1简述生物分离过程的特点

1简答题1.简述生物分离过程的特点。答：（1）产品丰富：产品的多样性导致分离方法的多样性；（2）绝大多数生物分离方法来源于化学分离；（3）生物分离一般比化工分离难度大：※成分复杂；※悬液中的目标产物浓度低；※生物活性条件相对温和；※生物产品要求高质量；※获得高纯度的干燥产品；※卫生。因此，生物分离过程往往成本很高，在某些产品的生产过程中，分离成本可能占到总成本的80％以上。（补充：常无固定操作方法可循；生物材料组成非常复杂；分离操作步骤多，不易获得高收率；培养液（或发酵液）中所含目的物浓度很低，而杂质含量却很高；分离进程必须保护化合物的生理活性；生物活性成分离开生物体后，易变性、破坏；基因工程产品，一般要求在密封环境下操作。）2.简述超临界流体萃取的原理及其特点。答：超临界流体萃取是利用超临界流体具有的类似气体的扩散系数，以及类似液体的密度（溶解能力强）的特点，利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。利用超临界流体的特殊性质，使其在超临界状态下，与待分离的物料接触，萃取出目的产物，然后通过降压或升温的方法，使萃取物得到分离。其特点是密度接近液体，萃取能力强；粘度接近气体，传质性能好；且安全、无毒、产品分离简单，但设备投资较大。3.常用的蛋白质沉淀方法有哪些？简述其作用机理。（１）有机溶剂法：破坏蛋白质分子的水化层，使之聚集成更大的分子团而沉淀。2（２）盐析：破坏蛋白质分子水化层，电荷中和，使之聚集成更大的分子团。（３）化学沉淀法：通过化学试剂与目的产物形成新的化合物，改变溶解度而沉淀。4.何谓ELISA？简述其分析过程。答：ELISA即酶联免疫吸附测定，是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用结合起来，灵敏性很高的一种新型的免疫酶测定技术。ELISA过程是在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板中进行的，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。抗原吸附在固相载体上被称为包被，加待测抗体，再加相应酶标记抗体，生成“抗原-待测抗体-酶标记抗体”的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物，待测抗体的定量与有色物质产生成正比，因此借助分光分度仪计测定其吸光度，可计算出抗体的量。5.结合SDS-PAGE电泳的分离原理说明未知蛋白质分子量的测定方法。答:SDS-PAGE是凝胶电泳的一种，其分离原理是基于不同分子量的蛋白质（亚基）在电场中的迁移率不同，因此利用该技术测定未知蛋白质（亚基）的分子量是十分方便的，具体的方法是利用标准分子量MARK，与样品一同电泳，染色后根据标准分子MARK中已知分子量蛋白质的迁移率与其分子量的对数值作图，可得一标准曲线并拟合方程，再结合未知蛋白质的迁移率即可计算得到大致的分子量。6.常用的层析方法有哪些？请叙述其分离原理。⑴离子交换层析（IEC）基本原理：通过带电的溶质分子与离子交换剂中可交换的离子进行交换，从而达到分离的目的。⑵疏水色谱（HIC）基本原理：主要是利用蛋白质分子表面上的疏水区域和介质中的疏水基团之间的相互作用，无机盐的存在能使相互作用力增强。⑶亲和层析（AC）基本原理：是利用固定化配基与目的蛋白质之间特异的生物亲和力进行吸附，如抗体与抗原、受体与激素、酶与底物之间的作用。⑷凝胶过滤基本原理：是以具有大小一定的多孔性凝胶作为分离介质，小分子能进入孔内，在柱中缓慢移动，而大分子不能进入孔内，快速移动，利用这种移动差别可使大分子与小分子分开。7.何谓萃取的分配系数？其影响因素有哪些？分配系数：在一定温度、一定压力下，某一溶质在互不相溶的两种溶剂间分配时，达到平衡后，在两相中的浓度之比为一常数，这个常数称为分配系数。3乳化作用。pH值：影响弱酸或弱碱药物的分配系数和药物的稳定性。温度和时间：药物的稳定性、分配系数。盐析作用：盐析剂与水分子结合，游离水分子减少，药物在水相中溶解度降低，易转入有机相；降低有机溶剂在水中的溶解度；萃余相比重增大，利于分相。溶剂的种类和用量及萃取方式。基因工程001基因工程操作的三大基本元件是【】I供体II受体III载体IV抗体V配体ＡI+II+IIIＢI+III+IVＣII+III+IVＤII+IV+VＥIII+IV+V002根据当今生命科学理论，基因工程的用途是【】I分离纯化基因II大量生产生物分子III构建新型物种IV提高基因重组效率ＡI+II+IIIＢI+II+IVＣI+III+IVＤII+III+IVＥI+II+III+IV003基因工程的三大理论基石是【】Ａ经典遗传学、细胞生物学、微生物学Ｂ分子遗传学、分子生物学、生化工程学Ｃ动物学、植物学、微生物学Ｄ生物化学、生化工程学、化学工程学Ｅ生理学、仿生学、免疫学4004根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是【】Ａ基因诱变Ｂ分子克隆ＣDNA重组Ｄ遗传工程Ｅ基因无性繁殖005基因工程的单元操作顺序是【】Ａ增，转，检，切，接Ｂ切，接，转，增，检Ｃ接，转，增，检，切Ｄ检，切，接，增，转Ｅ切，接，增，转，检006生物工程的上游技术是【】Ａ基因工程及分离工程Ｂ基因工程及发酵工程Ｃ基因工程及酶工程Ｄ基因工程及细胞工程Ｅ基因工程及蛋白质工程007基因工程作为一种技术诞生于【】Ａ上世纪50年代初Ｂ上世纪60年代初Ｃ上世纪70年代初Ｄ上世纪80年代初Ｅ上世纪90年代初008利用基因工程扩增基因是依据【】Ａ基因定向重排Ｂ强化启动基因Ｃ增强子重组ＤSD顺序的存在Ｅ载体自主复制009第一个由重组大肠杆菌生产的人类蛋白（多肽）药物是【】Ａ生长激素（Growthhormone）Ｂ胰岛素（Insulin）Ｃ干扰素（Interferon）Ｄ白细胞间溶菌素（Interleukin）Ｅ生长激素释放抑制素（Somatostatin）010下列有关基因的叙述，错误的是【】Ａ蛋白质是基因表达的唯一产物Ｂ基因是DNA链上具有编码功能的片段Ｃ基因也可以是RNA5Ｄ基因突变不一定导致其表达产物改变结构Ｅ基因具有方向性011限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是【】Ａ修复自身的遗传缺陷Ｂ促进自身的基因重组Ｃ强化自身的核酸代谢Ｄ提高自身的防御能力Ｅ补充自身的核苷酸消耗012天然PstI限制性内切酶的来源是【】ＡBacillusamyloliquefaciensＢEscherichiacoliＣHaemophilusinfluenzaeＤProvidenciastuartiiＥStreptomyceslividans013根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成【】Ａ2大类Ｂ3大类Ｃ4大类Ｄ5大类Ｅ6大类014下列五个DNA片段中含有回文结构的是【】ＡGAAACTGCTTTGACＢGAAACTGGAAACTGＣGAAACTGGTCAAAGＤGAAACTGCAGTTTCＥGAAACTGCAGAAAG015下列五个DNA片段，最可能含有SstI酶切位点的是【】ＡGGAGAGCTCTＢGAGCACATCTＣCCCTGTGGGAＤATCCTACATGＥAACCTTGGAA016从dam型大肠杆菌受体细胞中分离出的质粒DNA能被BamHI、BglII和Sau3AI降解（如果上述酶切位点存在），但对BclI和MboI不敏感（尽管上述酶切位点存在），其原因是【】ＡDam甲基化酶使BclI和MboI识别序列甲基化，但对BamHI、BglII以及Sau3AI不起作用ＢDam甲基化酶既可使5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6甲基化，也可使胞嘧啶C5甲基化，这两种甲基化作用对限制性内切酶活性的影响不同6ＣDam甲基化酶能使所有5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6甲基化，但不同的限制性内切酶对这种甲基化作用的敏感性不同ＤDam甲基化酶的作用位点在5'-GATC-3'序列内部，但该酶与DNA靶序列的结合还依赖于5'-GATC-3'序列左右两端的其它碱基组成ＥDam甲基化酶既能使5'-GATC-3'序列中的腺嘌呤N6单甲基化，也能使其双甲基化，只有后者才能抵御相应限制性内切酶的切割作用017T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是【】Ａ2'-OH和5'-PＢ2'-OH和3'-PＣ3'-OH和2'-PＤ3'-OH和5'-PＥ5'-OH和3'-P018下列DNA片段中，通过加热并用S1核酸酶处理即可使DNA断裂的是【】ＡCCGATCAAGCTGTTCCCGGAGGTGCCCGCCCTAAGGAGACTCGGTGGCTAGTTCGACAAGGGCCTCCACGGGCGGGATTCCTCTGAGCCAＢAAGGTCGGCGGGTTCCCACCCGTGAGCATCGGGCCTTGCCGTTATTTCCAGCCGCCCAAGGGTGGGCACTCGTAGCCCGGAACGGCAATAＣTATGATCATCCGCCGGGTGTCACTGATCCATGGCCCAAGGGTTTCATACTAGTAGGCGGCCCACAGTGACTAGGTACCGGGTTCCCAAAGＤGAGGATCCCTTTGCGATTCACCTAGGGTATCTCTGTAGGGCCTAGCTCCTAGGGAAACGCTAAGTGGATCCCATAGAGACATCCCGGATCＥGCATCGGCCCCCGGTAAATATTCTCGGGGCGGGTAGCCGCCTAGTCGTAGCCGGGGGCCATTTATAAGAGCCCCGCCCATCGGCGGATCA019Bal31工具酶是一种【】Ａ只切双链DNA的外切酶Ｂ双链单链DNA均切的外切酶Ｃ双链单链DNA和RNA均切的外切酶Ｄ双链单链RNA均切的外切酶Ｅ只切双链RNA的外切酶020下列有关连接反应的叙述，错误的是【】Ａ连接反应的最佳温度为37℃Ｂ连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%Ｃ连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1mMＤ连接酶通常应过量2-5倍ＥDTT可以维持连接酶的结构021某一质粒的多克隆位点上含有下列单一限制性内切酶识别序列：AluI、BglII、ClaI、DpnI、EcoRV，若将含有EcoRI粘性末端的外源基因克隆在这个质粒上，并保留EcoRI酶切位点，则合适的插入位点是【】ＡAluIＢBglIIＣClaIＤDpnIＥEcoRV7022若将含有5'末端4碱基突出的外源DNA片段插入到含有3'末端4碱基突出的载体质粒上，又必须保证连接区域的碱基对数目既不增加也不减少，则需用的工具酶是【】IT4-DNA聚合酶IIKlenowIIIT4-DNA连接酶IV碱性磷酸单酯酶ＡIIIＢI+IIIＣII+IIIＤI+II+IIIＥI+II+III+IV023若载体DNA用M酶切开，则下列五种带有N酶粘性末端的外源DNA片段中，能直接与载体拼接的是【】MNＡA/AGCTTT/TCGAAＢC/CATGGACATG/TＣCCC/GGGG/GGCCCＤG/GATCCA/GATCTＥGAGCT/CG/AGCTC024下列各组分别用两种不同的限制性内切酶切开的DNA片段经补平并连接后，其重组分子内能产生ClaI限制性内切酶酶切位点的是【】ＡBglII/BamHIＢHindIII/BamHIＣMluI/BamHIＤSpeI/BamHIＥXbaI/BamHI025质粒DNA和外源DNA各用两种限制性内切酶切开，经连接转化后获得重组子。下列各组重组子中有可能含有两种相反基因极性的是【】ＡApaI/ClaIＢBamHI/BglIIＣBclI/SmaIＤHindIII/KpnIＥSphI/PstI026提高重组率的方法包括【】I加大外源DNA与载体的分子之比II载体分子除磷III连接酶过量IV延长连接反应时间ＡI+IIＢI+II+IIIＣI+III+IVＤII+III+IVＥI+II+III+IV027载体的功能是【】I运送外源基因高效进入受体细胞II为外源基因提供复制能力III为外源基因提供整合能力ＡIＢI+II8ＣI+IIIＤII+IIIＥI+II+III028下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是【】Ａ质粒是共价环状的双链DNA分子Ｂ天然质粒一般不含