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主要内容药物现代色谱法及其应用药物现代光谱法及其应用色谱联用技术及其应用一、毛细管气相色谱分析法（一）色谱柱类型1、普通开管柱（1）壁涂开管柱（2）多孔层开管柱（3）担体涂渍开管柱2、微孔内径开管柱3、大内径开管柱一、药物现代色谱法及其应用（二）进样方式1、分流进样2、不分流进样3、柱头进样4、直接进样（三）毛细管柱的选择和性能评价1、选用毛细管柱的原因2、毛细管柱的选择3、毛细管柱的性能评价（四）应用示例1、原料药中残留溶剂苯的分析2、生物样品中药物的定量分析一、药物现代色谱法及其应用二、手性药物的液相色谱分析法（一）概述建立和发展快速而灵敏的分离（或拆分）和测定对映体药物的方法藉以有效地进行以下四个方面的工作是十分重要和必要的：1、对某些手性药物进行对映体的纯度检查2、生物体液中药物对映体的分离分析研究可探索血药浓度与临床疗效的关系3、在研制手性药物过程中，可分别评价单个对映体的效价、毒性、不良反应以及药动学性质4、必要时，进行手性药物对映体的分离（或拆分）一、药物现代色谱法及其应用（二）手性药物拆分方法与机理“三点手性识别模式”至少要有三个作用力，其中一个要有立体选择性，可以是吸引的，也可以是排斥的。这些相互作用可以是氢键、偶极-偶极作用、静电作用、疏水作用或空间作用。一、药物现代色谱法及其应用（三）手性HPLC拆分方法与分类1、柱前手性衍生2、手性流动相拆分法常用的手性添加剂为：（1）配基交换型手性添加剂（2）环糊精类添加剂（3）手性离子对络合剂3、手性固定相拆分（1）Pirkle型手性固定相（2）蛋白质类手性固定（3）环糊精类一、药物现代色谱法及其应用（四）三类手性方法的比较CDR法优点：应用条件相对简易，只需采用普通HPLC的固定相和流动相，衍生化有利于增加检测灵敏度。缺点：样品中相关化合物须预先分离、衍生化手性试剂的光学纯度高，异构体对的衍生化反应速率不一。一、药物现代色谱法及其应用CMP法优点：不必做柱前衍生化，对固定相无特殊要求，样品的非对应异构化络合具有可逆性且易于制备。缺点：可拆分的化合物范围有限，某些添加剂不够稳定且干扰检测。CSP法优点：适用范围广，制备分离方便，定量分析可靠性较高。缺点：样品有时需做柱前衍生化，对样品结构有一定限制，适用性不及普通HPLC固定相。一、药物现代色谱法及其应用三、毛细管电泳分析法（一）简介毛细管电泳（CE）是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。（二）主要分离模式1、毛细管区带电泳（CZE）2、胶束电动毛细管色（MECC/MEKC）3、毛细管凝胶电泳（CGE）4、毛细管等电聚焦（CIEF）一、药物现代色谱法及其应用（三）HPCE在药物分析中的应用（P412）示例一利巴韦林及各中间体的定量分析示例二复方甘草片中甘草酸、甘草次酸、吗啡和苯甲酸钠的分析示例三血样尿样中巴比妥类药物的分析一、药物现代色谱法及其应用一、近红外分光光度法（一）方法特点1、可获得一系列物理性质的信息2、样品无需预处理3、分析速度快4、灵敏度高5、运用范围广6、便于在线分析和控制二、药物现代光谱法及其应用（二）常见的NIR吸收波长及其结构归属（三）应用1、鉴别2、纯度检查3、含量测定二、药物现代光谱法及其应用二、核磁共振光谱分析法（一）简述核磁共振光谱（NMRS）是利用原子核的物理性质，采用当代最先进的电子学和计算机技术，用于各种分子物理和化学结构的研究。二、药物现代光谱法及其应用（二）定量分析方法1、方法特点1）对于确定的核，其信号强度与质子数目成正比，与化学性质无关。2）用内标法或相对比较发时，需纯品做对照品。3）混合物中不同组分的信号之间很少发生重叠。4）方法简单快速、准确、专属性高，不破坏被测样品。二、药物现代光谱法及其应用2、测定方法（1）内标法（2）相对测量法（三）应用示例1、盐酸普鲁卡因的结构鉴定2、植物中药及其伪品的区别3、亚硝酸戊酯及其吸入剂的含量测定二、药物现代光谱法及其应用三、X射线粉末衍射法（一）X射线简介（二）布拉格方程（三）X射线衍射仪的工作原理（四）应用二、药物现代光谱法及其应用一、气相色谱-红外光谱联用技术（一）简介采用两台红外分光光度计分别记录一个色谱馏分的高波段数和低波段数光谱，从气相色谱柱流出的馏分直接进入红外检测池，不需进行样品转移，也无需终止气相色谱仪的操作。三、色谱联用技术及其应用（二）GC-FTIR系统组成与光谱检索GC-FTIR系统由色谱仪，光谱仪，接口三个部分组成常用的光谱检索程序有四种：（1）差示绝对值程序（2）最小二乘方程序（3）导数绝对值程序（4）导数平方程序三、色谱联用技术及其应用（三）应用示例GC-FTIR联用分析麝香风湿油（P431）二、气相色谱-质谱联用技术（一）简述能使样品的分离、鉴定和定量一次完成，对于药物分析的发展起了很大的促进作用。（二）色谱柱分为填充柱和毛细管柱。三、色谱联用技术及其应用（三）接口接口是解决气相色谱和质谱联用的关键组件，起传输试样，匹配两者工作流量的作用。分三类：直接导入型，分流型，浓缩型（四）定量分析方法1、总离子流色谱法2、质量碎片图质谱法三、色谱联用技术及其应用三、液相色谱-质谱联用技术（一）概述HPLC-MS集HPLC的高分离能力和MS的高灵敏度、极强的结构解析能力、高度的专属性和通用性、分析速度快于一体。样品预处理简单，一般不要求水解，或者衍生化，可以直接用于药物及其代谢物的同时分离和鉴定。三、色谱联用技术及其应用（二）接口装置1、粒子束接口2、热喷雾接口3、大气压离子化接口4、动态快原子轰击法（三）应用示例（P440）1、曲安奈德中特殊杂质的检查2、血样和尿样中秋水仙碱的LC-ISP-MS定性定量分析三、色谱联用技术及其应用四、液相色谱-核磁共振联用技术（一）方法特点对色谱条件要求不高，使用普通色谱柱，重水，其余使用甲醇、乙腈、四氢呋喃等有机溶剂，也可以向流动相中加酸、碱和各种缓冲盐离及离子对试剂。三、色谱联用技术及其应用（二）基本操作模式1、连续流动操作模式2、停流操作模式3、峰存贮操作模式（三）应用示例大鼠体内抗心率失常药氯苄律定的代谢研究（P442）三、色谱联用技术及其应用