2,乙肝疫苗

乙肝疫苗乙肝是乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的一种传染性疾病。HBV不仅能引起急性肝炎、慢性肝炎，更为严重的是它与肝硬化、肝癌的发生有密切关系。据世界卫生组织(WHO)报道，全球约有20亿人感染过乙肝病毒(HBV)，3.5亿人患有慢性肝病，其中15.25%发展为肝硬化和肝癌，每年因此疾病死亡50万~75万人.。我国乙肝的感染率约60%，乙肝表面抗原的携带率约10%，即有1.2亿人携带乙肝病毒；每年约有30万人最终将死于乙肝有关的慢性疾病。乙肝人群现状.如何判断是否感染乙肝？乙肝两对半是国内医院最常用的乙肝病毒(HBV)感染检测血清标志物。乙型肝炎病毒免疫学标记一共3对，即表面抗原和表面抗体、e抗原和e抗体、核心抗原和核心抗体。由于核心抗原在血中不易测到，试剂盒也不过关，所以还剩两对半抗原抗体，这就是人们常说的“乙肝两对半”检查，或称“乙肝五项”检查。平常所说得大三阳，为急性或慢性乙肝，病毒复制活跃，传染性强。小三阳为急性或慢性乙肝，但传染性较弱。乙肝两对半，是用来排查机体有无感染乙肝病毒，对于乙肝传染性强弱仅能做一个初步的估计指标。HBV-DNA检查，是用来检查乙肝患者体内的乙肝病毒数量、复制指标，能够能为精确的判断出乙肝病毒在体内的复制、传染强弱情况。”“乙肝疫苗乙肝疫苗是一种预防乙型肝炎的疫苗，乙肝疫苗接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗体，这种抗体存在于人的体液之中，乙肝病毒一旦出现，抗体会立即作用，将其清除，阻止感染，并不会伤害肝脏，从而使人体具有了预防乙肝的免疫力。因此乙肝疫苗成为生活中不可缺少的一把保护伞。乙肝疫苗可分为血源乙肝疫苗从乙型肝炎病毒携带者血浆中分离乙肝表面抗原(HbsAg)，经处理后而制成。基因工程疫苗基因工程乙肝疫苗是采用基因工程技术生产的，即构建含有乙肝表面抗原基因的重组质粒，然后转染相应的宿主细胞，如酵母、CHO细胞，生产乙肝表面抗原蛋白。利用重组酵母生产的叫重组酵母乙肝疫苗，利用CHO细胞生产的叫重组CHO乙肝疫苗。血源乙肝疫苗的制备：是以密度梯度离心为主，结合盐析和超滤为辅的综合纯化方法。在HBsAg阳性血浆内加入氯化钙，除去纤维蛋白。加入硫酸铵经低速离心收集沉淀即为HBsAg的粗提物。精提纯，采用超速离心技术。可将HBsAg与球蛋白有效分离，再通过以蔗糖为介质的速率区带离心才能彻底分离。表面抗原的灭活，HBsAg经胃酶消化后通过洗涤浓缩，将残存的微量杂蛋白彻底去除。123血源乙肝疫苗自1985年以来，我国一直采用接种血源乙肝疫苗预防乙肝，血源乙肝疫苗对控制我国乙肝大面积流行曾起了很大作用，但是，由于血源乙肝疫苗需用乙肝病毒表面抗原携带者的血浆为原料，它具有一些自身无法克服的缺点。血源乙肝疫苗的缺点：乙肝表面抗原携带者由于已感染乙肝病毒，在此情况下，再抽取其血浆作为乙肝疫苗原料，对携带者的身体健康有损害；1疫苗的生产受到乙肝病毒表面抗原携带者血浆来源和质量限制，无法大规模稳定生产；2血源乙肝疫苗的缺点：在表面抗原阳性血浆的采集、运输和加工过程中，存在着引发血源性传染病流行的可能性；3在血源乙肝疫苗的生产过程中，虽采用三步灭活工艺，但三步灭活不足以将血源中所有已知和未知的潜在致病因子全部灭活，难以最大限度地保证血源乙肝疫苗受种者绝对安全；4如上所述，为了灭活乙肝病毒，需采用三步灭活工艺，但三步灭活对疫苗的免疫原性有影响。因此，由于血源乙肝疫苗的内部矛盾性，决定了血源乙肝疫苗只能作为一种过渡性疫苗，1997年卫生部专门下发57号文件，具体部署用基因工程乙肝疫苗取代血源乙肝疫苗事宜。血源乙肝疫苗的缺点：重组酵母乙肝疫苗重组酵母乙肝疫苗主要以美国Merck公司公司为代表。在国内主要厂家是：北京天坛生物，深圳康泰生物，大连高新，华兰生物。重组酵母的构建使用重组酵母的原因（1）酵母对培养基的要求低，价廉易得。（2）.酵母细胞生长快，故生产率高。（3）.动物细胞生长慢，容易染菌，对操作要求严。（4）.酵母系统容易放大，动物细胞系统放大难。酵母乙肝疫苗生产工艺酵母乙肝疫苗生产工艺基因重组乙肝疫苗主要厂家：长春生物制药研究所，兰州生物技术研究所，武汉生物技术研究所，成都生物技术研究所，华北制药集团，北京华尔盾公司。基因重组乙肝疫苗重组[中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)乙肝疫苗]是采用基因工程技术将无传染性的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的S基因片段克隆到载体，用重组载体转染真核生物CHO细胞，通过细胞培养、增殖、分泌出HBsAg到培养液中，收集分泌液，经高速离心、纯化、除菌后，加入佐剂吸附(氢氧化铝)而制成。基因重组乙肝疫苗CHO细胞属哺乳动物细胞类，它是基因工程表达系统中最高等的宿生细胞，其表达产物更接近于天然产品。同重组酵母乙肝疫苗相比，重组CHO细胞乙肝疫苗具有以下特点：CHO细胞表达的重组乙肝疫苗是高等真核细胞表达产物，其天然结构较低等的真核细胞酵母表达的HBsAg蛋白更适合人体吸收，生产过程中不同于酵母使用硫氰酸盐处理，安全性好。乙肝疫苗纯度的测定疫苗纯度的测定乙肝疫苗是通过肌肉注射的方式进入人体系统，为了降低疫苗内杂质含量对人体产生的不良影响，必须进行疫苗的纯度检测。乙肝疫苗表面抗原的纯度检定是疫苗质量控制的关键手段之一。目前分析测定重组乙型肝炎疫苗纯度的HPLC常用方法是应用TSK-G5000PW分子筛。主要区别：因采用的毒株和培养工艺不一样，所以会引起：产生抗体数量的多少，防疫时间的长短，副反应的大小等方面的差异。国内的疫苗一般可维持5年左右的免疫（保护）作用，进口的可以达到15年以上，这里所讲不是我们老百姓所说的保护性抗体存在15年，而是人体的细胞记忆。价格相差很大：北京生产的疫苗每针价格在三四十元左右，深圳康泰生产的疫苗每针价格也在三四十元左右，大连生产的疫苗每针价格在七八十元左右。进口的儿童肝炎疫苗价格在284元左右。”“国产与进口乙肝疫苗的区别：乙肝疫苗的保存疫苗的保存疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在室温下其效价的损失亦较慢。”“乙型肝炎疫苗全程接种共3针，按照0、1、6个月程序，即接种第1针疫苗后，间隔1及6个月注射第2及第3针疫苗。新生儿接种乙型肝炎疫苗越早越好，要求在出生后24h内接种。注射乙肝疫苗后24小时内注射部位可出现触痛、疼痛，2-3天内自行好转。1-2周内可能出现一过性发热反应，接种部位可出现硬结，也有可能会出现过敏性反应，甚至有些人不会接种成功。”“联合疫苗可减少针剂次数，减轻儿童痛苦，提高疫苗免疫覆盖率。复合物抗原可比单纯抗原更有效地刺激T细胞增殖，诱导细胞介导免疫，产生高水平的抗一HBs，从而降低或清除体内HBV。另外，应用新型疫苗佐剂不再是单纯提高机体对抗原的应答水平，而更着重于选择性地诱导产生有效防御相应病原体感染的特异性应答类型。目的在于诱导不同亚型的Th细胞的分化和增殖，刺激产生不同的的细胞因子和抗体亚型，产生抵抗HBV的保护性免疫反应。因此，开发新型佐型CHO细胞乙肝疫苗是治疗性乙肝疫苗研究的又一途径。