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医院logo大通县第二人民医院医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第1页共1页实验SOP文件目录编号程序文件名称页码XK-SOP-01ABO血型正定型1-3XK-SOP-02ABO血型反定型4-6XK-SOP-03RHD血型鉴定7-9XK-SOP-04RH血型定型10-11XK-SOP-05聚凝胺试验12-14XK-SOP-06盐水配血试验15-16XK-SOP-07抗体筛查试验（聚凝胺17-19XK-SOP-08ABO血型定型试剂质量控制（标准血清）19-20XK-SOP-09ABO血型反定型用红细胞质量控制（国产试剂）21-22XK-SOP-10配血、血型试验标记规定23-26医院logo大通县第二人民医院医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第1页共3页ABO血型正定型1、实验目的用盐水介质法进行ABO血型系统正定型的鉴定。2、实验原理红细胞作为一种颗粒性抗原，在液体介质中和电解质的参与下，可直接与相应抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象，用已知IgM类特异性标准抗血清与被检红细胞在盐水介质中反应，若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体所对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的ABO血型。3、标本采集3.1、采血管：应采用EDTA抗凝的采血管采集血标本，标本中不可有血凝块。3.2、标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所采用血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3、标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放1-10℃范围的标本冰箱保存3天。4、试剂及被检细胞4.1、抗A、抗B标准血清。4.2、35%-45%被检红细胞。4.3、2%-4%被检红细胞。5、设备5.1、血型血清学试验离心机：久保田公司、Diana公司产品。5.2、eppendorf多功能离心机。5.3、振荡器。6、实验操作6.1、玻片法6.1.1、取一张破片，分区标注-A、-B及被检者编号、血型。6.1.2、载玻片上-A、-B区域分别加入1滴（-50微升）相应-A、-B标准血清及1滴（-50微升）35%-45%被检红细胞。6.1.3、摇动玻片放置约2分钟。6.1.4、观察并记录结果。6.2、试管法医院logo大通县第二人民医院医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第2页共3页6.2.1、取2只试管，分区标注-A、-B及被检者编号、血型。6.2.2、在-A、-B试管内分别加入1滴（-50微升）相应-A、-B标准血清及1滴（-50微升）2%-4%被检红细胞。6.2.3、离心，1000rcf/15s。6.2.4、肉眼观察并记录结果。6.3、微板法6.3.1、取一准备完毕的微板，取合适的两孔分别标注-A、-B及被检者编号、血型。6.3.2、在-A、-B区域分别加入1滴（-50微升）相应-A、-B标准血清及1滴（-50微升）2%-4%被检红细胞。6.3.3、轻摇微孔板，混匀孔中液体。6.3.4、400g离心30s。6.3.5、用震荡仪震荡微量板，震动能使阳性反应出现凝集细胞扣，而若是阴性反应细胞扣则很快消除。6.3.6、判读并记录结果。7、结果判定正定型反定型血型抗A抗BA1细胞B细胞O细胞+––+–A–++––B––++–O++–––AB-A侧凝集，-B侧不凝集，为A型。-A侧不凝集、-B侧凝集，为B型。-A、-B侧均凝集，为AB型。-A、-B侧均不凝集，为O型。8、临床意义8.1、用于临床输血：严重贫血，各种急慢性失血的患者，以及手术前需要备的病人，都必须提前检查血型和交叉配血。因血型不符的输血会造成严重的溶血性输血反应，所以必须要坚持同型输血。8.2、新生儿溶血症：当母亲与胎儿血型不合时，可能会引起胎儿或新生儿的免疫溶血性疾病，多发生于O型母亲孕育A型或B型胎儿时。医院logo大通县第二人民医院医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第3页共3页8.3、用于器官移植：受者和供者的ABO血型必须相符，否则极易引起排斥反应造成移植失败。8.4、在法医学上还可用于亲子鉴定等。9、注意事项9.1、试验应在室温（18-25℃）内进行。9.2、玻片法边缘易干涸，易造成假阳性结果，所以应在2分钟内判读结果。9.3、自身抗体可干扰正常结果判读，造成假阳性，应充分洗涤细胞，减少干扰。9.4、对含有较多自身冷凝集素的受检者，在鉴定血型时往往被误定为AB型，遇此情况，需要37℃生理盐水洗涤受检者红细胞2-3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。9.5、当用立即试管法不能显示出正常凝集时，对于弱的反应，需室温延长作用时间15分钟。9.6、新生儿红细胞和弱的表现型个体，可能会出现假阴性或比正常反应弱的凝集。9.7、溶血（排除物理溶血）和凝血都是血型抗原抗体反应阳性；首先观察溶血，然后观察凝血。9.8、微板法中振荡器震荡的调整要严格遵守一定标准，以便保证细胞沉淀悬浮条件的抑制。9.9、微板法若用读板机判读结果，重要的是红细胞悬液浓度和加入孔中液体的体积标准化，可以使用自动加样器。9.10、新微板使用前每孔加入一滴20%-30%牛血清白蛋白（BSA），轻轻摇动微板混匀后室温放置10-15分钟，然后弃去孔中的BSA，用水龙头水洗涤微板至少10次，再用蒸馏水或去离子水洗涤微板2次，用力甩去版中的液体，自然晾干，备用。9.11、本试剂不能用于检测酶处理过的红细胞。医院logo大通县第二人民医院医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第4页ABO血型反定型1、实验目的用盐水介质法进行ABO血型系统反定型的鉴定。2、实验原理红细胞作为一种颗粒性抗原，在液体介质中和电解质的参与下，可直接与相应抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象，用已知标准反定型细胞与被检血清反应，若被检血清与已知型别的标准红细胞出现凝集，则证明被检血清中存在与该红细胞抗原相对应的抗体。反之，若被检血清与已知型别的标准红细胞不出现凝集，则证明被检血清中不存在与该红细胞抗原相对应的抗体，以此反证被检者红细胞上抗原的型别。3、标本采集3.1、采血管：应采用EDTA抗凝的采血管采集血标本，标本中不可有血凝块。3.2、标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所采用血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3、标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放1-10℃范围的标本冰箱保存3天。4、试剂及被检血清4.1、A1型、B型、O型试剂红细胞：北京金豪制药有限公司产品。4.2、被检血清（供、患者血清）5、器材5.1、血型血清学试验离心机：久保田公司、Diana公司产品。5.2、eppendorf多功能离心机。5.3、振荡器。5.4、显微镜载玻片，5×7透明硬塑试管。6、试验操作6.1、玻片法6.1.1、取一张破片，分区标注Ac、Bc、Oc及被检者编号、血型。6.1.2、载玻片上Ac、Bc、Oc区域分别加入1滴（-50微升）相应A1型、B型、O型试剂红细胞及同一被检血清2滴（100微升）。6.1.3、摇动玻片放置约2-4分钟。6.1.4、肉眼观察并记录结果。医院logo大通县第二人民医院医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第5页6.2、试管法6.2.1、取3只试管，分区标注Ac、Bc、Oc及被检者编号、血型。6.2.2、在Ac、Bc、Oc试管内分别加入被检血清2滴（100微升）。6.2.3、分别各加50微升相应A1型、B型、O型试剂红细胞。6.2.4、摇动试管，混匀，离心，1000rcf/15s。6.2.4、肉眼观察并记录结果，必要时可借助显微镜观察。6.3、微板法6.3.1、取一准备完毕的微板，取合适的三孔分别标注Ac、Bc、Oc及被检者编号、血型。6.3.2、在Ac、Bc、Oc孔分别加入50微升被检血清。6.3.3、在Ac、Bc、Oc孔分别加入相应的与血清等量的A1型、B型、O型试剂红细胞。6.3.4、轻摇微孔板，混匀孔中液体。6.3.5、700g离心30s。6.3.6、用震荡仪震荡微量板，震动能使阳性反应出现凝集细胞扣，而若是阴性反应细胞扣则很快消除。6.3.7、判读并记录结果。7、结果判定正定型反定型血型抗A抗BA1细胞B细胞O细胞+––+–A–++––B––++–O++–––ABAc侧不凝集、Bc侧凝集，为A型。Ac侧凝集，Bc侧不凝集，为B型。Ac、Bc侧均凝集，为O型。Ac、Bc侧均不凝集，为AB型。8、临床意义8.1、复合正定型血型结果的准确性，纠正勿检、漏报，特别是一些具有弱抗原的亚型。此外，还可以纠正某些病人因红细胞抗原弱碱性造成的正定型判断错误。8.2、发现血清中存在的一些抗体。医院logo大通县第二人民医院医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第6页9、注意事项9.1、玻片法边缘易干涸，易造成假阳性结果，所以应在2分钟内判读结果。9.2、溶血（排除物理溶血）和凝血都是血型抗原抗体反应阳性；首先观察溶血，然后观察凝血。9.3、若在反定型试验中，受检者的血清与O血型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自身对照试验。如果自身对照为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如果自身对照为阴性，则表明被检者血清或血浆中可能存在ABO系统意外的其他血型系统的抗体干扰。9.4、反定型细胞如出现红细胞颜色变成暗紫色或红细胞自发凝集，出现菌落或溶血，则不能使用，若开瓶使用后，每日应使用标准抗A、抗B血型定型试剂检测反定型细胞是否与已知血型相符，以防制品污染、变质失效，而造成检定错误。9.5、新微板使用前每孔加入一滴20%-30%牛血清白蛋白（BSA），轻轻摇动微板混匀后室温放置10-15分钟，然后弃去孔中的BSA，用水龙头水洗涤微板至少10次，再用蒸馏水或去离子水洗涤微板2次，用力甩去版中的液体，自然晾干，备用。医院logo大通县第二人民医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第7页RhD血型鉴定1、实验目的鉴定被检标本的RhD血型。2、实验原理红细胞作为一种颗粒性抗原，在液体介质中和电解质的参与下，可直接与相应抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象。3、标本采集3.1、采血管：应采用EDTA抗凝的采血管或不抗凝的采血管采集标本。3.2、标本接收：接收标本时应该对标本标签信息与申请单信息是否相符，填写是否完整；所采用血管是否正确；标本是否符合要求（无溶血，无乳糜，无杂物）。3.3、标本处理：接收标本后尽快分离血浆或血清立即进行检测，如暂时不用可放2-8℃范围的标本冰箱保存3天。4、试剂及被检红细胞4.1、单克隆混合检测IgM+IgG抗D标准血清。4.2、35%-45%被检红细胞。4.3、2%-4%被检红细胞。5、设备5.1、血型血清学试验离心机：久保田公司。5.2、eppendorf多功能离心机。5.3、振荡器。6、试验操作6.1、玻片法6.1.1、取一张破片，分区标注-D及被检者编号、血型。6.1.2、在标注的玻片上加入1滴（-50微升）抗D标准血清及1滴（-50微升）35%-45%被检红细胞。6.1.3、缓慢的旋转玻片30秒，并尽可能在2分钟让他们充分混匀。6.1.4、观察肉眼可见凝集并记录结果。6.1.5、当结果为弱凝集或阴性时，要用试管法进行确认试验。6.2、试管法6.2.1、取1只试管，标注-D及被检者编号、血型。医院logo大通县第二人民医院医院血库编号：XK-SOP版次：1实验SOP文件生效日期：2012-8-1第8页6.2.2、在标注的试管上加入1滴（-50微升）抗D标准血清及1滴2%-4%被检红细胞悬液。6.2.3、充分混匀，离心，1000rcf/15s。6.2.4、观察并记录结果。6.2.5、当结果为阴性或弱阳性时，要用间接抗人球蛋白法进行弱D抗原的检测。6.2.6、改良的间接抗人球