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四川大学硕士学位论文宁南霉素用于防治烟草花叶病毒TMV侵染机理的探讨姓名：秦世荣申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：杜林方20040505宁南霉素用于防治烟草花叶病毒TMV侵染机理的探讨作者：秦世荣学位授予单位：四川大学相似文献(10条)1.期刊论文秦世荣.张年辉.付竞峰.杜林方.邓光兵.余懋群.胡厚芝.陈家任.万波TMV或宁南霉素处理对烟草叶片及类囊体膜蛋白组成的影响-应用与环境生物学报2004,10(2)对烟草花叶病毒(TMV)侵染、宁南霉素钝化处理的烟草叶片进行了叶片全蛋白多肽组分、类囊体膜蛋白组成的分析.结果表明,TMV侵染或钝化实验的烟草叶片中均出现TMV衣壳蛋白;但是与对照相比,TMV侵染叶片中Rubisco大亚基减少、小亚基增加,类囊体膜蛋白中PsaA、PsaB和Mr=33×103蛋白含量减少.表明TMV侵染要同时影响叶片细胞核基因组和叶绿体基因组的基因表达,从而影响光合作用碳代谢和类囊体膜光系统Ⅰ和Ⅱ.宁南霉素对TMV病毒短时间内具有钝化作用,而较长时间的作用效果不同,10min钝化样品的蛋白组分保持较为完整,而30min钝化样品的多肽缺失较为严重.图5表1参112.学位论文逄丽丽抗烟草花叶病活性物质筛选及作用机制初步研究2005以烟草为材料，以商品药剂宁南霉素、病毒A作对照，对本中心合成的系列新化合物及从贵州道地中草药中提取的化合物或粗提物开展抗TMV活性的筛选研究，进行了上述化合物对TMV的离体治疗、活体保护、钝化及治疗作用的测定。从中发现GU04011具有良好的活体治疗效果(500mg/L浓度下对TMV抑制率达39.87％)；将其制成适宜的剂型：30％可湿性粉剂在500mg/L浓度下对TMV的活体治疗效果达40％；10％乳油在500mg/L浓度下对TMV的防治效果为33.25％，均高于商品药剂宁南霉素(1000mg/L活体治疗抑制率为33.12％，500mg/L，23.19％)。 将GU04011与宁南霉素复配进行抗TMV生物活性研究，筛选出最佳配比(GU04011：宁南霉素3：1)，在最佳使用浓度(500mg/L)下，活体治疗抑制率为44.09％；将3：1比例混合制成30％WP.，500mg/L浓度下抑制率为39.67％。 对药剂的抗病毒作用机理进行研究，结果表明，用GU04011、娃儿藤碱和宁南霉素处理的烟株其PAL、POD、SOD酶活普遍提高，三者均能刺激植物产生抗病性相关的酶，从而提高寄主抗病性，达到抗TMV的目的。 对GU04011及宁南霉素处理(浓度500mg/L)的烟草进行叶绿素含量测定，结果表明，接种TMV的烟株各处理叶绿素含量均低于健康植株。而GU04011及宁南霉紊500mg/L处理的烟草的叶绿素含量明显高于发病植株，介于发病植株和健康植株之间。3.学位论文苑建勋几种药剂抗烟草花叶病毒（TMV）作用机制的初步研究2007植物病毒病是“植物癌症”，其危害仅次于真菌病害，由于植物病毒大多具有专性寄生性和系统侵染性，抗病毒药剂的研究与开发难度较其他农药大，烟草花叶病毒(TMV)的危害也很严重，为了更有效地防治植物病毒的侵入和扩展，国内外学者进行了大量的研究工作，近年来我国科学家发现的具有高抗病毒活性的化合物主要有：从牛心朴子草中分离得到的菲并吲哚里西啶生物碱7-脱甲氧基娃儿藤碱(R-(-)-antofine，安托芬)，人工合成的新型联三唑化合物XY13和XY30以及含氟的α-氨基膦酸酯类化合物病毒星1号和病毒星2号。本论文以商品化药剂BTH、病毒唑、宁南霉素为参比药剂对上述发现的新化合物进行了抗TMV活性的比较研究，探讨了药剂的互作对TMV的影响，并对这些药剂的作用机制进行了初步研究。离体和活体试验结果表明，安托芬的离体抗病毒活性最好，100μg/mL时就达到97％，好于参比药剂宁南霉素和病毒唑。XY13的活体活性在1000μg/mL时为61％。XY30的离体效果要好于活体效果，病毒星1号和病毒星2号的的离体和活体效果较差。本论文还对双剂组合进行了联合毒力作用的初步研究，结果表明，BTH与其他药剂之间的互作具有一定增效作用的趋势，病毒唑、安托芬、病毒星1号、病毒星2号和XY13、XY30之间的组合基本表现相加活性。本论文从化合物对TMV病毒的钝化、脱衣壳、衣壳蛋白体外聚合和药剂诱导寄主病程相关性蛋白的产生以及相关防御酶活性的诱导等五个方面就各化合物抗病毒活性作用机制进行了初步研究，研究结果发现，在待测化合物中，XY30的钝化效果最好，安托芬和xYl3的体内钝化好于体外钝化，各药剂对TMV脱衣壳作用均没有明显的影响，对TMV-CP(capsidprotein)的体外组装也没有显著的影响，推测药剂的作用机制可能主要在于药剂对核酸的影响或病毒浸染过程的影响，除BTH和宁南霉素具有诱导活性并可诱导PAL(苯丙氨酸解氨酶)活性提高外，其他各药剂没有诱导活性。药剂的作用机制还有待于药剂对核酸影响的进一步研究。4.期刊论文邓光兵.万波.胡厚芝.陈家任.余懋群宁南霉素对烟草花叶病毒的生物活性-应用与环境生物学报2004,10(6)研究了宁南霉素(Ningnanmycin)对烟草花叶病毒(tobaccomosaicvirus,TMV)的预防、治疗和钝化作用.结果表明,宁南霉素喷施5d后接种TMV,对烟草花叶病毒的预防效果为58.41%;宁南霉素浓度为150～200μg/mL时,对烟草花叶病毒的治疗效果达79.65%～84.96%,治疗效果最好为接种TMV1d后喷施200μg/mL宁南霉素;宁南霉素对烟草花叶病毒的钝化效果为76.99%～83.19%,混合45min的TMV与宁南霉素等体积混合液效果更好.试验证明,宁南霉素对烟草花叶病有很好的治疗作用,对烟草花叶病毒有显著的钝化效果.图1表3参155.学位论文高兴文4（3H）-喹唑啉酮类Schiff碱合成与生物活性研究2007本论文完成工作归纳为以下几点结论：1.目标化合物3-芳亚甲氨基-4(3H)-喹唑啉酮衍生物的合成(化合物编号：A-E)以邻氨基苯甲酸为原料，通过酰化、环化(或溴化、或硝化)、水合肼取代和缩合等反应分别合成了(a)30个2-甲基-3-芳亚甲氨基-4(3H)-喹唑啉酮的化合物(化合物编号：A，19个为新的化合物)；(b)23个2-甲基-3-芳亚甲氨基-6-溴代-4(3H)-喹唑啉酮的化合物(化合物编号：B，21个为新的化合物)；(c)12个2-甲基-3-芳亚甲氨基-6-硝基-4(3H)-喹唑啉酮的化合物(化合物编号：C，9个为新的化合物)；(d)17个2-苯基-3-芳亚甲氨基-4(3H)-喹唑啉酮的化合物(化合物编号：D，9个为新的化合物)；(e)5个2-(4-吡啶基)-3-芳亚甲氨基-4(3H)-喹唑啉酮化合物(化合物编号：E，4个为新的化合物)；共计87个化合物，其中有62个为新的化合物。对所合成的84个化合物分别进行了物理常数的测定，其结构经过了IR、1HNMR、13CNMR及元素分析确证。2.目标化合物2-芳乙烯基-3-芳亚甲氨基-4(3H)-喹唑啉酮衍生物的合成(化合物编号：F)分别以2-甲基-3-氨基-(或6-取代)-4(3H)-喹唑啉酮和2-甲基-3-芳亚甲氨基-(或6-取代)-4(3H)-喹唑啉酮为原料，通过与取代芳醛缩合反应，合成了51个2-芳1乙烯基-3-芳2亚甲氨基-(或6-取代)-4(3H)-喹唑啉酮衍生物(芳1和芳2相同或不同，化合物编号：F)，其中有40个为新的化合物(对其中43个化合物进行检索)。对所合成的化合物分别进行了物理常数的测定，其结构经过了IR、2HNMR、13CNMR及元素分析确证。3.2-甲基-3-芳亚甲氨基-4(3H)-喹唑啉酮及其中间体合成方法和反应条件优化研究3.1对目标化合物2-甲基-3-芳亚甲氨基-4(3H)-喹唑啉酮及其中间体2-甲基-3-氨基-4(3H)-喹唑啉酮进行了合成工艺改进和优化。3.2采用一步法合成相同芳基取代的2-芳1乙烯基-3-芳2亚甲氨基-4(3H)-喹唑啉酮类化合物(芳1和芳2相同)，两步法合成了不同芳基取代的2-芳1乙烯基-3-芳2亚甲氨基-4(3H)-喹唑啉酮类化台物(芳1和芳2不同)。其中，两步法合成未见文献报道。4.化合物(A-F)的抑菌生物活性研究采用生长速率法，以小麦赤霉病菌(G.zeae)、辣椒枯萎病菌(F.oxysporum)、苹果腐烂病菌(C.mandshurica)为测试对象，对合成目标化合物进行了抑菌活性研究。结果表明，在药剂浓度为50μg／mL下，对小麦赤霉病菌、辣椒枯萎病菌、苹果腐烂病菌的抑制率均在30％以下，明显低于相同药剂浓度下的对照药剂恶霉灵，表现为无抑菌活性。5.部分目标化合物的抗癌活性研究采用MTT法，对目标化合物还进行了离体抗癌活性研究，结果表明部分化合物对人前列腺癌细胞(PC3)和乳腺癌细胞(Bcap37)具有较低的抑制活性。在10μmol／L浓度下，化合物对PC3细胞的抑制率-4.7-11.0％，对Bcap37细胞抑制率-20.7-15.2％，当药剂浓度降至1μmol／L时，化合物对PC3细胞的抑制率-7.1-35.4％，对Bcap37细胞抑制率-9.7-23.9％。6.部分目标化合物的抗TMV活性研究采用半叶法，在药剂的质量浓度均为500mg／L时，对100个化合物进行了活体治疗抗烟草花叶病毒活性测定，测定结果表明：化合物A1、A2、A10、A7、A26、B5、F12、F15、C1、B7、B12、C9表现出较高的抗烟草花叶病毒活性，抑制率分别为48-52％，与商品抗病毒剂宁南霉素活性相当(53％)。选择高效化合物A1、A10、B5、A26、B5、F12、F15、C1、C9、D1、D7、D17、E3、E4、B18、B19、C5进行了TMV的活体保护、钝化作用方式的测定，测定结果表明：化合物F12、B5、D1、D7、D17、E3、E4表现出较高的抗烟草花叶病毒钝化活性，其中E4活性较高，比商品抗病毒剂宁南霉素略低，F12、B5、D1、D7、D17、E3低于E4活性(抑制率为84.6％)，抑制率分别为71.5、73.8、70.8、70.5、78.4、75.1％，其它化合物抗烟草花叶病毒钝化活性均低于70％；化合物F15、A30、D7、E4、B19、E3表现出较高的抗烟草花叶病毒保护活性，其中A5活性较高，比商品抗病毒剂宁南霉素略低，E4、A30、D7、B19、E3低于F15活性(抑制率为51.6％)，抑制率分别为45.7、48.3、42.4、43.1、40.6％。进行了三种化合物处理接种TMV后的烟草植株中，抗TMV的生化研究，结果表明其PAL酶、POD酶、SOD酶等相关酶和调控物质在一定的时间内都具有相关性；对普通烟PR-1a和PR-5基因的研究：A10处理已感染TMV天的普通烟后，普通烟叶片PR-1a和PR-5基因表达增加，说明A10具有诱导PR-1a和PR-5基因表达上调的作用；结果表明A6、B5、A10可诱导pathogenesisrelatedproteins-1基因表达上调，以增加烟草抗病毒的能力，从而阻止TMV病毒的系统感染和远距离侵袭；这些结果为创制具有高效具有农用抗病毒活性的新化合物提供了先导化合物；由此，该类化合物具有较好的抗TMV活性，对该类化合物进行结构优化，筛选出抗烟草花叶病毒的药剂是很有希望的。6.学位论文欧阳贵平新型吡唑类衍生物合成与抗病毒和抗癌生物活性研究2008本论文以1-取代基-3-甲基吡唑酮为起始原料，经多步反应，设计合成一系列新的含5-取代硫醚吡唑肟醚类化合物和5-取代砜吡唑肟醚类化合物(如图所示)，然后进行结构表征和生物测定，希望从中筛选出较高抗TMV生物活性的化合物，并对作用机理进行研究。本论文完成工作归纳为以下几点结论：R1=Ph，3-ClPh，4-ClPh，4-CH3Ph；G1=H，F，Me，OMe；G3代表的芳基杂环，等。1.目标化合物5-取代硫醚-1-取代基-3-甲基吡唑肟醚衍生物的合成(化合物编号：以1-取代芳基-3-甲基吡唑酮为原料，通