血细胞分析仪(BloodCellAnalyzer)是指对一定体积全血内血细胞异质性进行自动分析的常规检验仪器。血液分析仪主要完成以下两大功能:⑴血细胞计数:红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白。⑵血细胞分类:白细胞中的淋巴、中性、嗜酸、嗜碱、单核、幼稚细胞;红细胞中的网织红细胞。血细胞计数:早期的血液分析仪主要用来计数红、白细胞白细胞分类计数:带电脑的显微镜下辨认细胞的图象识别技术效率低,受制片、染色技术的影响大在计数细胞数不多时,重复性较差检测白细胞从二分群、三分群发展到五分群半自动血细胞分析仪;全自动血细胞分析仪;按自动化程度血细胞分析工作站;血细胞分析流水线;按检测原理电容型、光电型、激光、电阻抗型、联合检测型、干式离心分层型、无创型按对白细胞分类的水平:二分群、三分群、五分群、五分群网织红(红细胞)小孔电阻抗法测定原理在负压的吸引下血细胞依次通过小孔,依次排开等体积电解液;小孔截面内的电解液电阻值的变化,在恒流源的负载电阻上引起等比例的电压变化,产生电压脉冲;电压脉冲的个数与细胞个数相当,脉冲幅度与细胞体积成正比。将脉冲送入相应的计数通道,通过计算得到某类细胞个数。采用Coulter原理,即小孔电阻抗法装有宝石小孔的小孔管置与小孔管内外的铂金电极两电极间的恒流电源小孔上端的恒定负压在进行血细胞分析时,白细胞和血红蛋白为一个检测通道(小孔直径为100µm);红细胞和血小板为一个检测通道(小孔直径为70µm)。结果采用直方图显示。联合型检测法基本原理单纯依靠细胞体积大小来进行白细胞五分类是难以做到的。必须采用一些其他检测手段联合应用来进行白细胞五分类。(联合检测型)常用方法有:高频电磁波(或称射频)传导法、细胞化学染色法、特殊溶血剂法、激光散射法(测不同角度的散射及激发光)其白细胞总数、红细胞、血小板及血红蛋白的测定方法仍基本沿用“三分类”型分析仪的方法。绝大多数五分类血细胞分析仪在检测通道上都采用了流式细胞分析技术。流式细胞分析技术的检测光路可分为鞘流通道、激发光源(多为激光)、散射光检测、吸收光检测、荧光检测等几个方面。散点图:五分类血细胞分析仪白细胞分类结果均采用散点图的形式来显示。红白细胞总数血小板仍采用直方图显示。图中纵坐标为体积;横坐标为吸光度。各种不同类型的白细胞根据其体积与吸光度的的数值标记在二维坐标的相应位置。几种有代表性的白细胞五分类型分析仪①电阻抗DC高频传导RF和激光散射Scatter联合检测法:即所谓VCS技术V代表体积,采用电阻抗法计数血细胞和测量其体积C代表传导性,主要测量血细胞内部的结构,细胞内核浆比例S代表散射,用于测量细胞表面不同的结构及颗粒单一通道上同时用着三种方法对同意白细胞进行测量,在三维的图上将个细胞较好地分开,准确分类。②激光散射和细胞化学染色联合检测法稀释液中加入髓过氧化物酶MPO的第五,过氧化氢和色原可使MPO的细胞胞浆染色,由于不同种类白细胞含MPO不同,因此可以通过染色的深浅加以分别。加入特殊溶血剂使得除嗜碱细胞以外的细胞全部裸核化。用两个流式通道进行测定,髓过氧化物酶通道(卤素灯光源,侧吸光度与散射光);嗜碱性/核叶通道(激光光源,测高角度散射光与低角度散射光)。通道还同时进行红细胞、血小板及网织红细胞的测定。③多角度激光偏振光散射检测+电阻抗联合检测法完全用激光散射方法进行白细胞分类,其测散射光所用的角度为四个,即0°,10°,90°和90°Δ消偏振。④电阻抗和射频传导联合检测+特殊溶血剂法:淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测通道(DC+RF)嗜碱性细胞检测通道(特殊溶血剂)嗜酸性细胞检测通道(特殊溶血剂)幼稚细胞检测通道(硫化氨基酸)血液分析仪网织红细胞检测原理:用激光流式细胞分析技术与细胞化学荧光染色技术联合对Rct分析,即利用网织红细胞中残存的碱性物质-RNA,在活体状态下与特殊的荧光染料结合,激光激发产生荧光,荧光强度与DNA含量成正比,用流式细胞技术检测单个的网织红细胞的大小和细胞内RNA的大小和细胞内RNA的含量及Hb的含量,由计算机数据处理系统综合分析检测数据,得出网织红细胞计数及其他参数。血细胞分析仪结构机械部分:自动进样器、分血器、稀释器、混匀器、定量装置、正负压泵、马达、电磁阀。电子部分:主电源、温度控制、液位控制、压力控制运动控制、信号处理、故障报警。血细胞检测系统:①小孔法电阻抗检测系统,主要用于白细胞“二分群”、“三分群”。②光散射检测系统,与小孔阻抗检测系统联合使用,用于白细胞“五分群”。血红蛋白测定系统:由光源、透镜、滤光片、流动比色池、光电传感器构成波长为530nm-550nm的流动比色系统。计算机存储处理系统:白细胞“五分群”的血细胞分析仪多采用仪器内部微处理器加外部计算机的系统形式。采用这种方式能够使仪器处理标本的速度更快,存储量更大,图形结果显示更为方便。微生物检验净化工作台是一种装有高效过滤器(HEPA)能够在工作台面上保持提供洁净空气的装置。根据不同规格的高效过滤器分别提供100级,1000级,10000级的空气洁净度。净化工作台根据气流方向分为垂直气流通风方式和水平气流通风方式两种。净化工作台只能在工作台面保持洁净空气,但不能对操作人员和环境提供保护。生物安全柜是进行生物实验最常使用的操作设备,是防止操作处理过程中某些含有危险性或未知性生物发生气溶胶散逸的箱形空气净化负压安全装置。功能:可以为操作人员提供一个安全的屏障,对可能导致感染的病原体与实验验室人員加以隔离,並使实验室的內外环境均可获得过滤的干净空气。生生物物安安全全柜柜的的基基本本工工作作原原理理特特殊殊的的气气流流设设计计使使柜柜体体开开口口处处将将柜柜内内空空气气向向外外抽抽吸吸,,使使柜柜内内保保持持负负压压状状态态,,通通过过垂垂直直气气流流保保护护工工作作人人员员;;外外界界空空气气经经过过高高效效过过滤滤器器进进入入安安全全柜柜,,产产生生洁洁净净垂垂直直向向下下的的气气流流形形成成洁洁净净工工作作区区,,以以避避免免处处理理样样品品被被污污染染;;柜柜内内的的空空气气经经过过另另一一高高效效过过滤滤器器再再排排放放到到大大气气((环环境境保保护护))安全柜的使用其最终目的在于提供人员、环境及样品适当的防护与品质生物安全水平(1-4级)是由美国疾病预防控制中心(CDC)和国家健康研究院(NIH)共同颁布的。生物安全1级的媒质:普通无害细菌、病毒等微生物;生物安全2级的媒质:一般性可致病细菌、病毒等微生物;生物安全3级的媒质:烈性/致命细菌、病毒等微生物,但感染后可治愈;生物安全4级的媒质:烈性/致命细菌、病毒等微生物,感染后不可治愈。生物安全柜的分类目前根据欧洲EN12469标准;美国NSF49标准,中国YY0569-2005标准,生物安全柜可分为三个级别。ClassⅡ生物安全柜能够提供对人和环境及样品的保护,该级别的生物安全柜广泛应用于医院临床、生命科学、和制药业实验室。ClassⅡ生物安全柜采用特殊的气流设计,使进入操作区可能遭受污染的气体以不流经操作台面为原则,为柜內提供一个洁净环境使无菌的操作得以完成。前部工作开口可以维持合适的箱内气流,箱内有经过HEPA过滤垂直向下无指向的气流。排出的气流经过HEPA过滤排到室内或专用管道。细胞培养箱是一种进行细胞培养的实验室仪器。其主要功能是通过模拟生物体的温度、湿度、调节培养液pH值等条件进行生物细胞的培养。细胞培养箱根据其模拟生物体功能的不同可以分为温度培养箱、霉菌培养箱、二氧化碳培养箱、三气培养箱,厌氧培养箱等分类1电热恒温培养箱5~50℃隔水式气套式没有制冷装置所以实际温度高于环境温度5~8℃2低温恒培养箱加入制冷装置-10~50℃霉菌培养箱3二氧化碳培养箱最为广泛PH值可调浓度控制在0~20%(热导T/C传感器;红外IR传感器)湿度>95%4三气培养箱CO2基础上再加入氧气氮气。自动血培养仪工作原理:主要通过自动监测培养基中的混浊度、PH值、代谢终产物CO2的浓度,荧光标记底物或代谢产物等的变化,定性地检测微生物的存在培养系统培养瓶(需氧厌氧小儿专用结核菌高渗中和抗生素)培养仪(恒温装置,震荡培养装置)数据管理系统检测系统自动血培养检测系统的工作基础:检测细菌和真菌生长时所释放的CO2来作为血液中有无微生物存在的指标。仪器采用的原理:1导电性和电压为基础的血培养系统2应用测压原理的血培养系统:ESP系列;灵敏的自动化菌血测试系统3用光电原理检测的血培养系统Bio-Argos系统Bact/Alert系统Bacter9000系列(荧光增强技术)Vital系统(荧光衰减技术)分类生物安全级别应用ClassⅠ1、2、3低,中等生物风险样品ClassⅡ1、2、3低,中等生物风险样品ClassⅢ4高等生物风险样品NSF分类一般描述ClassⅡTypeA170%气体循环,30%气体经HEPA过滤排出(正压)ClassⅡTypeA270%气体循环,30%气体经HEPA过滤排出(负压)ClassⅡTypeB130%气体循环,70%气体经HEPA过滤专用风道排出ClassⅡTypeB2无气体循环,100%气体经HEPA过滤专用风道排出Alert原理:每一个培养瓶底部都有特殊的NovelCO2感应器,有半渗透性薄膜将培养基与感应器隔离,只有CO2能通过薄膜。当培养瓶内有微生物生长,其释放的CO2可渗透至感应器,经水饱和后产生H+,使pH发生变化,感应器的颜色也随之改变,可从原来的深绿色变为黄色。9000原理:用荧光探测技术连续测定封闭培养瓶内微生物代谢引起的CO2浓度变化以检测是否有微生物生长繁殖。微生物在生长过程中消耗培养瓶内的营养物质,代谢引起的CO2浓度变化,而CO2浓度改变可直接激活培养瓶底部包埋的对CO2浓度变化高度敏感的荧光物质,在二极管的激发下荧光物质释放荧光,LED(光电比色检测仪)将连续探测到的荧光强度输入计算机,绘出微生物生长曲线。荧光强度变化可直接反应培养瓶内CO2浓度变化。阳性瓶的判断:荧光的线性增加或荧光产量的增加Vital系统(荧光衰减技术)原理:采用均质荧光技术检测微生物的生长。液体培养基内含有荧光物质的分子,微生物在生长代谢过程中可产生质子(培养基变酸)、电子(培养基还原)和各种带电荷的原子团(CO2、HCO3-),荧光分子接受了这些物质后,结构发生变化而成为无荧光的化合物。用一个独特的光学系统检测每个培养瓶发出的荧光,用于判断其中有微生物存在。微生物数码分析鉴定系统微生物数码分析鉴定是一种微量、快速的微生物鉴定系统。根据细菌的生物学性状及代谢产物的差异,采用多种生化反应系统鉴定细菌,一般由10-24项生化指标组合而成,通过对结果的判定,得出一个3-7位得数据,查阅编码手册即可获得相应的细菌名称。与计算机联合应用,快速简便。种类API系统;Micro-ID系统;Minitek系统;肠杆菌-MB12E系统;氧化发酵鉴定系统API鉴定系统原理:半自动化鉴定系统,采用数值鉴定法,将测试菌加入试验条,在普通孵育箱孵育18-24h再加入附加试剂,根据各种颜色变化,人工判读结果,再转换成数码API采用的是新型显色(荧光)底物,快速检测细菌的胞外或胞内酶(E)VitekⅠ鉴定系统:原是美国宇航局太空计划中用于细菌分析的一部分,90年代由bio·MerieUXVitek生产为自动化鉴定仪。工作原理:采用有数码原理,30个微量生化反应池、细菌生长池内浊度增加,透光度减少,仪器一小时自动测定一次透光度,最终与计算机内模型菌透光度比较,得出阳性结果:Microscan鉴定系统常规显色板快速荧光板菌种接种到测试板上,35℃2h孵育,通过荧光底物的水解以及底物被利用后pH值的变化、特殊代谢副产物的生成率进行菌种鉴定。其他三种快速显色板(苛氧菌板、厌氧菌板、酵母菌板)抗菌药物敏感性试验的检测原理微量肉汤稀释法测定;根据回归分析法的原理,计算机将各小池每小时细菌生长的结果进行回归分析,所得斜率值与经典方法所测MIC值进行比较,最后测出测试菌对某抗菌药物的MIC值。根据NCCLS标准得到相应敏感度:S、