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编号：毕业论文(设计)题目多巴胺纳米粒子的制备与释药性能指导教师崔淑芹学生姓名李梅学号201102004040专业生物技术（生物制药方向）教学单位德州学院医药与护理学院（盖章）二O一五年五月二十日本科生毕业论文原创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，论文中不含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得德州学院或其他教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的相应责任。学位论文作者签名：年月日本科生毕业论文使用授权声明德州学院有权保留并向国家有关部门或机构送交毕业论文的复印件和磁盘，允许毕业论文被查阅和借阅。本人授权德州学院可以将本科毕业论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存、汇编毕业论文。毕业后若使用该成果需征得德州学院及指导教师同意。论文作者签名：年月日指导教师签名：年月日目录摘要...........................................................................1关键词：.......................................................................11引言.........................................................................11.1帕金森病的发病机制及治疗方法研究进展.......................................11.2多巴胺及其检测方法的概述...................................................21.3载药微粒的概况.............................................................32实验部分.....................................................................52.1实验材料与设备.............................................................52.2多巴胺标准浓度——吸光度曲线的绘制.........................................62.3多巴胺纳米微球的制备与表征.................................................72.3.1多巴胺纳米微球的制备.....................................................72.3.2多巴胺纳米微球粒径和电位的检测...........................................82.3.3多巴胺纳米微球的包封率和载药量...........................................82.4多巴胺纳米微球的释药性能...................................................83结果与讨论...................................................................93.1实验结果...................................................................93.1.1多巴胺纳米微球的粒径、Zeta电位、包封率和载药量...........................83.1.2多巴胺纳米微球释药性能...................................................83.2结果讨论...................................................................94结论.........................................................................9参考文献:.....................................................................10谢辞..........................................................................12德州学院医药与护理学院2015届生物技术（生物制药方向）毕业论文多巴胺纳米粒子的制备与释药性能李梅（德州学院医药与护理学院，山东德州253023）摘要：本实验以盐酸多巴胺、聚乳酸（PLA）、聚乙二醇（PEG-400）、吐温（Tween-80）为原料，在弱酸性环境下采用挥发复乳法制备荷载多巴胺的纳米微球，同时制备空载纳米微球作为空白对照，最后对纳米微球进行表征并通过透析袋法检测药物释放情况。实验结果表明，多巴胺纳米微球具有较好的表征和缓释作用。关键词：帕金森病；多巴胺；纳米微球；表征；释药性能1引言1.1帕金森病的发病机制及治疗方法研究进展帕金森病(Parkinson'sdisease，PD)又名震颤麻痹，是一种发生于黑质和黑质纹状体通路变性进而导致黑质多巴胺能神经元选择性变性死亡的神经退行性疾病。帕金森病已成为继阿尔海默茨病(Alzheimer'sDisease)之后的严重威胁中老年人健康和生活质量的第二大进行性退性神经功能障碍性疾病。因此对帕金森氏病的研究也就成了国内外热点研究课题之一，而且对其防治也已成为世界药物开发研究的重点[1]。发病机制：大脑内存在多条多巴胺(DA)递质通路,最重要的一条通路为黑质-纹状体通路。现已明确DA是由黑质制造后，沿黑质纹状体通路，运输至新纹状体,并贮藏在此处的神经末梢小泡中。帕金森病的病变主要在中脑的黑质，其次为黑质纹状体通路，致使DA产生减少或运输障碍，导致纹状体内多巴胺神经递质水平降低[2]。当纹状体内多巴胺神经递质水平降至很低时,才会出现帕金森病的临床症状[1]。其临床特征主要表现为进行性加重的运动迟缓、肌强直、静止性震颤、姿势步态异常、表情减少等。帕金森综合征是以震颤麻痹、运动障碍、姿势步态异常、肌强直为主要临床表现的一组疾病的总称。PD病情呈进行性加重，严重限制了病人的活动能力以及影响了病人的生活质量，若不进行积极有效的治疗，病人的生存期明显缩短，晚期会因长期卧床而死于肺炎和尿路感染等并发症。帕金森病的病因尚不明确，有研究表明，PD是环境因素、年龄、感染、衰老、氧化刺激、过多的自由基形成及神经生长因子缺乏、遗传变异等多种因素共同作用的结果。目前仍没有有效的治疗措施，所有针对PD的治疗都是控制症状,目前还不能根治[3]。治疗方法研究进展：帕金森病治疗方法有多种，如药物治疗、手术治疗、基因治疗、干细胞疗法等，手术德州学院医药与护理学院2015届生物技术（生物制药方向）毕业论文治疗有神经细胞移植、脑立体定向损毁术、深部脑刺激（DBS）等，基因治疗和干细胞治疗大都处于研究阶段，主要临床治疗方法为药物治疗[4]。目前治疗帕金森病的药物有多巴胺受体激动剂、左旋多巴类药、抗胆碱能药、抗组织胺药、单胺氧化酶β抑制剂、儿茶酚胺-氧位-甲基转移酶抑制剂、兴奋性氨基酸受体相关药物、铁螯合剂、选择性5-HT再摄取抑制剂（SSRIs）、其他药物等。左旋多巴替代疗法从60年代开始到目前为止一直是治疗帕金森病的“金标准”。左旋多巴能在短期内明显改善患者的临床症状，但不能减慢疾病的进程，并且，治疗过程中需不断加大剂量，长期大量用药产生较严重的远期副作用，导致机体敏感性下降、晨僵、少动、异动症、开-关现象等，严重影响患者的生活质量[5]。因血脑屏障的存在，98%以上的小分子物质和100%的大分子药物很难入脑发挥作用。除非具有良好的脂溶性且分子量低于600Da的药物分子，其他治疗药物都难以渗透进入脑内，目前采用脑靶向药物纳米递药载体来解决此问题成为广泛研究的课题[10]。本课题选择合适工艺制备载有多巴胺的复合纳米微球，将多巴胺直接输送到中枢神经系统，发挥药物的脑靶向治疗作用，最大限度降低用药量，减少药物对帕金森病患者的副作用，发挥微球对帕金森病的长期缓解作用，提高患者生活质量[6]。1.2多巴胺及其检测方法的概述多巴胺概况：3,4-二羟基苯乙胺，又称多巴胺（Dopamine,DA）是人脑儿茶酚胺类神经递质中含量最丰富的一种，存在于神经组织和体液中，是脑功能的物质基础，作为神经递质调控中枢神经系统的多种生理功能。DA能被空气或其它氧化剂氧化,变成聚多巴胺，光或碱都能催化氧化反应的进行，DA能稳定存在于弱酸性的醋酸—醋酸钠缓冲溶液中[7]。多巴胺对运动控制其重要作用，脑内多巴胺神经功能失调是引起帕金森氏症和阿尔茨海默病的重要原因。根据研究总结，多巴胺可治疗抑郁症；作为药物,多巴胺有扩张内脏血管的作用,能增强心肌收缩力,增加血流量,有助于改善休克时重要脏器的血液供应,适用于心源性、感染性、失血性休克和心脏停搏时起搏升压。多巴胺类药物一般采用静滴给药，口服易在肠肝被破坏而不能达到有效血药浓度[8]。多巴胺在体内可迅速被儿茶酚氧位甲基转移酶、单胺氧化酶、多巴胺β-羟化酶代谢，代谢产物可迅速由尿排出。自上世纪70年代起开始在临床上使用多巴胺受体激动剂治疗帕金森病。多巴胺受体激动剂有麦角类和非麦角类两类，麦角类多巴胺受体激动剂在使用过程中会出现导致心脏瓣膜病变、胸膜肺纤维化等副作用，非麦角类则无[9]。德州学院医药与护理学院2015届生物技术（生物制药方向）毕业论文多巴胺检测方法：如何简单快速的检测多巴胺是全世界研究者们共同关注的课题，目前测定多巴胺的测定方法有分光光度法、质谱法、荧光光度法、化学发光法、电化学分析法、色谱法等[10]。分光光度法：陈家柏等利用分光光度法测定血液中微量多巴胺浓度。化学发光法具有仪器简单、快速、灵敏度高等特点，越来越受到人们的重视，在分析工作中广泛应用。王树皓等建立了反相流动注射抑制化学发光测定盐酸多巴胺的新方法[11]。原理是利用碱性介质中，盐酸多巴胺对鲁米诺-铁氰化钾化学发光反应体系的强烈抑制作用。牛凌梅等研究发现，在硫酸环境下，高锰酸钾氧化多巴胺能形成化学发光体系，该方法可用于针剂中多巴胺的测定。发光强度与多巴胺的浓度在1.25～25.0mg/L呈良好的线性关系。化学荧光法：颜梅等建立了一种基于双分子识别荧光猝灭法高选择性测定多巴胺的新方法，该方法已成功用于多巴胺注射液、血清及尿样中多巴胺的测定。陈亚红等建立了酶催化荧光光谱法盐酸多巴胺的新方法具有选择性好、操作简单、灵敏度高等特点，已成功应用于药物制剂中盐酸多巴胺含量的测定。液相色谱法:高效液相色谱作为检测儿茶酚胺类物质的重要手段之一，能够满足痕量或超痕量儿茶酚胺类物质的分析，是目前研究最多的检测方法，对基础研究和临床诊断具有重大意义[12]。电化学方法：多巴胺分子内含有2个容易被氧化的酚羟基，因此具有电化学活性，可用电化学方法对其进行定量检测。其他方法：邢宪荣等利用分子印迹技术构建了新型检测多巴胺的分子印迹电化学传感器[13]。本实验选择分光光度法测定多巴胺浓度。根据多巴胺和亚硝酸钠在水介质中反应生成的产物有较高吸光度，设计了用紫外分光光度法测定多巴胺纳米微球复乳中多巴胺含量的方法。当多巴胺质量浓度在0～10μg/mL范围内时，与吸光度之间遵从朗伯比尔定律，表观摩尔吸光系数为1.85×104L·moL-1·cm-1，检测限为0.1μg/mL。根据在pH5.90时多巴胺和亚硝酸钠的反应产物在300nm处有最大吸收而建立了测定多巴胺纳米微球复乳中多巴胺浓度的分光光度法[14]。1.3载药微粒的概况载药微粒是纳米、微米技术与现代