03荧光第二部分.

荧光II六、荧光探针DNA探针细胞活性活性氧pH金属离子（Ca）葡萄糖“笼锁”型1、DNA检测花箐类菲啶、吖啶类吲哚、咪唑类其他探针和DNA结合方式静电作用嵌入作用小沟粘合花青类染料特点ε大（50000cm-1M-1）本底荧光低（YF0.01）结合DNA后荧光强度显著增大（1000倍）与DNA结合常数大，和其他物质结合常数小二聚花青类光谱TO-PRO-1和TOTO-1TOTO和DNA的双嵌入结合Science,1994,264,822菲啶、吖啶类典型的嵌入剂溴化乙啶（ethidiumbromide,EtBr）518/605nmPI（propidiumiodide）荧光增强20－30倍吖啶橙em525nm吲哚、咪唑典型的小沟结合试剂Hoechst33258，33342，34580DAPI358/461nm；20倍增强；细胞半透性其他DNA探针嵌入剂；细胞凋亡2、细胞活性检测酶活性细胞通透性氧化（还原）能力其他：膜电位、离子释放、胞内自由基改变、ATP……凋亡、耐药性、毒性……酶活性检测试剂原理：酯酶活性钙黄绿素的醋酸酯BCECF酯荧光素酯细胞通透性检测原理：不透性DNA荧光探针SYTOXGreen,orange,blue花青类EtBr,PI及其衍生物SYTO类氧化（还原）能力检测原理：检测细胞氧化（还原）能力刃天青二氢罗丹明、二氢荧光素等RedCC-1(540/600nm)3、活性氧OH*、*O2-TEMPO-9-ACProxylfluorescamine荧光自旋阱NO基团：猝灭荧光荧光恢复，ESR消失单线态氧YF:0.9%－13.8%;:0.8－1.29mstrans-1-(2′-Methoxyvinyl)pyrene灵敏（pmol）;选择性好，不与其他活性氧反应过氧化物和过氧化物自由基二氢荧光素二氢罗丹明Hoechst33342;FM595。FM595，细胞膜和内涵体，红；二氯荧光素酯，绿色；Hoechst，核，蓝色Hoechst33258，蓝色，核Dihydrorhodamine123，绿色，线粒体溶酶体标记，红色NONO检测原理NONO＋活性氮氧化物可以被胺类捕获，生成重氮盐或芳香族二胺NO＋DAF-FM；YF0.005-0.81；最佳J.Am.Chem.Soc.,2009,131,11692–11694试剂目标荧光2,3-diaminonaphthaleneNO＋1H-naphthotriazone1,2-diaminoanthraquinoneNO＋红色荧光NBDmethylhydrazineNO2-468/537nm硝基酪氨酸抗体硝基酪氨酸ONOO-4、pH荧光素，490/450nmBCECF，pKa=6.98;490/440nmRogerTsien，1982年合成5.细胞内钙离子探针80年代初，RogerTsien合成Quin-2Indo-1,Fura-2,Fluo-3Fura-2，比例检测，紫外激发，比例成像。左图：神经细胞6、葡萄糖探针7、氧气探针荧光寿命法测定氧气铂配合物，荧光寿命：61.4µs7、“笼锁”型荧光探针Photoactivatable/cagedprobes最大限度影响分子的活性位点或结合位点=360nm，µs-ms内可以解离多具有临位硝基苯基团5种常见笼锁基团DMNB-cagedfluoresceinzebrafish笼锁型荧光素标记微管蛋白注入肾上皮细胞，结合到有丝分裂的纺锤体中观察到有丝分裂中期微管在着丝点聚合，在两极附近解聚Ag2O纳米颗粒CagedquantumdotsJ.Am.Chem.Soc.,2008,130,15811–15813.七、荧光传感探针Fluorescenceturn-on检测特定生成物1.探针法2.Fluorescenceturn-onJ.Am.Chem.Soc.,2009,131(7),2432-2433Anal.Chem.2006,78,8332-8338猝灭剂：纳米金；荧光物质：RhB；检测对象：Hg(II)生物巯基化合物的检测双(8-羟基喹啉-5-磺酸）钾-Pd2+体系测定S2-3.检测特定生成物高香草酸在过氧化物酶催化下，被过氧化氢氧化，生成荧光物质；可以用于检测过氧化氢结合氧化酶，可以检测对应底物