烟草花叶病毒外壳蛋白诱导烟草抗病毒作用

福建农林大学硕士学位论文烟草花叶病毒外壳蛋白诱导烟草抗病毒作用姓名：郑丽申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：陈启建;吴祖建20090401烟草花叶病毒外壳蛋白诱导烟草抗病毒作用作者：郑丽学位授予单位：福建农林大学相似文献(10条)1.学位论文吴立刚烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白亚基因组RNA启动子分析及表达外源基因的研究2001烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)是一种宿主范围广泛的正链杆状植物病毒,它可以宿主体内高效复制和表达,又能在体外稳定存在.其中外壳蛋白(CP)的表达量可以达到宿主总蛋白的百分之七,而且外壳蛋白还可以耐受一定程度的修饰而不影响其对病毒基因组RNA的包装.2.期刊论文陈梅.邱德文.刘峥.杨秀芬.曹克强.CHENMei.QIUDe-wen.LIUZheng.YANGXiu-fen.CAOKe-qiang植物激活蛋白对烟草花叶病毒RNA复制及外壳蛋白合成的抑制作用-中国生物防治2006,22(1)研究了植物激活蛋白对烟草花叶病毒RNA及外壳蛋白的抑制作用.结果表明,烟草经植物激活蛋白处理后,植株体内烟草花叶病毒RNA含量比对照降低28%;用ELISA和Western方法检测烟草花叶病毒外壳蛋白的含量,处理分别比对照减少20.7%和25.0%.植物激活蛋白显著干扰烟草花叶病毒外壳蛋白的体外聚合过程,22～37℃条件下其干扰作用达显著水平.3.期刊论文马铮.李巧丽.宋任涛.许政暟.MAZheng.LIQiao-li.SONGRen-tao.XUZheng-kai外壳蛋白羧端序列缺失对烟草花叶病毒侵染性的影响-病毒学报2005,21(4)对野生型烟草花叶病毒(TMV-U1)的外壳蛋白羧端序列进行系列缺失突变,观察到TMV-U1株系的外壳蛋白羧端序列缺失6个氨基酸(保留152个氨基酸),仍能较强系统侵染烟草并高水平表达外壳蛋白,且能在新生叶里复制大量完整的病毒粒子.该研究结果表明:外壳蛋白羧端6个氨基酸序列并非烟草花叶病毒感染和复制所必需,并对利用外壳蛋白羧端缺失型病毒载体表达外源多肽具有一定的启示性.4.学位论文马铮外壳蛋白羧端序列缺失对烟草花叶病毒侵染性的影响2005烟草花叶病毒是烟草花叶病毒属的典型成员，为单组分正义单链RNA病毒，基因组全长6395，病毒RNA由外壳蛋白包装成长约300nm，直径约18nm的杆状病毒粒子。TMV系统感染烟草后，CP表达量可达到被感染烟草总蛋白的7％。烟草花叶病毒的CP亚基由4个α螺旋组成，蛋白的N端和C端暴露在外部，并且研究表明羧端4个氨基酸对于稳定整个蛋白三维结构的作用不明显，在利用病毒载体表达外源多肽的时候，本实验室发现了TMV-U1株系的羧端若干氨基酸的缺失并不影响融合外源肽的外壳蛋白的高效表达，并曾经在CP羧端152位后插入外源肽并缺失野生型CP羧端相应的六个氨基酸序列(T153-T158)的重组病毒仍然能高效表达。本文主要对野生型烟草花叶病毒(TMV-U1)的外壳蛋白羧端序列进行系列缺失突变，研究羧端若干氨基酸的缺失对于病毒侵染性的影响，以此来确定外壳蛋白羧端氨基酸的保守性，并且为利用烟草病毒载体表达外源肽提供一定的参考价值。在对外壳蛋白羧端氨基酸的缺失研究中，观察到TMV-U1株系的外壳蛋白羧端序列缺失六个氨基酸(保留152个氨基酸)仍能较强系统侵染烟草并高水平表达外壳蛋白，且能在新生叶里复制大量完整的病毒粒子，但相对于野生型，其侵染性已经显现弱化趋势，而缺失七个氨基酸(保留151个氨基酸)，则病毒的长距离运输能力弱化，在新生叶中只能检测到病毒基因组，但不能检测到外壳蛋白和完整病毒粒子。外壳蛋白羧端缺失四个和五个氨基酸的突变病毒均能正常系统感染烟草，高效表达外壳蛋白，侵染性与野生型相当，并且能在新生叶中包装成完整的病毒粒子。除TMV151TAG外，这些缺失型病毒还能转染健康烟草，在感染植株新叶中能检测到基因组和外壳蛋白，而且通过RT-PCR和测序未发现其他位点的突变。该研究结果表明外壳蛋白羧端六个氨基酸序列并非烟草花叶病毒感染和复制所必需，并对利用外壳蛋白羧端缺失型病毒载体表达外源多肽具有一定的指导意义。5.会议论文马晓东.李重九用质谱法研究烟草花叶病毒外壳蛋白2004植物病毒是重要的植物病原菌之一,通常由衣壳蛋白(Coatprotein,CP)和核酸组成.CP除保护病毒基因外,还与病毒的远距离运输及寄主症状有关.烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)体外保毒期长,寄主范围广,对生产危害极大'[1~3].它含有不同的株系,其衣壳蛋白氨基酸序列及组成不同,而它们的外壳蛋白质亚基都含有约160个氨基酸,相互之间分子量差别很小,这为病毒株系的鉴定带来很大困难.本研究尝试应用质谱方法分析TMV-CP,为植物病毒的研究提供一种新方法.6.学位论文王慧TMV外壳蛋白亚基因组的启动子分析2003烟草花叶病毒(TMW)外壳蛋白(CP)必须通过亚基因组RNA才能被翻译合成.我们以GFP作为报道基因,利用烟草原生质体系统对TMVCP启动子区域进行研究.与移动蛋白(MP)启动子区的SL1茎环区相比较,发现大多数保守序列同样存在于SL1顶部的茎环结构中,因此MP和CP的启动子可能存在相同的识别因子.于是通过一系列碱基替换分析,在CP启动子的核心活性区域做了一些定点突变,使之更接近于MP启动子的二级结构,通过Northern杂交的结果分析,来确定CP启动子一级结构和二级结构对其活性的影响.7.期刊论文吴艳兵.谢荔岩.谢联辉.林奇英.WUYan-bing.XIELi-yan.XIELian-hui.LINQi-ying毛头鬼伞多糖CCP60a对TMV外壳蛋白的影响-植物资源与环境学报2008,17(3)对毛头鬼伞(CoprinuscornatusMuell.exFr.)子实体中的多糖CCP60a进行了提取分离及检测,研究了不同温度条件下CCP60a对烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白体外聚合的影响,并用Westernblotting法研究了CCP60a对TMV外壳蛋白表达的影响.结果表明,经沸水浸提、乙醇分级沉淀、DEAESephadexA-25离子交换柱层析、Sepharose-6B凝胶柱层析和抗TMV活性跟踪检测可得到均一的多糖CCP60a.随温度的提高,CCP60a处理组在320nm处的吸光度值增加幅度明显小于对照组,表明CCP60a对TMV外壳蛋白体外聚合有一定的抑制作用.Westernblotting检测结果显示,CCP60a可以使TMV外壳蛋白的表达明显降低.8.学位论文江陆斌以烟草花叶病毒为载体在植物中表达外源多肽的研究2003烟草花叶病毒(tobaccomosaicvirus,TMV)属烟草花叶病毒属(Tobamovirus),其基因组是带有帽子结构的正义单链RNA,全长6395bp.TMV的一个亚基因组RNA编码了病毒的外壳蛋白(coatprotein,CP),在TMV系统感染烟草后,其表达量可达被感染烟草总蛋白的7﹪.通常,将较短的外源多肽序列插入TMVCP中Gly155的下游,重组病毒仍然能够在宿主植株内被融合CP包装并高效地复制.该文实验工作主要集中在TMV基因组序列、CP中外源小肽的长度和序列特征以及病毒粒子的形态和构象之间的关系等方面等方面的研究,并以此提高利用TMV载体表达外源多肽的能力.在对携带FMDV抗原20肽的重组病毒TMVF20进行亚硝酸钠诱变分析的实验基础上,我们以缺失了TMVCP羧端4个氨基酸(S-P-A-Y)的重组TMV为载体,成功地获得了两个感染强度较高的重组病毒TMVF20TAG和TMVF25TAG(分别表达外源20和25肽).同时,我们以FMDV抗原11肽为外源插入肽,把外源小肽在TMVCP中的融合位点分别移至W152和Y153的下游,并对CP的羧端序列做了不同程度的缺失,这些重组病毒的对烟草的感染活性、病毒后代的稳定性及融合CP的表达情况(2-4毫克/100克新鲜烟草)都接近野生型TMV;并且,用这些重组病毒粒子制备的疫苗在豚鼠和猪的动物实验中亦表现出了对FMDV的良好的免疫效率.这些结果说明缺失TMVCP羧端的部分序列(Y-S-S-P-A-Y)不仅不会影响重组病毒粒子的包装、感染效率及其在疫苗生产领域的应用,而且有助于重组病毒载体携带表达更长的外源肽.在对携带FMDV抗原28肽的重组病毒TMVF28TGA的研究中,我们观察到外源肽中由于半胱氨酸(Cys)的存在致使重组病毒基因组发生了一系列突变,并且产生了一类具有不规则构象的重组病毒粒子(TMVF18TAA).上述突变现象随着TMVF28TGA外源肽中的Cys被替换为其他氨基酸(如Try)而消失.这些结果暗示,外源肽中的某些序列特征(如含有Cys),可能会严重影响融合CP的完整表达乃至重组病毒粒子的稳定包装和规则构象.9.期刊论文刘国坤.谢联辉.林奇英.吴祖建.陈启建15种植物的单宁提取物对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用-植物病理学报2003,33(3)测定了15种植物的乙醇粗提物对TMV的体外抑制作用,其中11种具有明显效果,这11种植物粗提物经水/氯仿萃取,水萃取物具有明显抑制TMV效果,而氯仿萃取物抑制效果差.水萃取物用明胶去除单宁后,基本失去抑制TMV的能力,表明单宁在其中起着重要作用.从杠板归与假槟榔种子中提取的总单宁对TMV具有明显的抑制作用;病毒粒体样品在分别加入这2种植物总单宁后,电镜下表现为聚集结合;TMV分别与这2种植物的单宁混合后,通过透析,可恢复大部分侵染力,表明单宁对病毒并无直接毒害作用;TMV外壳蛋白(CP)与单宁混合后,在蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳中表现为结合现象;单宁对TMV体内抑制复制效果不明显;单宁在接种TMV前后施用并没有降低TMV侵染力;这些结果表明这2种植物单宁对TMV抑制作用可能是与TMV-CP结合而引起病毒侵染力下降或影响病毒CP对侵染位点的识别.10.学位论文马晓东丙酰紫草素对烟草花叶病毒体外钝化作用的研究2001收集了中国不同产地的三种紫草科植物,经鉴定分别为紫草,新疆假紫草和滇紫草.分别从中提取出紫草素,经核磁共振(NMR)验证其结构与文献报道相符.经圆二色谱(CD)测定,这三种物质均为手性化合物,其中从紫草、滇紫草中所得为R构型.用左、右旋紫草素分别人工半合成了丙酰紫草素,其中左旋丙酰紫草素为首次合成.其结构经NMR确证.经圆二色谱和紫外光谱测定,合成的丙酰紫草素构型与原紫草素构型相同.纯化并繁殖烟草花叶病毒(TMV),经电镜检测、紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、质谱(MALDI-TOFMS)检测其纯度、从TMV中提取了衣壳蛋白(coatprotein,CP)和核酸mRNA,分别利用紫外光谱、SDS-PAGE、琼脂糖凝胶电泳测定其纯度.在离体的状态下,用丙酰紫草素处理TMV-RNA.离体状态下将丙酰紫草素与TMV-CP混合,经透析、离心除去未结合的丙酰紫草纱,经UV/VIS测定发现TMV-CP的图谱中出现了丙酰紫草素的特征吸收峰;同时利用MALDI-TOFMS证明了TMV-CP与丙酰紫草素的结合利用.本文链接：授权使用：苏延科(wfxnny)，授权号：8b42cacc-004b-4656-b4d3-9e9200a4242d下载时间：2011年2月22日