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新课标Ⅰ卷40.【生物——选修3：现代生物科技专题】（15分）某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示。若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞（染色体数目40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目60条）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过________次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是___________________________小鼠，理由是________________________。(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能_______________________________________________________________，体系中出现多种类型细胞的原因是___________________________________________________。(3)杂交瘤细胞中有_________个细胞核，染色体数目最多是__________条。(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_______________________。新课标Ⅱ卷40.【生物——选修3：现代生物科技专题】(15分)植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。回答下列问题：(1)理论上，基因组文库含有生物的___________基因；而cDNA文库中含有生物的____________基因。(2)若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中__________出所需的耐旱基因。(3)将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物____________的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的____________，如果检测结果呈阳性，再在学科网田间试验中检测植株的____________是否得到提高。(4)假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因整合到了________________________（填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。山东卷36.【生物—现代生物科技专题】人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：(1)htPA基因与载体用_____________________________________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________________________技术。(2)为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其_______________。采集的精子需要经过__________________，才具备受精能力。(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是_______________________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行___________________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________________。(4)若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到___________________________________，说明目的基因成功表达。福建卷33.Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的__________________。(2)步骤②中，重组胚胎培养到__________________期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。(3)步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的__________________设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有__________________酶的酶切位点。(4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的__________________，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。海南卷31.【生物—选修3：现代生物科技专题】（15分）下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。请据图回答：1)获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在__________________酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在__________________作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的__________序列，推测出响应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的__________________序列，再通过化学方法合成所需基因。2)利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有__________________、__________________、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。3)由A和载体B拼接形成的C通常称为__________________________。4)在基因工程中，常用Ca2+处理D，其目的是____________________________________。新课标I卷【答案】（1）4YY小鼠的血清抗体效价最高（2）B淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的，且融合率达不到100%（3）1100（4）不能无限增殖【解析】（1）据图分析，第四次注射后X、Y、Z小鼠的血清抗体效价均达到16000以上，小鼠Y的B淋巴细胞产生抗体效价最高，最适用于制备单克隆抗体。（2）融合体系中除了未融合的细胞和杂交瘤细胞之外，还有骨髓瘤细胞和B淋巴细胞的自身融合产物，由于细胞膜具有流动性，且诱导之后的细胞不具有特异性，故体系中会出现多种类型的细胞。（3）杂交瘤细胞形成后，由于核膜具有流动性，故小鼠的免疫B淋巴细胞核与其骨骼瘤细胞核会融合形成一个杂交的细胞核。正常情况下细胞核中的染色体数目为100条，在有丝分裂后期染色体数目临时加倍为200条。（4）未融合的B淋巴细胞经经多次传代培养后，仍然不是能恶性增殖的细胞，同时B淋巴细胞不可能渡过原代培养和传代培养过程中的两次危机达到细胞系水平。新课标Ⅱ卷【答案】（1）全部部分（2）筛选（3）乙表达产物耐旱性（4）同源染色体的一条上【解析】（1）基因文库包括基因组文库和cDNA文库，基因组文库包含生物基因组的所全部基因，cDNA文库是以mRNA反转录后构建的，只含有已经表达的基因（并不是所有基因都会表达），即部分基因。（2）从基因文库中获取目的基因需要进行筛选。（3）要提高植物乙的耐旱性，需要要利用农杆菌转化法将耐旱基因导入植物乙的体细胞中。要检测目的基因（耐旱基因）是否表达应该用抗原抗体杂交检测目的基因（耐旱基因）的表达产物（即耐旱的相关蛋白质）；个体水平检测学科网可以通过田间实验，观察检测其耐旱性情况。（4）如果耐旱基因整合到同源染色体的两条上，则子代将全部表现耐旱，不会出现性状分离。[或“如果耐旱基因整合到同源染色体的一条上，则转基因植株的基因型可以用A_表示（A表示耐旱基因，_表示另一条染色体上没有相应的基因），A_自交后代基因型为AA∶A_∶__=1∶2∶1，所以耐旱∶不耐旱=3∶1，与题意相符。”]山东卷答案：（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）；DNA分子杂交（或核酸探针）（2）超数排卵；获能（处理）（3）显微注射法；性别鉴定；全能性（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）解析：(1)基因工程中首先用同种限制酶剪切目的基因和受体细胞；检测目的基因是否插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交技术；检测目的基因是否在受体细胞中表达，用抗原-抗体杂交技术。(2)促性腺激素的作用可以使母羊超数排卵，获得更多的卵细胞；卵细胞和精子受精作用前需要经过两个准备，一是精子的获能，二是卵细胞的成熟。所以精子需要通过精子获能才具备受精的能力。易错点：孕激素作用是同期发情处理，促性腺激素是促使供体超数排卵。(3)将重组载体导入动物细胞采用显微注射法，所以导入受精卵用显微注射法。为了获得母羊，所以要进行性别鉴定。胚胎分割技术，体现了细胞具有全能型。易错点：重组载体导入受体细胞的方法。(4)根据图示可判断，htPA基因为目的基因，所以在母羊的羊乳中检测到htPA，说明目的基因成功表达。福建卷答案：（1）细胞核（2）囊胚（3）核苷酸序列HindⅢ和PstⅠ（4）蛋白质解析：（1）动物细胞核移植时，应用显微镜操作去除卵母细胞的细胞核。（2）内细胞团位于囊胚内。（3）引物是以目的基因的一段已知核苷酸序列合成的，Rag2基因为目的基因；同一种限制酶切割形成的黏性末端才能直接相连接。（4）从“用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验”可知，应提取治疗后小鼠骨髓细胞的Rag2蛋白进行抗原－抗体检测。海南卷正确答案：(1)逆转录酶DNA聚合酶氨基酸碱基对(2)引物模板DNA(3)重组运载体(4)增大细胞壁的通透性解题思路：(1)目的基因的获取方法有两种：一种是以A的mRNA为模板逆转录得到目的基因；一种是根据目标蛋白的氨基酸序列，推测出DNA碱基对排列顺序，化学合成。(2)PCR扩增DNA之前，需要加入引物、模板基因、脱氧核苷三磷酸、Taq酶等。(3)C叫做重组运载体(4)用钙离子处理大肠杆菌的目的是增大细胞壁的通透性。