA中，与IL－2对应的碱基序列不能含有（起始/终止）密码子，才能成功表达出IL－2－HAS融合蛋白。（4）应用杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL－2－HAS融合蛋白。2.低温伤害是农业生产中的一种严重自然灾害。种植在北部寒冷地带的烟草，其抗冻性是选育寒冷地区作物品种的一个重要指标。科学家将昆虫抗冻蛋白基因转移到烟草中，明显提高了烟草的抗寒能力。下图是获取转基因抗寒烟草的过程示意图，请据图回答下列问题：（1）PCR扩增过程中引物对是根据序列合成。PCR扩增过程可以重复循环进行，从理论上推测，第二轮循环产物中含有引物a的DNA片段所占的比例为。（2）农杆菌Ti质粒中的能够插入其中的抗冻蛋白基因转入番茄细胞的染色体DNA上。（3）过程①应用了技术，要鉴定转基因抗寒烟草是否具有抗寒性，个体水平的鉴定方法是。3.将已经导入人乳铁蛋白基因的山羊胚胎细胞和乳腺上皮细胞作为供体细胞，利用体细胞核移植技术，分别将等量的上述细胞核移植到山羊MII期去核卵母细胞内，形成克隆胚，经体外培养后，得到囊胚，结果如下表。转基因供体细胞克隆胚（个）囊胚率（%）乳腺上皮细胞938.60胚胎细胞11915.13yong037整理2请回答：（1）导入人乳铁蛋白基因后，需将两种供体细胞分别放入特定的选择培养基中培养，筛选出含有的供体细胞。（2）若要对转基因供体细胞的DNA进行PCR检测，需将DNA加热至90～95℃，目的是____（3）两种转基因供体细胞经诱导后，能检测到人乳铁蛋白的应是____细胞。（4）分析上表结果得出：胚胎细胞核移植的难度____（大于／小于）乳腺上皮细胞核移植，其判断依据是。4.奶牛乳房炎是奶牛业危害大、常见、经济损失较严重的疾病之一。抗生素的使用易在奶牛体内残留，影响畜产品质和人类健康。溶菌酶具有抗菌、抗病毒和增强免疫力的功能，在动物的组织器官粘膜上广泛分布和表达。我国科学家设想利用转基因技术生产出在乳腺中能特异表达人溶菌酶基因的转基因克隆奶牛，目前已获得转基因克隆胚的囊胚。请回答有关问题：（1）构建乳腺特异性表达载体，其中人溶菌酶基因（hLYZ）是____绿色荧光蛋白基因作为，为保证可以通过乳汁分泌获得溶菌酶，启动子采用基因。（2）采用显微注射技术将基因表达载体导人荷斯坦牛胎儿细胞。（3）将转基因胎儿细胞注入到____细胞中，完成核移植。（4）筛选绿色荧光转基因胚胎培养。科学家现已培养至囊胚阶段，最后还要应用技术以获得转基因奶牛。5、胰岛素类似物－门冬胰岛素是用天冬氨酸取代人胰岛素β链28位上的脯氨酸而合成的，是自然界中不存在的蛋白质，它与人胰岛素相比，减弱了溶液中胰岛素分子间的结合强度，为超短效胰岛素。下图是生产门冬胰岛素过程示意图。（1）过程Ⅰ常用的方法获得门冬胰岛歌词原基因，过程Ⅱ使用的工具酶有（2）在基因表达载体中，门冬胰岛素原基因首端必须有，才能使该基因在受体细胞中表达。过程Ⅲ常用处理受体细胞，使其成为感受态细胞。（3）上述获得门冬胰岛素的生物技术主要是。6.下图是利用现代生物技术改良草莓品系的过程：（1）欲获得抗虫草莓可从蛋白酶抑制剂基因、生长素诱导基因中选择作为目的yong037整理3基因，要鉴定草莓的抗虫性，从个体水平上可采用实验。（2）Ⅱ过程常规方法采用杂交育种，还可先用花药离体培养获得2n和4n的草莓，再用技术获得同时具凤梨风味和抗虫特性的草莓，该技术常用的酶有。（3）帮助农民发展经济时，要注意一些实际问题，如草莓新品系应种植在阳光充足，疏水性好的土壤里，这主要体现了生态工程的。（填选项前的字母）A．物种多样性原理B．整体性原理C．协调与平衡原理D．物质循环再生原理7.下图是利用赋予增殖能力的转基因淋巴细胞生产干扰素的简化流程。请分析回答：（1）过程①、③使用的酶能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的（化学键）断开。（2）利用PCR扩增仪完成过程②的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷三磷酸（dATP、dCTP、dTTP、dGTP）和酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长。（3）过程⑤属于动物细胞工程中的，进行过程⑤前，需要检测已导入重组质粒的淋巴细胞能否产生，以确定该淋巴细胞是否符合生产要求。8.下图为培育荧光猪的简要过，请结合图示回答下列问题：（1）荧光蛋白基因的受体细胞取自猪胎儿细胞，是因为该类细胞。（2）图中所用的荧光蛋白基因是研究人员从一种特殊水母体内提取的，提取基因所需要的工具酶是。（3）构建重组细胞时应去掉卵母细胞细胞核的原因是。（4）如果重组细胞为贴附性细胞，则在进行原代培养时，会表现出贴壁生长和等特点。（5）若想让受体猪同时生下多头基因型相同的荧光猪，可通过采用技术得以实现。9.内蒙古白绒山羊的血管内皮生长因子基因（VEGF164），若在皮肤毛囊细胞中特异性表yong037整理4达，可促进毛囊发育和毛发生长，显著提高羊毛产量。科学家将该基因导人羊胎儿的成纤维细胞核，成功培育出转基因克隆山羊。技术流程如下图，其中EcoRI、SaII、SphI为限制酶。请据图回答。（1）在构建基因表达载体的过程中，应采用____（填限制酶名称）对质粒和含绿色荧光基因的DNA片段进行酶切，再经相应处理形成重组质粒。其中绿色荧光基因的作用是____。（2）要使VEGF164在皮肤毛囊中表达，须将它与羊绒蛋白基因的____筹调控组件重组起来，构建基因表达载体。（3）图中①将基因表达载体导入胎儿成纤维细胞核的方法是____。将导入成功的细胞核注入到去核的卵母细胞构成重组细胞，培养成早期胚胎，经图中②____技术可培育成转基因克隆山羊。10.利用基因工程生产蛋白质药物，经历了三个发展阶段。第一阶段，将人的基因转入细菌细胞；第二阶段，将人的基因转入小鼠等动物细胞。前两个阶段都是进行细胞培养，提取药物。第三阶段，从转基因动物的乳汁或尿液中提取药物。（1）将目的基因导入细菌细胞之前，应对细菌进行处理，采用方法是；利用微生物生产药物的优点。（2）进行动物细胞培养时，必须加入以维持培养液PH。（3）利用转基因牛羊尿液生产提取药物的过程是将目的基因导入牛羊的细胞，然后早期胚胎培养到时期进行胚胎移植，最后获得动物体。参考答案：1.（1）37反转录（2）a（3）终止（4）抗原－抗体2．（1）抗冻蛋白基因的脱氧核苷酸3/4（2）T-DNA（3）植物组织培养种植在低温的环境中3.（1）人乳铁蛋白基因（2）使DNA解链（3）乳腺上皮（4）小于胚胎细胞克隆胚的个数及囊胚率均多于乳腺上皮细胞4.（1）目的基因标记基因乳腺蛋白（3）去核卵母（4）胚胎移植5.（1）化学合成限制酶和DNA连接酶（2）启动子Ca2+（3）蛋白质工程yong037整理56.（1）蛋白酶抑制剂基因抗虫接种（2）植物体细胞杂交纤维素酶和果胶酶（3）C7.（1）磷酸二脂键（2）引物Taq（3）动物质细胞培养干扰素8.（1）分化程度低，恢复其全能性相对容易（2）限制酶（3）避免卵细胞中的遗传物质对后代造成干扰（4）接触抑制（5）胚胎分割9.（1）SalⅠ、SphⅠ作为标记基因（2）启动子、终止子（4）显微注射法胚胎移植10.（1）Ca2+处理法繁殖快、外源基因高效表达、得到的产物多（2）CO2（3）膀胱上皮囊胚