脂肪酸的β-氧化实验楼211室

脂肪酸的β-氧化实验代谢部分实验目的1.了解脂肪酸的β-氧化作用；2.通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定β-氧化作用的方法及其原理。实验原理脂肪酸的β—氧化脂肪酸在一系列酶催化下，先活化为脂酰CoA，然后在脂酰基α,β-碳原子上进行脱氢、加水、再脱氢、硫解，在α与β-碳原子之间断裂，每次均生成一个含二碳单位的乙酰CoA和较原来少二个碳单位的脂肪酸，如此不断重复进行的脂肪酸氧化过程称为脂肪酸的β—氧化作用。酮体酮体的生成：乙酰辅酶A的代谢结局在肝脏中脂肪酸β-氧化生成的乙酰CoA，绝大多数通过TCA循环彻底氧化成二氧化碳和H2O。有一部分转变成乙酰乙酸、β-羟丁酸及丙酮。这三种中间产物统称为酮体(ketonebodies)：β-羟丁酸约70％;乙酰乙酸约30％;丙酮含量极微酮体的利用肝脏是生成酮体的器官，但肝脏缺乏利用酮体的酶，因此不能利用酮体。酮体生成后进入血液，输送到肝外组织利用，酮体进一步分解成乙酰CoA参加三羧酸循环。酮体的生理意义在饥饿期间酮体是包括脑在内的许多组织的燃料，因此具有重要的生理意义。酮体其重要性在于，由于血脑屏障的存在，除葡萄糖和酮体外的物质无法进入脑为脑组织提供能量。饥饿时酮体可占脑能量来源的25%-75%。酮体过多会导致中毒。避免酮体过多产生，就必须充分保证糖供给。。新鲜肝糜+丁酸丙酮在碱性的条件下，丙酮与碘生成碘仿。反应式如下：2NaOH+I2→NaIO+NaI+H2OCH3COCH3+3NaIO→CHI3+CH3COONa+2NaOH碘仿剩余的碘，可用标准硫代硫酸钠滴定。NaIO+NaI+2HCl→I2+2NaCI+H2OI2+2Na2S2O3→Na2S4O6+2NaI根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。试剂和器材1.材料新鲜兔肝2.试剂(1)Locke氏溶液：取0.9g氯化钠、0.042g氯化钾、0.024g氯化钙、0.015g碳酸氢钠及0.1g葡萄糖，溶于水中，稀释到100ml(2)0.1mol/L碘溶液:称取12.7g碘和约25g碘化钾,溶于水中,稀释到1000ml,混匀,用标准硫代硫酸钠溶液标定.(3)pH7.6,mol/L的磷酸缓冲液.(4)0.2mol/L丁酸溶液:取18ml正丁酸,用1mol/L氢氧化纳溶液中和至pH=7.6,并稀释至1000ml。(5)15%三氯乙酸溶液。(6)10%氢氧化钠溶液。(7)10%盐酸溶液。3.器材玻璃皿锥形瓶（50ml）试管及试管架移液管(2.5ml)漏斗微量滴定管(5ml)剪刀及镊子小台秤恒温水浴操作步骤取50ml锥形瓶两个，编号1、2各加6mlLocke氏溶液和4mlpH7.6的磷酸缓冲液在1中加入6ml0.2mol/L丁酸溶液，2作为对照不加丁酸称取肝组织两份，每份2g,剪成碎块，加入1、2中混匀后，37℃保温1.5h1.5h后，取出1、2各加入4ml15%三氯乙酸溶液在2号瓶内追加6ml0.2mol/L丁酸溶液混匀，静置15min后过滤分别吸取5ml滤液，放入另外两个锥形瓶中各加5ml0.1mol/L碘溶液和5ml10%NaOH摇匀后静置10分钟各加入5ml10%HCl中和用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘滴至浅黄色时，加几滴淀粉摇匀，并继续滴到蓝色消失记录滴定样品与对照所用的硫代硫酸钠的毫升数数据处理丙酮含量=（B－A）×0.9667×205式中，B为测定对照实验所消耗的0.1mol/L硫代硫酸钠溶液ml数；A为滴定样品所消耗的0.1mol/L硫代硫酸的溶液ml数；0.9667为1ml0.1mol/L硫代硫酸钠溶所相当的丙酮mg数。