1目的基因的分离(PCR)

聚合酶链式反应（PCR）如果已经知道目的基因的序列，就能很方便地用PCR聚合酶链式反应（PCR，polymerasechainreaction），从基因组DNA或cDNA中获得目的基因，可不必要经过复杂的DNA文库构建过程。聚合酶链式反应（PCR）PCR反应系统包括含有目的基因或序列的DNA模板，对热稳定的DNA聚合酶，一对脱氧寡核苷酸引物、DNA合成所需要的4种脱氧核苷三磷酸以及保证聚合酶催化反应的Mg2+及缓冲液等。人工合成引物的序列设计是PCR成功的关键，一般两条引物的序列反应分别与欲获得的双链DNA两条链3’端的序列互补。聚合酶链式反应（PCR）1.升高温度使模板DNA变性、双链分开。2.降低温度退火使引物与模板DNA配对互补结合。3.然后升温到聚合酶反应适宜的温度，此时在聚合酶催化下，从引物3’羟基端开始，与模板DNA上的碱基配对逐个加上核苷酸，合成新的DNA链。4.其后再按高温变性、低温退火、适温合成三步反复循环，新合成的DNA在下一循环中又作为模板使用，每循环一次，合成的目的序列扩增一倍。