2014浙江大学生科实验报告

-1-实验报告课程名称：生理科学实验（甲）实验类型：探究性实验实验项目名称：实验十四家兔动脉血压的神经与体液调节同组学生姓名：指导老师：厉旭云实验14家兔动脉血压的神经与体液调节（浙江大学医学院12级口腔医学七年制生理科学实验3C班3组，浙江杭州310058）[摘要]目的：采用直接测量法记录新西兰兔动脉血压，观察神经和体液因素对动脉血压的调节作用，了解新西兰兔急性失血模型的建立方法，观察新西兰兔急性失血期间及失血停止后期动脉血压和血红蛋白浓度的变化。方法：麻醉新西兰兔后，做颈动脉插管，用RM6240生物信号采集系统记录动脉血压的变化情况。分别做夹闭颈总动脉，切断迷走、减压神经后电刺激外周、中枢端，在耳缘静脉分别注射去甲肾上腺素、乙酰胆碱、阿托品后外加电刺激迷走外周、阿托品后再加乙酰胆碱等处理，然后观察记录这些因素对动脉血压和心率的影响。新西兰兔颈总动脉放血急性失血3min前后，取样观察其动脉血压和血红蛋白浓度的变化情况。结果：夹闭新西兰兔右侧颈总动脉10s后，收缩压（SP）由105.29±18.94mmHg升高到128.17±26.74mmHg（p0.001），舒张压（DP）由88.78±15.13mmHg升高到107.27±20.50mmHg（p0.001），心率由263.40±21.18bpm升高到270.80±21.21bpm（p0.001）。电刺激新西兰兔迷走神经外周端后，SP由107.87±18.30mmHg降低至94.94±17.10mmHg（p0.05），DP由92.36±15.59mmHg降低至70.64±19.65mmHg（p0.05），心率由264.20±21.95bpm降低至116.20±78.86bpm（p0.001）。电刺激新西兰兔迷走神经中枢端前后，SP分别为107.37±18.15mmHg和98.77±20.22mmHg，前后无显著差异（p0.05）；DP分别为91.26±15.17mmHg和85.45±16.78mmHg，前后无显著差异（p0.05）；心率分别为262.20±21.76bpm和299.60±89.35bpm，前后无显著差异（p0.05）。电刺激新西兰兔减压神经中枢端后，SP由101.31±24.86mmHg降低至87.84±17.96mmHg（p0.05），DP由86.07±19.84mmHg降低至72.39±15.77mmHg（p0.05），心率由255.00±31.82bpm降低至247.67±30.20bpm（p0.05）。电刺激新西兰兔减压神经外周端前后，SP分别为100.21±24.63mmHg和100.04±24.85mmHg，前后无显著差异（p0.05）；DP分别为84.77±20.19mmHg专业：医学1201姓名：学号：日期：2014-12-4地点：医教C404-2-和84.18±21.05mmHg，前后无显著差异（p0.05）；心率分别为256.56±27.28bpm和254.22±33.11bpm，前后无显著差异（p0.05）。新西兰兔静脉注射0.1g/LNA0.3ml后，收缩压（SP）由104.52±21.50mmHg升高到138.47±38.51mmHg（p0.001），舒张压（DP）由87.73±18.59mmHg升高到116.01±31.45mmHg（p0.001），心率由256.50±22.85bpm升高到247.70±21.74bpm（p0.05）。新西兰兔静脉注射0.01g/L乙酰胆碱（ACh）0.1ml/kg后，SP由97.30±21.05mmHg降低至82.26±17.28mmHg（p0.05），DP由81.08±17.78mmHg降低至65.43±13.99mmHg（p0.05），心率分别为250.20±25.94bpm和250.10±24.67bpm，前后无显著差异（p0.05）。新西兰兔静脉注射1g/L阿托品0.3ml/kg，再5V/30Hz刺激迷走神经外周端后，SP由89.51±22.87mmHg降低至86.96±21.79mmHg（p0.05）；DP分别为74.37±17.95mmHg和68.60±18.12mmHg，前后无显著差异（p0.05）；心率分别为243.78±27.25bpm和186.44±90.40bpm，前后无显著差异（p0.05）。新西兰兔静脉注射1g/L阿托品0.3ml/kg，再静脉注射0.01g/L乙酰胆碱0.1ml/kg前后，SP分别为89.92±21.52mmHg和88.06±20.38mmHg，前后无显著差异（p0.05）；DP分别为75.22±17.22mmHg和73.35±16.36mmHg，前后无显著差异（p0.05）；心率分别为238.33±26.28bpm和241.56±27.10bpm，前后无显著差异（p0.05）。新西兰兔失血前MAP为80.04±18.48mmHg，持续失血3min后的即刻、10min、20min和30minMAP分别为63.32±20.64mmHg、61.49±13.40mmHg、64.83±21.27mmHg和63.83±20.97mmHg。新西兰兔失血前Hb为118.17±18.79g/L，持续失血3min后的即刻、10min、20min和30minHb分别为108.00±20.74g/L、104.00±19.06g/L、117.83±14.15g/L和117.83±14.15g/L。结论：机体通过神经和体液调节动脉血压，夹闭颈总动脉可升高血压和心率；在颈动脉窦—主动脉弓压力感受器反射中减压神经为传入神经，迷走神经为传出神经，两者兴奋时均可降低血压和心率；去甲肾上腺素为错误!未找到引用源。受体激动剂，可升高血压；阿托品为M胆碱能受体阻断剂可阻断迷走神经兴奋和胆碱能受体激动剂乙酰胆碱的降压效应。家兔急性失血后，机体可通过自身的代偿调节，使血红蛋白浓度下降并维持血压稳定。[关键词]新西兰兔；迷走神经；减压神经；颈总动脉；去甲肾上腺素；乙酰胆碱；阿托品；动脉血压；心率[引言]在生理情况下，人和其他哺乳动物的血压处于相对稳定状态，这种相对稳定是通过神经和体液因素的调节而实现的，其中以颈动脉窦—主动脉弓压力感受器反射尤为重要。反-3-射的传入神经为减压神经和窦神经，传出神经为心交感神经、迷走神经和交感缩血管纤维。机体对一定量的急性失血有代偿能力。在失血的瞬时，新西兰兔通过压力感受性反射和容量感受性反射，阻力血管，容量血管收缩，心脏活动增强以维持动脉血压[1]。1实验材料1.1实验动物新西兰兔10只，雌雄不拘，体重2.01±0.24kg，由浙江大学动物实验中心提供。1.2实验仪器RM6240多道生理信号采集处理系统（成都仪器厂）；YPJ01压力换能器（成都仪器厂）；CA620血细胞计数仪（麦道尼克）1.3实验试剂20%氨基甲酸乙酯（Urethane，别名乌来糖、乌拉坦）；1000U/ml肝素钠（HeparinSodium）；0.1g/L去甲肾上腺素（NA，Noradrenaline）；10-2g/L乙酰胆碱（ACh，Acetylcholine）；1g/L阿托品（Atropine）2方法2.1实验系统连接及参数设置压力换能器接RM6240多道生理信号采集处理系统第1通道，刺激器输出接刺激电极。设置仪器参数：第1通道模式为血压，时间常数为直流，滤波频率100Hz，灵敏度90mmHg，采样频率800Hz，扫描速度2.5s/div。刺激模式为定时刺激方式，刺激强度5V，刺激波宽2ms，刺激频率30Hz，刺激时间10s。2.2测压管道连接和抗凝处理血压换能器固定于铁支架上，调节压力换能器高度，使其测压口与新西兰兔心脏处于同一水平面。压力换能器、测压管和动脉插管用三通连接，管道内充满生理盐水，排尽气体。启动RM6240多道生理信号采集处理系统，向压力换能器、测压管加压24kPa，RM6240多道生理信号采集处理系统记录的压力线应维持在24kPa。注射器插入与动脉插管相连的三通，转动三通，使动脉插管与注射器相通，将动脉插管插入肝素生理盐水中，注射器回抽1mL，关闭三通。将放血瓶与颈动脉插管三通阀相连，用抗凝生理盐水充满放血管道内，排出空气，记下瓶内液体量。放血瓶内液面距离心脏水平高度约65cm（即50mmHg）。2.3家兔手术准备2.3.1麻醉固定新西兰兔称重后，按1g/kg体重的剂量（20%×5mL/kg）于耳缘静脉注射200g/L氨基甲酸乙酯麻醉。快速推注1/2或2/3麻醉剂后，观察家兔角膜反射，酌情推注剩余药物。动物麻醉后仰卧于手术台上，固定四肢，前肢交叉固定，用棉绳钩住兔门齿，-4-将绳拉紧并缚于兔台铁柱上。2.3.2颈部血管神经分离剪去颈部被毛，正中切开颈部皮肤5~7cm，钝性分离颈部肌肉、暴露颈部气管和血管神经鞘，用玻璃分针仔细分离右侧迷走神经和减压神经，穿细线备用。用玻璃分针分离两侧颈总动脉，各穿一线备用。2.3.3颈总动脉插管抗凝处理颈总动脉插管前端充满肝素生理盐水。2.3.4颈总动脉插管在左侧颈总动脉远心端结扎，近心端用动脉夹夹住，并在动脉下面预先穿一细线备用。肝素钠全身抗凝(1000U/mL肝素钠，1mL/kg)。用眼科剪在靠近结扎处动脉壁剪一“Ｖ”字形切口，将动脉插管向心方向插入颈总动脉内，扎紧固定。移去动脉夹。2.4实验观察2.4.1记录正常血压启动记录按钮，打开三通阀，记录正常血压。2.4.2用动脉夹夹闭右侧颈总动脉10s，观察血压变化。2.4.3用两细线在右侧迷走神经中部两侧结扎，在两结扎线间剪断该神经，用定时刺激（强度5V，频率30Hz，波宽2ms，刺激时间10s）的电脉冲分别刺激神经外周端和中枢端，观察血压变化。2.4.4用两细线在减压神经中部两侧结扎，在两结扎线间剪断神经，用定时刺激（强度5V，频率30Hz，波宽2ms，刺激时间10s）的电脉冲分别刺激神经中枢端和外周端，观察血压变化。2.4.5静脉注射0.1g/L去甲肾上腺素0.3mL，观察血压变化。2.4.6按0.1ml/kg体重剂量静脉注射10-2g/L乙酰胆碱，观察血压变化。2.4.7按0.3ml/kg体重剂量静脉注射1g/L阿托品。2.4.8用定时刺激（强度5V，频率30Hz，波宽2ms，刺激时间10s）的电脉冲刺激迷走神经外周端，观察血压变化。2.4.9按0.1ml/kg体重剂量静脉注射10-2g/L乙酰胆碱，观察血压变化。2.4.10从颈外静脉内取血25μL，测定Hb浓度。2.4.11打开颈动脉三通阀，使动脉血进入放血瓶，持续失血3min后关闭三通阀，终止失血。连续记录放血过程中的血压变化，于失血停止后即刻（0min）、10min、20min、30min分别从颈外静脉处采血25μL，测定Hb浓度。2.4.12新西兰兔用空气注射法或放血法处死。2.5统计方法及数据处理数据使用MicrosoftExcel2010记录并处理，结果以x±s表示；统计学分析采用Student’st-test方法，P0.05表示具有显著性差异。-5-3结果3.1神经、体液因素对新西兰兔动脉血压和心率的作用（具体数据见表1）3.1.1夹闭右侧颈总动脉10s对新西兰兔血压和心率的影响夹闭新西兰兔右侧颈总动脉10s后，收缩压（SP）由105.29±18.94mmHg升高到128.17±26.74mmHg（p0.001），舒张压（DP）由88.78±15.13mmHg升高到107.27±20.50mmHg（p0.001），心率由263.40±21.18bpm升高到270.80±21.21bpm（p0.001）。3.1.25V/30Hz刺激迷走神经外周端对新西兰兔血压和心率的影响电刺激新西兰兔迷走神经外周端后，SP由107.87±18.30mmHg降低至94.94±17.10mmHg（p0.05），DP由92.36±15.59mmHg降低至70.64±19.65mmHg（p0.05），心率由264.20±21.95bpm降低至116.20±78.86