10生物碱类药物分析.

第十章生物碱类药物的分析一类存在于生物体内的含氮有机化合物，绝大部分存在于植物体内，少数存在于动物体内。生物碱第一节结构与性质一、苯烃胺类本类药物的结构特征为N在侧链上，为脂肪胺。性质：1.碱性较强，与酸易成盐：盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱2.旋光性：盐酸麻黄碱，左旋；盐酸伪麻黄碱，右旋3.紫外吸收：芳环4.氨基醇结构：双缩脲反应OHHHNHCH3CH3.HCLOHCH3HHNHCH3.HCL盐酸麻黄碱盐酸伪麻黄碱二、托烷类硫酸阿托品氢溴酸山莨菪碱性质：1.水解性：水解产生莨菪酸和莨菪碱2.碱性较强，与酸易成盐：硫酸阿托品、氢溴酸山莨菪碱3.旋光性，氢溴酸山莨菪碱为左旋体，阿托品为外消旋体三、喹啉类硫酸奎宁性质：1.碱性组成：喹啉环+喹核碱喹核碱碱性较强，与硫酸成盐2.旋光性奎宁左旋体，奎尼丁右旋体盐酸吗啡磷酸可待因四异喹啉类性质1.吗啡结构：酚羟基显酸性，叔胺基团显碱性2.吗啡溶解性：既可溶于氢氧化钠溶液又可溶于盐酸溶液3.可待因：无酚羟基，不能溶于氢氧化钠溶液硝酸士的宁利血平1122五、吲哚类性质：1碱性：均含有两个碱性氮原子，士的宁N1碱性较强，与硝酸成盐；利血平N1空间位阻，碱性较弱，不能成盐。2水解性：利血平含有酯键，弱碱或受热条件下易水解3还原性和荧光性：利血平在光照和氧气存在下极易被氧化，氧化产物为黄色，并带有黄绿色荧光，进一步氧化，显蓝色荧光咖啡因茶碱性质：几乎不显碱性茶碱显酸性，可溶于碱性水溶液六、黄嘌呤类第二节鉴别试验一、一般鉴别试验（一）沉淀反应：生物碱类药物在酸性水溶液中，可与生物碱沉淀剂反应，生成难溶于水的物质常用的生物碱沉淀试剂为：K2HgI4、KBiI4、I2—KI、二氯化汞、磷钼酸、硅钨酸等。生物碱+生物碱显色试剂=呈现不同颜色显色试剂：浓硫酸、浓硝酸、钼硫酸、甲醛硫酸等磷酸可待因的鉴别：取本品1mg，置白瓷板上，加含亚硒酸2.5mg的硫酸0.5ml，立即显绿色，渐变蓝色。（三）熔点测定法例：磷酸可待因（10版药典）加入20％NaOH溶液至白色沉淀出现，用玻璃棒摩擦器壁使沉淀完全，滤过；沉淀用水洗净，在105℃干燥1小时，依法测定，熔点为154℃-158℃。（四）紫外吸收光谱法（五）红外吸收光谱法（六）薄层色谱法（1）双缩脲反应芳环侧链氨基醇结构的特征反应盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱OHHNHCH3HCH3蓝紫色二、特征鉴别试验**（2）Vitali反应托烷类生物碱的特征反应莨菪酸结构硫酸阿托品，氢溴酸东莨菪碱硫酸阿托品加发烟硝酸5滴水浴蒸干放冷加乙醇2－3滴润湿加固体KOH一粒显深紫色（3）绿奎宁反应C6位含氧喹啉类生物碱在此生物碱的微酸水溶液中，加微过量溴水或者氯水，再加氨溶液，应呈翠绿色。NMeO硫酸奎宁溴水或者氯水氨试液翠绿色（4）紫脲酸铵反应黄嘌呤类生物碱KClO3+HCl紫色消失KOH氨气蒸干紫色+咖啡因茶碱吲哚类生物碱的特征反应与香草醛缩合：利血平+香草醛=玫瑰红色与对二甲氨基苯甲醛缩合：取利血平约0.5mg，加对二甲氨基苯甲醛5mg，冰醋酸0.2ml与硫酸0.2ml，混匀，即显绿色，再加冰醋酸1ml，转变为红色。1、甲醛-硫酸反应Marquis反应紫堇色盐酸吗啡+甲醛硫酸含酚羟基的异喹啉生物碱的特征反应：盐酸吗啡2、还原反应盐酸吗啡+稀铁氰化钾=伪吗啡+亚铁氰化钾亚铁氰化钾+三氯化铁=亚铁氰化铁，显蓝色第三节特殊杂质检查一、利用药物和杂质在物理性质上的差异硫酸奎宁中“氯仿-乙醇中不溶物”的检查硫酸阿托品中“莨菪碱”的检查*利血平中“氧化产物”的检查利用旋光度的差异利用溶解行为的差异利用对光选择性吸收的差异二、利用药物和杂质在化学性质上的差异（一）酸碱性的差异硫酸阿托品中其他生物碱的检查原理：其他生物碱的碱性比阿托品弱方法：取本品0.25g，加盐酸溶液1ml溶解，用水稀释成15ml，分取5ml，加氨试液2ml，不得立即发生浑浊。二、利用药物和杂质在化学性质上的差异1、盐酸吗啡中阿扑吗啡的检查本品2、磷酸可待因中吗啡的检查原理：吗啡与亚硝酸钠反应产物在氨碱性条件下显黄棕色方法：取本品0.1g，加盐酸溶液使溶解成5ml，加亚硝酸钠试液2ml，放置15分钟，加氨试液3ml如显色，与吗啡标准液5.0ml，用同一方法制成的对照液比较，不得更深。加水溶解加NaHCO3+碘试液加乙醚振摇乙醚层不得显红色水层不得显绿色三、色谱法硫酸奎宁中其它金鸡纳碱的检查（p147自学）检查方法：供试品溶液自身稀释对照法有关物质的检查方法：HPLC非水溶液滴定法提取酸碱滴定法酸性染料比色法置换酸碱滴定法紫外分光光度法(一)原理•指示剂或电位法确定终点•置换反应：强酸置换弱酸BH+·A-+HClO4BH+·ClO4-+HA(二)测定方法•取供试品，加冰醋酸10-30ml溶解。•供试品若为氢卤酸盐，应再加5%醋酸汞的冰醋酸溶液3-5ml•加指示剂，用高氯酸滴定液滴定(三)注意事项•除水：加入酸酐，吸收冰醋酸及高氯酸中的水分•温度：滴定液浓度受温度影响•滴定终点：电位法或指示剂法(四)适用范围Kb＜10-8pKb8-10时，宜选冰醋酸作为溶剂；pKb为10-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合液作为溶剂；pKb为12以上时，选用醋酐作为溶剂。一般均预先在溶液中加入Hg(Ac)2的冰醋酸溶液，以消除氢卤酸对滴定的干扰。22HgXAc2BHHg(Ac)X2BH※理论量1～3倍1.氢卤酸盐的测定汞污染取本品约0.15g，精密称定为0.1511g，加冰醋酸10ml，加热溶解后，加醋酸汞试液4ml与结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1002mo1/L）滴定至溶液显翠绿色，消耗高氯酸滴定液（0.1002mo1/L）8.25ml，并将滴定的结果用空白试验校正，空白消耗高氯酸滴定液（0.1002mo1/L）0.81ml。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.17mg的C10H15NO·HCl。求含量盐酸麻黄碱含量测定ChP(2010)生物碱的硫酸盐，在冰醋酸介质中只能被滴定至生物碱的硫酸氢盐。···2---+BH+ClO4BH+HSO4+(BH+)2SO4HClO42.硫酸盐的测定（1）硫酸阿托品取硫酸阿托品约0.5g，精密称定，加冰醋酸与酸酐各10ml溶解后，加结晶紫指示液1-2滴，用高氯酸滴定液滴定，至溶液显纯蓝色。HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶1（2）硫酸奎宁取硫酸奎宁约0.2g，精密称定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml与结晶紫指示液1-2滴，用高氯酸滴定液滴定至溶液显蓝绿色。HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶3（3）硫酸奎宁片取硫酸奎宁片10片，除去糖衣后，精密称定，研细，精密称取适量，置分液漏斗中，加氯化钠0.5g与0.1mol/L氢氧化钠溶液10ml，混匀，加氯仿50ml，振摇10分钟，静止，分取三氯甲烷液，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液25ml，加酸酐5ml与二甲基黄指示液2滴，用高氯酸滴定液滴定至终点。HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶4因HNO3具有氧化性，可使指示剂变色，一般电位法指示终点。3.硝酸盐的测定无影响，直接测定。如磷酸可待因。4.磷酸盐及其有机酸盐的测定（一）原理生物碱盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂游离生物碱不溶于水，易溶于有机溶剂依据性质二、提取酸碱滴定法适用于碱性比较强的的药物分析。(pKb=6-9)中和法测定有机层（B）水层有机溶剂OH-sol过滤sol(BH+)稀酸或H2O游离生物碱或生物碱盐类取供试品溶于水或稀矿酸中，加入适当的碱性试剂使生物碱游离，再用合适的有机溶剂分次振摇提取，合并提取液，用水洗涤除去混存的碱性试剂和水溶性杂质，再用无水硫酸钠或植物胶脱水，滤过，即得游离生物碱的有机溶剂提取液用内容量移液管，精密量取本品10ml，以水洗出移液管内的附着液，置分液漏斗中，加氨试液使成碱性，用氯仿振摇提取至少4次，第一次25ml，以后每次各15ml，至可待因提尽为止，每次得到的氯仿液均用同一份水10ml洗涤，洗液用氯仿5ml振摇提取，合并氯仿液，置水浴上蒸干，精密加硫酸滴定液(0.01mol/L)25ml，加热溶解，放冷，加甲基红指示液2滴，用氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)滴定。每1ml的硫酸滴定液(0.01mol/L)相当于84.88mg的C18H21NO3·H3PO4·3/2H2O。1.碱化试剂最常用氨试液**优点：使大部分生物碱游离，不会和生物碱发生反应，不易乳化，易挥发，易除去，无干扰。（三）注意事项2.提取溶剂（1）提取溶剂选择的原则对生物碱溶解度大，而对其他共存物溶解度尽可能小；与生物碱及碱化试剂不起任何反应。（2）常用的提取溶剂最常用氯仿**3.滴定指示剂要求：变色范围在酸性区域的指示剂；被滴定生物碱的化学计量点，应在选用的指示剂变色范围内。药品化学计量点的PH值（PT值）滴定突越的PH值指示剂阿托品5.43.8-7.2甲基红罂粟碱3.603.8-4.6溴酚蓝注：甲基红：4.2-6.3，溴酚蓝：3.0-4.6三、酸性染料比色法生物碱与某些酸性染料，在一定PH条件下可定量结合显色，然后用比色法测定含量。特点：灵敏度高、方便，并且具有一定专属性和准确性。适用于含量较低的样品测定。*（一）基本原理在适当的介质中，BH+.In-（水相）B+H+BH+HInH++In-BH+.In-（有机相）+供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硫酸阿托品2.5mg），置50ml量瓶中，加水振摇使硫酸阿托品溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。对照品溶液的制备：另取硫酸阿托品对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。例：硫酸阿托品片（05版药典）测试方法：精密量取供试品溶液与对照品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液2.0ml，振摇提取2分钟后，静置使分层，分取澄清的三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA），在420nm的波长处分别测定吸光度，计算，并将结果与1.027相乘，即得供试量中含有(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O的重量。(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O标示量%=Ax/AR×CR×50×1.027×平均片重W×标示量×100%1.027：质量换算因数，指1g无水硫酸阿托品相当于硫酸阿托品的量。由下式求得：(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O的分子量(C17H23NO3)2·H2SO4的分子量=1.027（三）影响测定结果的因素※关键：酸性染料与有机碱能否定量的形成离子对，并完全被有机溶剂提取。**1.水相最佳PH值的选择：使生物碱均形成阳离子，且酸性染料电离足够阴离子。2.酸性染料种类的要求：与生物碱定量结合；生成的离子对在有机相中溶解度较大，而染料自身在有机相中不溶或很少溶解；生成的离子对有较高吸光度。常用：溴麝香草酚蓝、甲基橙、溴甲酚绿等3.有机溶剂的选择要求：对离子对的提取率高；不能或极少与水互溶。常用三氯甲烷、二氯甲烷等。4.水分的存在完全无水5.有色杂质的干扰和排除为了防止有色杂质的干扰。可对酸性染料进行处理：用有机溶剂提取，除去有色杂质。四、置换酸碱滴定法五、紫外分光光度法