消毒剂效果验证

消毒剂消毒效果验证的摸索目录摘要…………………………………………………………………1前言…………………………………………………………………2第一章消毒剂消毒效果验证的背景与目的………………………31.1验证的背景……………………………………………………31.2目的……………………………………………………………3第二章消毒剂消毒效果验证的问题与方法………………………42.1所要探究的问题………………………………………………42.2方法……………………………………………………………4第三章消毒剂消毒效果验证方案………………………………73.1悬液法定量杀灭试验…………………………………………73.2对裸手消毒效果试验…………………………………………143.3消毒剂对佩戴手套后的消毒效果验证………………………163.4消毒剂对物体表面消毒效果验证……………………………223.5试验结论………………………………………………………26参考文献……………………………………………………………27致谢…………………………………………………………………281消毒剂消毒效果验证的摸索摘要：本文通过悬液法定量杀灭试验、消毒剂对裸手消毒效果试验、消毒剂对佩戴手套后的消毒效果试验和消毒剂对物体表面消毒效果试验来评估优洁消毒剂的消毒效果。结果表明：0.2%浓度优洁消毒剂可用于车间无菌手套表面和物体表面消毒（作用0.5min），0.2%优洁消毒剂作用0.5min不可用作人员裸手消毒。关键字：消毒剂；消毒；消毒效果；0.2%优洁ValidationstudyofdisinfectioneffectofdisinfectantAbstract:ThistextistoevaluatethedisinfectioneffectofYoujiedisinfectantbyfourtests:thesuspensionquantitativegermicidaltest,effecttestonbarehand,effecttestonhandsinglovesandeffecttestonequipmentsurface.TheresultsshowthatYoujiedisinfectant(0.2%)canbeusedfordisinfectingtheworkshopsterileglovessurfaceandtheequipmentsurface(durationofactionis0.5min),butcannotbeusedfordisinfectingbarehands.Keywords:Disinfectant;Disinfection;Disinfectioneffect;0.2%Youjie前言2药品是一种特殊的商品，它是直接作用于患者的，这关系到人体的健康，所以国家对药品质量要求很严格。因此制药企业要生产出符合GMP标准的药品，特别是一些无菌药品就要特别重视控制微生物带来的隐患。现在药品生产企业实施GMP管理的重要内容之一就是防止在药品生产的整个过程中出现差错、混淆、污染或交叉污染，因此对洁净厂房的消毒是控制污染的重要措施。为了防止来自微生物方面带来的风险，应按照规定的清洁消毒程序使用消毒剂对厂房及厂房的容器设备进行消毒，消除来自微生物的危害，保证药品的质量，减少不必要的损失，从而给患者提供安全、有效、有保障的药品。因此用消毒剂消毒在药品生产企业中至关重要。第一章消毒剂消毒效果验证的背景与目的31.1消毒剂消毒效果验证的背景消毒剂是用于杀灭传播媒介上的微生物使其达消毒或灭菌要求的制剂，它能有效地净化空气、杀灭或清除在生产厂区内设备上的微生物，消除隐患，这已成为当代防止病原微生物生长传播和繁殖的重要工具。消毒剂分为低效消毒剂、中效消毒剂、高效消毒剂；制药企业常用的消毒剂有乙醇、新洁尔灭、甲醛、戊二醛等。在药品生产企业中，当药品生产结束后，首先要对厂房、容器、设备等清洁消毒，这是为了防止药品污染和交叉污染的必要手段。以前我国的GMP要求较低，与国际的先进水平有较大的差距［1］。新版GMP［2］颁布后，GMP要求大幅度提高，药品生产企业必须积极提高自身管理水平才能适应新要求，这种高要求也包括了洁净厂房的消毒管理。所以验证消毒剂在特定洁净厂房的消毒效果是否符合要求十分重要［3］，因此要建立一套完整、可靠的消毒剂消毒效果的验证方法，找出适合于药品生产企业生产环境的消毒剂的种类和用量，确定洁净区的消毒周期。1.2消毒剂消毒效果验证的目的：药品在生产过程中会遭到来自微生物的污染，因此必须要采取一定措施使微生物污染处于受控状态或者完全被消除，这就需要对消毒剂消毒效果进行验证以确定相应的方案来处理这些问题。在对消毒剂进行消毒效果验证的过程中，主要是要用特定的微生物与消毒剂在规定的使用浓度下接触规定的时间后，对微生物进行培养计数，考察该消毒剂的消毒效果，确定消毒剂消毒后的最长有效时间，并对消毒剂对微生物的杀灭效果进行评价。第二章消毒剂消毒效果验证的问题与方法42.1消毒剂消毒效果验证所要探究的问题现在的药品生产企业对控制药品质量要求越来越规范化，因此厂房及厂房内设备的消毒也变的至关重要。在我国的GMP管理规定中明确表示设备消毒是必要的验证内容之一，所以药品生产企业必须制定出清洁、消毒和灭菌的标准规程，以确保消毒剂效果的有效性。在进行消毒剂消毒效果验证之前，首先要明白这个课题所要探究的几个问题：（1）进行消毒剂消毒效果验证时选择的消毒对象和消毒方式是什么？（2）在消毒剂消毒效果的验证中，要做哪些相应的试验项目？（3）依据生产企业的生产环境，选择何种微生物做菌种为最佳（特别从考察生产企业环境监测的微生物结果、菌种的耐受性等方面进行考虑）？（4）在进行消毒剂消毒效果验证试验时，当达到规定消毒时间终点时，由于有残留消毒剂继续作用的影响，可能导致对杀菌效果有不准确的判断，甚至产生了假阴性的结果，因此，要解决上述问题该用哪些方法？（5）在消毒剂消毒效果的验证中，评价消毒剂的消毒效果时，判断的标准是什么？（6）消毒剂消毒效果验证的试验中所用的实验材料和实验仪器有哪些？2.2消毒剂消毒效果验证方法2.2.1消毒剂消毒剂的作用原理：破坏细胞膜类，阻断细胞食物摄取和废物排泄，钝化关键酶。以下是几种常用的消毒剂：（1）新洁尔灭(苯扎溴铵)：是一种常用的季铵盐类消毒剂，在浓度较低时即可有抑菌的作用；当浓度较高时，可以杀灭多种细菌繁殖体和部分的病毒，但是不能杀灭细菌芽孢，属于低效消毒剂。（2）75%乙醇：适用于一般物体表面消毒以及手和皮肤的消毒，它无法杀灭细菌芽孢和病毒。（3）优洁属于长效、强效、广谱杀菌剂，是一种新型消毒剂，其有效成分5为复合季铵盐和六亚甲基四胺，可有效快速地杀灭细菌繁殖体、芽孢、真菌和部分病毒等，各种微生物对其均无抗药性，抑菌时间较长，可用于一般物体表面消毒，稳定性好，无腐蚀性，无毒无害，并且由于杀菌时不受蛋白质及有机物的干扰，故使用衰减周期长，可循环使用，相对使用成本低。本次验证以优洁消毒剂的杀灭效果为主，同时也可根据此验证方案对75%乙醇、新洁尔灭等消毒剂的杀灭效果进行评价。2.2.2消毒剂消毒效果考察试验消毒剂消毒效果验证包括两项考察：实验室考察和现场考察。实验室考察通常以悬液定量法为主，且试验须重复3次，而现场考察可用来评估消毒剂对相应设施的实际消毒效果。在消毒剂消毒效果试验中，消毒方法和消毒对象有很多。常用的方法有：喷洒法，浸泡法，擦拭法等。常见的对象有：皮肤，洁净区的地面、墙面，设备表面等。此次试验我们采用的消毒方法为喷洒法，消毒对象为人员裸手皮肤、人员佩戴无菌手套后的手套表面和物体表面。根据消毒对象所制定相应的试验方案有：悬液法定量杀灭试验、消毒剂对裸手消毒现场试验、载体喷雾定量杀菌试验、消毒剂对佩戴手套后的手消毒现场试验以及消毒剂对物体表面现场鉴定试验。通过以上几种试验来对消毒剂消毒的效果进行验证。2.2.3菌种的选择在本次验证过程中，我们选择金黄色葡萄球菌（CMCC（B）26003）作为细菌繁殖体中化脓性球菌的代表；大肠杆菌（CMCC（B）44102）作为细菌繁殖体中肠道菌的代表；铜绿假单胞菌（CMCC（B）10104）作为医院感染中最常分离的细菌繁殖体的代表；白色念珠菌（CMCC（F）98001）和黑曲霉菌（CMCC（F）98003）作为致病性真菌的代表；洋葱伯克霍尔德菌作为不同车间环境中耐受菌的代表。2.2.4残留消毒剂的去除在消毒试验中，在达到了规定消毒时间的终点时，要求立即终止残留消毒剂的继续作用，以便更准确地检测出消毒体系中残留存活的微生物及其数量。由于6消毒体系中消毒剂的残留，可能会对微生物的生长繁殖具有一定的抑制作用，因此可能导致对杀菌效果偏高的错误判断，甚至可能会产生假阴性结果。所以去除残留消毒剂，可排除残留消毒剂对微生物的抑制，从而使试验的结果更准确。其方法有化学中和法、过滤冲洗法、稀释法。我们采用化学中和法，选用0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液（0.9%N.S）的中和剂。2.2.5判断标准在试验结束后，通过判定标准来确定是否合格，判定标准是：在悬液定量杀灭试验中，细菌各次试验的杀灭对数值均应≥5.00时，可判定细菌消毒合格；真菌各次试验的杀灭对数值均应≥4.00，可判定真菌污染物消毒合格；在载体定量杀灭试验中，各次试验的杀灭对数值均≥3.00，可判定消毒合格。第三章消毒剂消毒效果验证方案73.1悬液法定量杀灭试验3.1.1试验所需要用的试剂中和剂：0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液（0.9%N.S）；活菌计数用培养基：TSA培养基；稀释液：磷酸盐缓冲液（PBS0.03mol/L）；消毒剂配制用水：纯化水；有机干扰物质；3.1.2试验所需要用的仪器移液器、电动混匀器、计时器、生化培养箱；3.1.3试验所需要用的菌种可根据《消毒技术规范》2002年版[4]“细菌定量杀灭试验”中指导，本次试验选择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉。在增加车间常见的菌：洋葱伯克霍尔德菌3.1.4试验所需要用的消毒液的浓度及作用时间根据优洁消毒液说明书建议浓度为1%-3%，作用时间为1-2min，但根据厂家验证报告0.1%及0.2%的浓度作用5min和15min也能符合规定，因此本次试验浓度选择0.2%，作用时间选择2.5min、5min以及7.5min的条件进行确认，又因车间裸手消毒作用时间可能只有30s，故本次试验同时对0.2%消毒剂作用15s、30s以及45s的条件进行确认。3.1.5试验所需要用到的场所微生物实验室阳性间3.1.6悬液定量杀菌试验操作程序（1）菌悬液：浓度为1×108cfu/ml-5×108cfu/ml（2）消毒液的配制：用纯化水按体积比配制浓度为0.2%的消毒液500ml（3）磷酸盐缓冲液的配制：磷酸盐缓冲液（PBS0.03mol/L）称取无水磷酸氢二钠2.83g、磷酸二氢钾1.36g加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调PH8至7.2-7.4，灭菌后使用（4）有机干扰物质的配制：按30g牛血清白蛋白中加入1000ml蒸馏水的比例配制约100ml，溶解后用0.45um的无菌滤膜进行过滤除菌后使用，未用完的可于2-8℃冰箱中保存（5）试验过程（以浓度为0.2%优洁消毒剂对金黄色葡萄球菌作用2.5min为例）试验组：取无菌大试管加入0.5ml金黄色葡萄球菌菌悬液，再加入0.5ml的有机干扰物质，分别用无菌吸管吸取0.2%的优洁消毒液4.0ml，加入试管中，迅速混匀并立即计时。待金黄色葡萄球菌与0.2%的优洁消毒液相互作用2.5min时，吸取0.5ml试验菌与消毒剂的混合液，加于4.5ml经灭菌的0.1M硫代硫酸钠-生理盐水溶液中，混匀。金黄色葡萄球菌与消毒剂混合液经硫代硫酸钠-生理盐水溶液作用10min后，吸取1.0ml样液，按活菌培养计数测定方法测定存活菌数，每管样液接种2个平皿即可。如果菌液浓度较高时，可进行10倍系列稀释后，在进行活菌培养计数，作为试验组，其计数结果为CX。阳性对