microRNA沉默技术

目录microRNAs背景知识介绍microRNAs的背景知识介绍mRNA：信使RNA，转录的模板tRNA：转运RNArRNA：核糖体RNAmicroRNA：微小RNA，起基因调控作用。hnRNA：不均一核RNA，多为mRNA的前体snRNA：小核RNA,对RNA加工方面起作用。ssRNA:作为病毒的线状单链遗传物质dsRNA：作为病毒的线状双链遗传物质siRNA：小干扰RNASat-RNA：卫星RNATR：端粒酶RNA，组成端粒酶的成分之一核酶RNA：起催化反应的RNA。。。。。。。尊重下彼此的智商这些大家都懂的。microRNAs的背景知识介绍microRNA的简介microRNA前体模型非编码RNA，不翻译蛋白质分子量小，仅有18-25个核苷酸构成广泛存在于果蝇，线虫，植物，人体等真核生物中高度保守具有组织特异性和时效性对转录后基因调控起作用microRNAs的背景知识介绍microRNAs的转录与加工miRNA基因Pri-miRNAPre-miRNAmicroRNA靶mRNAmicroRNA沉默技术意义microRNAs沉默技术的意义microRNAs参与的生理过程脂肪代谢细胞凋亡激素分泌时序发育病毒复制细胞分化神经元发育肿瘤发生发展microRNAs沉默技术的意义肿瘤心血管疾病肌肉功能障碍病毒感染神经类疾病在许多疾病中，microRNA的表达均有显著变化高血压病人的microRNA表达变化microRNAs沉默技术的意义科研上，利用microRNA沉默技术可以研究microRNAs的功能，并以此研究基因的调控机制。（看上图）在医疗上，microRNAs沉默技术可以用作基因治疗，调控代谢，治疗疾病（没有图）microRNAs沉默技术microRNAs沉默技术microRNAs的转录与加工无效或低效沉默高效沉默microRNAs沉默技术用单纯的反义寡核苷酸抑制miRNA效果差！！反义寡核苷酸链与miRNA之间亲和力低！！稳定性差！分子改造！！1.提高亲和力！2.延长细胞内滞留时间！microRNAs沉默技术Antagomir寡核苷酸Morpholino寡核苷酸锁核酸（LNA）肽核酸（PNA）以下是一些经常用于沉默miRNA的改造分子，接下来会一一为您介绍。microRNAs沉默技术Antagomir寡核苷酸1.每个核苷酸的呋喃糖2’碳上加甲基。2.两端用磷硫酰修饰。磷硫酰修饰磷硫酰修饰1.提高了对核酸酶的耐受性。2.延长了在胞内的半衰期。甲基甲基microRNAs沉默技术锁核酸（LNA）1.一个亚甲基桥连接核糖的2’氧和4’碳。1.锁定内部构象，降低可塑性，增强骨架稳定性。2.与miRNA亲和力显著提高。3.有良好的错配识别能力。4.没有毒副作用。5.在体内的代谢稳定性也较强。microRNAs沉默技术肽核酸（PNA）Morpholino寡核苷酸人工合成的以吗啉环为骨架的DNA类似物。以中性的肽链酰胺2-氨基乙基甘氨酸键取代DNA中的戊糖磷酸二酯键的DNA类似物。1.靶向于miRNA的溶核加工位点，抑制miRNA的成熟。2.微量而高效性。1.不带电，与miRNA结合没有静电排斥，也不受盐浓度影响。稳定性与特异性也大幅提升。microRNAs沉默技术提呈系统所谓“提呈系统”，就是把刚才说过的“miRNA沉默”分子导入到特定的细胞中与特定miRNA起作用的机制，懂了吗？？从化学性质上讲，miRNA沉默分子与miRNA，siRNA是非常相似的。常见的提呈系统有胆固醇偶联法，高密度脂蛋白偶联法，低密度脂蛋白偶联法，抗体偶联法等。miRNA沉默分子靶向作用分子具有靶向作用的miRNA沉默分子microRNAs沉默技术例证microRNAs沉默技术例证·实验动物：小鼠·沉默分子：antagomir-122·提呈系统：胆固醇偶联·注射方式：尾静脉注射·靶分子：miR-122（肝脏）实验进程1就是我啦！microRNAs沉默技术例证northernbiot分析提示：pS：部分改变修饰成分fS：全部改变修饰成分Mm：有4个位点突变microRNAs沉默技术例证·实验动物：小鼠·沉默分子：antagomir-16·提呈系统：无·注射方式：尾静脉注射·靶分子：miR-16（全身）实验进程怎么还是我！microRNAs沉默技术例证northernbiot分析1.能实现大范围的miRNA抑制效果。2.对脑的miRNA抑制效果不明显。3.对在骨髓中的pre-miRNA无明显抑制效果。microRNAs沉默技术例证实验进程3目的：对基因表达量的影响沉默分子：antigomir-122强化因子：腺病毒转导mir-122试验动物：小鼠试验动物：小鼠一直都是我咯！microRNAs沉默技术例证全RNA提取，进行微阵列数据分析基因表达强度·至少11个基因的表达水平下降。·部分相同的基因表达强化。（大部分是与胆固醇生化合成相关的基因）microRNAs沉默技术例证表型分析·Hmgcr（3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶，胆固醇合成途径的限速酶）活性下降约45%。·血浆胆固醇含量下降44%。人文哲理及致谢人文哲理及致谢mRNA沉默分子miRNA配对结合配对结合抑制抑制人文哲理及致谢mRNA沉默分子miRNA基因B基因A环境蛋白质（酶）人工合成哲理思考事物之间的联系的普遍的，万物相生相克，牵一发而动全身马克思（1818-1883）mRNA沉默分子miRNA基因B基因A环境蛋白质（酶）人工合成致谢谢谢观赏！祝大家暑假快乐。参考文献：①JoshiSR,McLendonJM,ComerBS,GerthofferWT.MicroRNAs-controlofessentialgenes:Implicationsforpulmonaryvasculardisease.Pulmonarycirculation.2011;1:357-64.②JanKru¨tzfeldt1,NikolausRajewsky3,RaviBraich,KallanthottathilG.Rajeev,ThomasTuschl,MuthiahManoharan&MarkusStoffel.SilencingofmicroRNAsinvivowith‘antagomirs’.Nature.2005;③夏新，张小敏，宋鹏飞，王爽.反义寡核苷酸介导的miRNA沉默研究.安徽农业科学.2011.39(24):14545-14547④Ambros,V.ThefunctionsofanimalmicroRNAs.Nature431,350–-355