G+球菌的鉴定

革兰氏阳性球菌的种类1、葡萄球菌属2、链球菌属3、微球菌属4、肠球菌属5、气球菌属6、孪生球菌属7、创伤球菌属8、乏养球菌属一、革兰氏阳性球菌的基本特征：在血平板上生长，但在中国篮、麦康凯平板上不生长，提示为革兰氏阳性球菌。二、革兰氏阳性球菌的基本鉴定试验：1.触酶试验是鉴定革兰氏阳性球菌的重要试验，任何G+球菌必须先做触酶试验，是鉴别葡萄球菌与链球菌的初步依据2.凝固酶试验是鉴定葡萄球菌的重要试验三、作为推测性鉴定的重要试验1、菌落特征溶血：血平板上菌落周围的溶血有助于一些细菌的初步鉴定α溶血:菌落周围有一草绿色的环，疑似肺炎链球菌和草绿色链球菌。β溶血：在菌落周围有一完全溶血环，疑似金葡菌和溶血性链球菌。如化脓性链球菌周围产生宽阔清晰的溶血环，无乳链球菌产生一个狭窄的溶血环。2、镜下形态（1）G+球菌、葡萄状、单个或成双排列的疑似葡萄球菌（2）G+球菌、球杆状、链状（长短不一）排列的疑似链球菌（3）G+球菌、矛头状、成双或短链状排列的疑似肺炎链球菌（4）G+球菌、成簇、四联状排列的疑似微球菌属等触酶试验阳性的G+球菌：葡萄球菌属、微球菌属、口腔球菌属、动球菌属、克氏考克菌属、差异球菌属等触酶试验阴性的G+球菌：链球菌属、肠球属、乏养菌属、气球菌属、狡诈球菌属、费克篮姆菌属、孪生球菌属、戈鲁毕卡菌属、创伤球菌属、乳球菌属、明串珠菌属、足球菌属等3、触酶试验3、触酶试验（1）原理：具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催化过氧化氢，放出新生态氧，继而形成分子氧，出现气泡。（2）方法：用接种环挑取固体培养基上的菌落置于洁净的玻片上，然后滴加3%过氧化氢溶液一滴，观察结果。（3）结果判断：在5秒内释放大量的气泡为阳性。4、血浆凝固酶试验（1）原理：金葡菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中纤维蛋白原变成纤维蛋白附着于细菌表面上，发生凝集，用玻片法测出。另一种是菌体生成后释放于培养基中的游离凝固酶，能使凝固酶原变成凝血酶类物质，从而使血浆凝固，可用试管法测出。（2）方法：a.玻片法：取血浆和生理盐水各一滴分别滴到清洁玻片上，挑去待检菌落分别与血浆及盐水混合，如血浆中出现明显凝集颗粒而盐水中无自凝现象者为阳性。b.试管法：取试管两支，分别加入0.5ml（经生理盐水1：4稀释）的血浆，挑取菌落数个加入测定管充分研磨混匀，用一只阳性菌株加入对照管，37℃水浴3-4小时。血浆凝固者为阳性。血浆凝固酶试验---玻片法血浆凝固酶试验---试管法(3)意义凝固酶试验阳性的葡萄球菌：金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌、施氏葡萄球菌聚集亚种、猪葡萄球菌（11~89%阳性）凝固酶试验阴性的葡萄球菌：表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血葡萄球菌、木糖葡萄球菌、头状葡萄球菌、沃氏葡萄球菌等10余种。5、CAMP试验原理：B群链球菌在血平板上能产生CAMP因子，可促使金葡菌β溶血素的活性，故在血平板上两种细菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。其他链球菌一般不产生CAMP因子，无此现象。方法：在血平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条横线，再于该直线的垂直平分线处用被检菌接种一条垂直短线，两线相距3-5mm左右，35℃24小时观察结果。结果观察：在被检菌接种线与金葡接种线之间有一个箭头形或半月形透明溶血区为阳性，可推断为B群链球菌。无溶血区为阴性。意义：作为B群链球菌的鉴定指标之一6、杆菌肽敏感试验原理：A群链球菌对杆菌肽非常敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药，故此试验可鉴别A群链球菌。方法：将被检链球菌，密涂于血平板上，将杆菌肽纸片贴于血平板表面，35℃24小时观察结果结果判断：在杆菌肽周围出现明显抑菌环＞10mm为阳性，则被推断为A群链球菌＜10mm为阴性，为其他群的链球菌。7、奥普妥辛实验（OP试验）原理：Optochin（乙基氢化去甲奎宁）干扰肺炎链球菌叶酸的合成，可抑制其生长，其他链球菌如草绿色链球菌对其不敏感。方法：将待检的a溶血的链球菌均匀的涂布于血平板上，贴放Optochin纸片（含药5mg)35℃孵育18-24小时，观察抑菌圈的大小。结果判断：抑菌圈＞14mm为肺炎链球菌，无或见很窄的抑菌圈为草绿色链球菌。意义；鉴别肺炎链球菌与草绿色链球菌。主要的G+球菌鉴别要点金黄色葡萄球菌鉴别要点1、镜下形态：G+球菌，单个，成簇或葡萄状排列2、菌落特征：在血平板上菌落圆形凸起，边缘清楚，表面光滑，金黄色或白色，周围有β溶血环3、主要生化反应：触酶、DNA酶和血浆凝固酶试验阳性，发酵甘露醇。葡萄球菌的镜下形态金黄色葡萄球菌的菌落形态检查方法幼猫试验标本脓汁，血液，分泌物等分离培养触酶试验血浆凝固酶发酵甘露醇直接涂片镜检革兰阳性葡萄球菌生长现象色素，溶血，生化反应肠毒素检查临床意义1.化脓性感染：（1）皮肤及软组织感染（2）内脏器官感染：肺炎、关节炎、骨髓炎（3）全身性感染：败血症、心内膜炎等致病性与免疫性（1）食物中毒进食含肠毒素食物后1～6h潜伏期，出现恶心、呕吐、上腹痛、腹泻等症状。呕吐最为突出。大多数病人于1～2d内可自行恢复，预后良好。2.毒素性疾病：（2）假膜性肠炎：实质为菌群失调性肠炎，多为耐药金葡菌感染产生肠毒素所致。（3）毒素休克综合征多见于月经期女性，表现为急性高热，低血压，猩红热样皮疹伴脱屑，严重出现休克。（4）烫伤样皮肤综合征红斑起皱大疱脱落腐生葡萄球菌：引起尿路感染、前列腺炎、外伤和败血症溶血性葡萄球菌：引起心内膜炎、败血症、腹膜炎、尿道感染、外伤感染等。链球菌的鉴别要点1、形态：G+球菌，单个、成双或呈链状排列。2、菌落特征：血平板上，菌落较小，灰白色，圆形凸起，周围有不同溶血现象。3、溶血现象：①α溶血②β溶血③γ溶血4、草绿色链球菌的鉴定：人体上呼吸道的正常菌群，通常不致病。如果在血液和无菌体液中检出草绿色链球菌，有临床意义4、推测性鉴定：根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群①.A群链球菌：β溶血，杆菌肽敏感②.B群链球菌：β溶血，CAMP试验阳性③.C群链球菌：β溶血，CAMP试验阴性、杆菌肽耐药、6.5%NaCl耐盐试验阴性④.D群链球菌：β溶血，6.5%NaCl耐盐试验、胆汁七叶苷阳性，45℃生长链球菌的镜下形态所致疾病（1）化脓性感染：引起皮肤、皮下组织感染丹毒、脓胞疮、痈、淋巴管炎，败血症等网状淋巴结炎——丹毒管状淋巴管炎2.猩红热(scarletfever)由产生致热外毒素的化脓性链球菌所致。细菌经咽喉粘膜侵入机体，增殖并产生毒素引起高热、全身红疹等症状，病后获得较强的免疫力。猩红热皮疹3.超敏反应性疾病：A.急性肾小球肾炎:多见于儿童和青少年，大多数由A群M12型链球菌引起。临床表现为蛋白尿、浮肿和高血压。B.风湿热:主要在咽炎后有可能发生，由A族链球菌的多种型别引起。临床表现以关节炎、心肌炎为主。其他链球菌引起的疾病B群链球菌——人类呼吸道、阴道、直肠正常菌群-新生儿：败血症、脑膜炎-婴幼儿：败血症、化脓性关节炎、肺炎-成年人：肾盂肾炎、肺炎、子宫内膜炎甲型溶血性链球菌——口腔、鼻咽腔正常菌群-亚急性细菌性心内膜炎-龋齿D族链球菌——呼吸道、泌尿生殖道的正常菌群可引起泌尿道感染、败血症和心内膜炎。肺炎链球菌的菌落及菌体形态肺炎链球菌的鉴别1、形态：G+球菌，矛头状，成双或短链状排列2、菌落特征：在血平板上，菌落细小，中央凹陷，周围有草绿色溶血环3、主要生化反应：分解菊糖，胆盐溶菌试验阳性，OP试验阳性4、肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌菌落相似，应加以鉴别：①OP试验；②胆汁溶菌试验4、意义：正常存在人的口腔及鼻咽部，抵抗力降低时，引起大叶性肺炎、支气管肺炎。化脓性脑膜炎、中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑脓肿、菌血症和心内膜炎等。肠球菌的鉴别1、形态：G+球菌，单个、成双或短链状排列。2、菌落特征：血平板上，较小、灰白色，湿润，凸起、有α或无溶血环的菌落。3、生化反应肠球菌种间鉴别种名甘露醇山梨醇精氨酸阿拉伯糖动力30℃黄色素粪肠+++---屎肠+-++--鹑鸡+-+++-铅黄+-+-++鸟肠++-+--坚韧--+---恶臭+-----临床意义粪肠球菌与屎肠球菌主要引起医院感染，最常见为尿路感染（大部分与尿道器械操作、导尿有关），其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。微球菌的鉴别1、主要特征：G+球菌，菌体较大，四联或簇状排列，触酶试验阳性。2、临床意义：主要存在于泥土、水及正常人和动物皮肤表面，一般不致病，但可为条件致病菌，引起伤口等局部组织感染，也能引起心内膜炎等疾病。