2020年1月15日星期三8时26分42秒美罗培南HPLC药物分析AnalChem.2111/15/20208:26AM让我们记住willon等人在2005年秋2个月的辛勤工作。提纲美罗培南简介条件试验方法学有关物质检查与含量测定的地盘,laozhu的讲稿美罗培南(meropenem)简介美罗培南:非肠道的注射用抗生素对阳性和阴性革兰氏病原体有抗菌作用;加热时分解,得到开环物。Meropenem(300mg)USPRetailPrice:$189.00提纲美罗培南简介条件试验方法学有关物质检查与含量测定的地盘,laozhu的讲稿实验仪器及工作条件1、仪器Agilent1100高效液相色谱仪50ul微量注射器pH计,砂芯漏斗,针孔过滤器2、试剂乙腈(色谱专用)三乙胺(A.R.)浓磷酸(A.R.)美罗培南试样的地盘,laozhu的讲稿3、HPLC分析条件色谱柱:ZORBAXEclipseXDB-C84.6×150mm,5µm(Agilent)柱温:室温流动相:0.3%三乙胺(用磷酸调节pH=5.0)的水溶液和乙腈(体积比100∶7);也可以简化用纯水和乙腈(体积比100∶7)作流动相检测器:DAD检测波长:220nm进样体积:20µl定量环,实际每次注射40µl可不是件容易事啊!实验仪器及工作条件提纲美罗培南简介条件试验方法学有关物质检查与含量测定的地盘,laozhu的讲稿方法学研究1、空白试验2、美罗培南与BP及开环物的分离3、美罗培南检测限、定量限4、破坏性试验5、溶液稳定性6、工作曲线7、样品的有关物质检测和含量测定的地盘,laozhu的讲稿1、空白试验空针进样:基线是否稳定流动相进样:是否有杂质影响注意纵轴的地盘,laozhu的讲稿色谱法中的信噪比上:199nmN=4mAU中:228nmN=0.35mAU下:275nmN=0.02mAU-16-14.5-13-11.5-10-8.5-7-5.5-430354045t(min)A(mAU)-1.3-1.2-1.1-1-0.9-0.8-0.7-0.6-0.5303234363840t(min)A(mAU)-0.12-0.1-0.08-0.06-0.0434.935.435.936.4t(min)A(mAU)0200400600800100012001400190210230250270290310λ(nm)A(mAU)DEP为例,典型UV吸收光谱较小波长处:信号和噪声均大常识大的地盘,laozhu的讲稿色谱法中的信噪比199nmS=58.8mAUS/N=14.7228nmS=18.3mAUS/N=52.3275nmS=2.18mAUS/N=109-16-14.5-13-11.5-10-8.5-7-5.5-430354045t(min)A(mAU)-1.3-1.2-1.1-1-0.9-0.8-0.7-0.6-0.5303234363840t(min)A(mAU)-0.12-0.1-0.08-0.06-0.0434.935.435.936.4t(min)A(mAU)1.5mg/L的DEP的地盘,laozhu的讲稿使用缓冲溶液不使用缓冲溶液缓冲溶液对峰形的改善原因分析:的地盘,laozhu的讲稿2、美罗培南与BP及开环物的分离美罗培南与中间产物BP分离BP美罗培南BP流动相改用50%乙腈:50%纯水折腾好几天啊的地盘,laozhu的讲稿美罗培南与BP光谱比较00.20.40.60.811.21.41.6190210230250270290310330350美罗培南20ng/mlBP20ng/ml多波长检测+化学计量学的地盘,laozhu的讲稿美罗培南与开环物分离计算分离度,理论塔板数的地盘,laozhu的讲稿3、美罗培南测出限、测定限测出限(LOD:S/N=3)测定限(LOQ:S/N=10)LOD:0.19mg/LLOQ:0.62mg/ml稀释多次减少污染的地盘,laozhu的讲稿4、破坏性试验(1)25mg美罗培南,加0.1mol/LHCl5ml,室温振摇溶解后反应液用0.1mol/LNaOH中和至中性进样主峰84%酸破坏的地盘,laozhu的讲稿4、破坏性试验(2)25mg美罗培南,加0.01mol/LNaOH5ml,振摇溶解,室温放置34min后反应液用0.01mol/LHCl中和至中性进样。主峰95.5%碱破坏的地盘,laozhu的讲稿4、破坏性试验(3)25mg美罗培南,加1%双氧水1ml,振摇,室温放置14min,加热分解剩余的双氧水,加流动相至5ml过滤后进样。主峰83.33%氧化破坏的地盘,laozhu的讲稿4、破坏性试验(4,5,6)高温破坏高湿破坏光照破坏主峰98.08%主峰98.50%主峰96.59%高温/光照/高湿今天网络讨论:为什么要破坏性试验?的地盘,laozhu的讲稿5、溶液稳定性溶液室温放置6h,过程中取样测试稳定性949596979899100101102010020030040094959697989910010110201002003004000.5mg/ml5mg/ml时间/min面积百分比时间/min面积百分比试验溶液要现配现做,尤其是浓溶液!稀溶液较稳定的地盘,laozhu的讲稿6、工作曲线美罗培南(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0)mg/ml主峰面积作图R要求0.999y=13945x+398.62R2=0.999802000400060008000100001200014000160000.00000.20000.40000.60000.80001.00001.2000好高的要求,称得要准阿!的地盘,laozhu的讲稿7、样品有关物质检测和含量测定有关物质检测粗品、040901-1、040901-2、040901-3、041001、041002、041003含量测定041001、041002、041003先以USP对照品标定040901-3批以后都以040901-3为对照品USP好贵啊!提纲美罗培南简介条件试验方法学有关物质检查与含量测定的地盘,laozhu的讲稿有关物质检查和含量测定1、方法步骤A有关物质检测供试品溶液:5mg/ml,用流动相溶解。对照溶液:将供试品溶液用流动相稀释制成25µg/ml(1:200)。记录色谱图至主成分峰保留时间的3.5倍目的:相同坐标刻度范围看杂质含量的地盘,laozhu的讲稿25ug/ml5mg/ml有关物质检测(040901-3批)坐标刻度范围相同峰高占满刻度20%-25%的地盘,laozhu的讲稿B含量测定供试品溶液:0.5mg/ml,用流动相溶解对照品溶液:0.5mg/ml,用流动相溶解计算方法:外标法(单点校正)对照品均为:040901-3批平行进样至少2针目的:测试物质含量的地盘,laozhu的讲稿含量测定(040901-3批)2ndA:76122ndA:76121stA:76021stA:7199对照品USP供试品040901-3批供试品040901-3批的地盘,laozhu的讲稿2、工作内容影响因素实验样品测定光照、高温、高湿度考核:5天,10天长期试验样品(25℃、RH60%)3月,6月,9月,12月加速试验样品(40℃、RH75%)1月,2月,3月,6月加速试验样品(30℃、RH60%)1月,2月,3月,6月注意:以上试验分别测试041001、041002、041003批的地盘,laozhu的讲稿后续工作展望半成品、成品试剂等方法学研究及有关物质检测和含量测定的地盘,laozhu的讲稿路漫漫兮其修远兮!