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第二章细胞生物学研究方法一、填空题1.透射电子显微镜由____________、___________、___________三部分所组成。2．在酵母人工染色体制备过程中，要用酶脱去酵母的细胞壁，使之成为____________，并且用____________进行观察和计数。3．凝胶过滤层析又称___________或__________，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的____________进行分离和纯化。4．观察贴壁生长的培养动物细胞可用___________，而观察脱去细胞壁的植物细胞，则要用____________。5.物质在紫外光照射下发出的荧光可分为___________和__________两种，其中__________需要将被照射的物质进行染色.6.用紫外光为光源观察物体比用可见光的分辨率要高，这是因为_______________________.7通过___________或___________形成的细胞叫细胞株.8．细菌细胞、酵母菌细胞和植物细胞的细胞壁的化学组成是不同的，所以在制备原生质体时用不同的酶脱壁。一般说来，细菌可用____________，酵母可用______________，9．灭活的仙台病毒之所以能够诱导细胞融合，是因为_______________________。10．相差显微镜与普通显微镜的区别是用______________替代可变光阑，用_______代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。11.倒置显微镜与普通显微镜的不同在于其___________________________。12.若用紫外光为光源，光学显微镜的最大分辨率为____________，透射电子显微镜的最大分辨率为____________能力，扫描电镜的分辨率为______________.13.显微镜的分辨本领是指能够_______________________能力，用_____________来表示.14.高压电镜的电压在120KV以上，优点是:_______________、___________________.15.酶细胞化学反应包括两个步骤:①______________;②____________________.16.细胞培养的突出特点是:可在________________________.17.用蛋白水解酶消化细胞间的结合物，或用金属离子鳌合剂，如EGTA除去细胞相互黏着所依赖的____________，分离细胞.18．贴壁生长的细胞具有三个特点：①_____________；②_____________；③___________.19.用细胞培养法来研究生命活动规律的局限性是___________________________________.20.超薄切片染色常采用_____________和_____________双染法。21.．免疫细胞化学技术是用来定位细胞中的____________________物质。22.电子显微镜使用的是_______________透镜，而光学显微镜使用的是________________透镜。23.电子染色是用___________________________来增强电子的散射能力。24.在光学显微镜下见到的结构称为___________，在电子显微镜下见到的结构称为______________。25.细菌质膜的多功能性主要表现在：具有__________的呼吸作用，具有__________的分泌作用，具有______________的信号传导作用。26.显微镜的分辨率约等于光波长的_____________，通常把这一数值看成是光学显微镜分辨力的________________。27.在同位素追踪技术中，用于研究DNA的同位素标记的前体物是_________________.28.单克隆抗体技术是将________________________与无限繁殖的肿瘤细胞杂交的术。29．可用_______________________技术来研究质膜结构的不对称性。30．乙醇沉淀DNA的主要原理是________________________。31．动物细胞培养所用的合成培养基中除含多种______________、____________和____________外一般还需加入_____________________。32用荧光显微镜观察细胞时，经吖啶橙染色的细胞中的DNA发___________荧光，而RNA发_______________荧光。33.适于观察活细胞的光学显微镜有____________、____________和______________等。34.分辨率是指人的肉眼或显微镜在25cm处能够分辨到的相邻两个物体间最近距离的能力。人眼为__________，普通光学显微镜为____________，透射电子显微镜为___________，扫描隧道显微镜为_____________，扫描电子显微镜为_____________，以紫外光为光源的光学显微镜为_____________________.35．细胞内不同组分分级分离的常用方法有离心法、层析法、电泳法等。离心技术可将细胞匀浆中的不同细胞器或生物大分子进行有效分离。因为不同形态、大小和密度的细胞器以及不同分子质量的生物大分子在离心力作用下_______________各不相同。离心分离法又分___________和_________两种。_________离心是一种较为简便的分离法，常用于细胞核和_______________的分离。因为在密度均一的介质中，颗粒越大沉降越_____________，反之则沉降较_________。这种离心方法只能将那些大小有显著差异的组分分开，而且所获得的分离组分往往不是很纯。而____________离心则是较为精细的分离手段，这种离心方法的关键是先在离心管中制备出_________或__________等介质的浓度梯度并将细胞匀浆装在最上层。在此条件下离心，细胞不同组分将以不同速率沉降并形成不同的沉降带。呈密度梯度的介质可以稳定沉淀成分、防止对流混合。层析法是分离蛋白质的常用手段，其基本原理是不同的蛋白质分子其_______和所带______不同，当它们通过某种介质(基质)而与其发生相互作用时，会被不同程度地________，这样便使不同类型的蛋白质分子移动的快慢不同，从而得以分离。根据蛋白质的大小、所带电荷或特殊的化学集团选择不同的基质的层析，如凝胶过滤柱层析、离子交换树脂柱层析或亲和层析等，可以更有效地分离不同的蛋白质。_____________法是分离蛋白质、核酸的有效方法，在细胞生物学研究领域有着广泛的应用。其基本原理是，不同种类的蛋白质或核酸所携净电荷的________不同，它们在一定强度的电场中会按所带_________、分子的_________以不同速度在电场中移动，从而得以分离成不同的___________.二、判断题1.透射或扫描电子显微镜不能用于观察活细胞，而相差或倒置显微镜可以用于观察活细胞。2.扫描隧道显微镜是具有原子显像力的显微镜。3．在等密度梯度离心中蔗糖或甘油的梯度的作用与移动区带离心中梯度原理是不同的，移动区带离心中梯度的惟一目的是减少样品的扩散，即使是在离心管的底部，颗粒的密也比介质大。相反，在等密度梯度离心中，使用的密度是足以阻止颗粒移动的密度，当颗粒达到与本身密度相同的密度区时就会停留在该区域。4．以蔗糖为介质的密度梯度离心又叫差速密度梯度离心。5．CsCl密度梯度离心又称等密度梯度离心。6．CsCl密度梯度离心法分离纯化样品时，样品要和CsC1混匀后分装。离心时，样品中不同组分因重力的不同而停留在不同区带。7.提高显微镜的分辨率，可通过缩短波长，或给标本染色。8.在光学显微镜下观察到的细胞结构称为亚显微结构，在电子显微镜下观察到的结构称微结构。9．为了使光学显微镜或电子显微镜标本的反差增大，可用化学染料对标本进行染色。10．亲和层析法按分子内在电荷分离分子。11.贴壁生长的细胞呈单层生长，且有接触抑制现象12.癌细胞的培养，也是单层生长，但没有接触抑制现象13.生物样品的电镜分辨率是超薄切片厚度的1/10，因而切得越薄，照片中反差也越强。14.用Triton等去垢剂可以抽提细胞中的微管、微丝等蛋白质结构15.淋巴细胞在体外培养时以贴壁的方式进行生长16.相差显微镜可用来观察活细胞和未经染色的标本17.细胞均浆离心时，较小的细胞受较小的摩擦，因而比更大的细胞器更快沉淀。三、选择题1.通过选择法或克隆形式从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的细胞群称()A．细胞系D．细胞株C．细胞库D．其他2.观察活细胞的显微结构时，最好用()。A.久荧光显微镜B．相差显微镜C．扫描电镜D．透射电镜3．研究DNA在细胞中的代谢，常用的同位素标记物有()。A．14C_戊糖B．32p_磷酸C．15N_鸟嘌呤D．3H-胸腺嘧啶4．在细胞培养的研究中，已知细胞培养液与未知细胞培养液的主要区别是()。A．未知培养液是细胞培养研究中最近才发展起来的技术B．未知培养液完全是人工制造的C．已知培养液包括血清、淋巴因子和其他来自生物体的流质体D．已知培养液不含血清、淋巴因子和其他来自生物体的流质体5．使用氯化铯密度梯度离心法，其目的是()。A．通过密度梯度来维持重力的稳定性，防止物质对流B．用来分离生物分子和细胞亚显微结构C．防止生物大分子凝聚沉淀D．以上都不对6．在凝胶电泳中，示踪染料的移动速度()。A．比各种不同分子样品移动得慢B．与各种不同分子样品移动速度相同C．比各种不同分子样品移动得快D．以上都不对7．细胞融合是一个复杂的过程，在此过程中()。A．PEG可以诱导融合B．用活的仙台病毒可以促融合C．不会形成异核体D．只有同类细胞才能融合8.提高一般光学显微镜的分辨能力，常用的方法有()A.利用高折射率的介质(如甘油)B调节聚光镜，加红色滤光片C．用荧光抗体示踪D．将标本染色9．1埃(A)等于()。A．10-4μm，10-1nm，10-7mmB．10-2μm，10-2nm，10-2mmC．10-9μm，10-4nm，10-9mmD．10-5μm，10-6nm，10-10mm10．下列关于杂交瘤技术的描述中，最正确的一项是()。A．B淋巴细胞与B淋巴瘤细胞融合，目的是抑制瘤细胞无限生长B．在培养基中加入氨基蝶呤可选出杂交细胞C．氨基蝶呤可抑制瘤细胞的蛋白质合成D．氨基蝶呤能导致B淋巴细胞无限分裂11．如果你想要在细胞内部寻找一个含高浓度Ca2＋的区域，下列哪一种显微技术可以选择?A．荧光显微技术B．偏光显微技术C．相差显微技术D．透射电镜显微技术12．细胞融合的诱导剂主要有()。A．PEG(聚乙二醇)B．TMV(烟草花叶病毒)C．亚硝酸D．PHV(植物凝集素)13.流式细胞仪或流式细胞分选仪能快速测定细胞的下列哪些参数?A．DNA含量B．RNA含量巴蛋白质含量D．细胞体积14．在包埋—去包埋超薄切片电镜技术中，()不正确。A．不用重金属染色B．分辨率高C．没有包埋剂存在D．要用Triton去包埋15.下列最不可能成为原代细胞培养的细胞来源是()。A．胚胎组织B．活跃生长的恶性肿瘤组织C．成年鼠脑组织D．植物原生质体16.单个植物细胞在体外经过诱导并培养成为完整小植株的实验证明了(A．细胞是构成有机体的基本单位B．一切有机体均来自于细胞C．细胞是有机体生长发育的基础D．细胞具有遗传的全能性17光学显微镜有一个放大率为40的物镜和放大倍数为10的目镜，成像的总放大倍数是()。A．40×B．50×C．400×D．450×18．下列哪项与显微镜能达到的分辨率无关?A．光波波长B，物镜的放大倍数C．标本和透镜之间的物质的折射率D．透镜的数值孔径19.基因枪是()A.一种将DNA包被片大入细胞的枪B．用“闪电速度”的酶来合成重组DNA的新技术C．一种利用重组剿51A技术制造的用于战争的大杀伤性武器D．