第二章(中药制剂的鉴别)

第二章中药制剂的鉴别中药制剂的鉴别：利用一定的方法来确定中药制剂中原料药的组成，从而判断该制剂的真伪。性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别第一节性状鉴别中药制剂的性状：指除去包装后的性状。制剂的性状指成品的颜色、形状、气味等。片剂、丸剂如有包衣的还应描述出去包衣后的片心、丸心的颜色及气味；硬胶囊剂应写明出去胶囊后内容物的性状。包括：颜色、形态、形状、气、味、其他（如含滑石的制剂，手捻有滑腻感）。物理常数：折光率、旋光度、比旋度、凝点、熔点、相对密度性状的内容第二节显微鉴别中药制剂的显微鉴别：利用显微镜来观察中药制剂中原药材的组织碎片、细胞或内含物等特征，从而鉴别制剂的处方组成。《中药药典》常用鉴别中药制剂的方法特点一般选取制成剂型后可以重现各味药的主要特征作为制剂的鉴别特征。如以原粉入药的药材。选择制剂的显微鉴别指标时，用能相互区别，互不干扰，能表明该药味存在的显微特征作为鉴别依据。如“六味地黄丸”中川贝的淀粉粒。第三节理化鉴别定义：针对所含药材的主要化学成分，采用物理的、化学的或物理化学的方法进行检定，以确定该药材是否在制剂中真的存在，从而判别真伪。药材的选择：1力争全部进行鉴别2首选选择君药3其次选择臣药4毒剧药、贵细一化学反应法二微量升华法三光谱法四色谱法目前中国药典收载的理化鉴别方法有：化学反应法、微量升华法、光谱法和色谱法。其中色谱法尤其是薄层色谱法得到广泛的应用，这主要是由于色谱法具有分离分析双重功能，从而大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属性，并成为今后中药制剂鉴别的发展方向。一化学反应法1原理：利用检测试剂与制剂中的指标性成分发生化学反应，根据所产生的颜色、沉淀或气体等现象，来判断某些成分或某些药味的有无。2特点：（1）操作简便，适用性较强（2）其否定功能往往强于肯定功能,专属性较差。逐渐被专属性较强的薄层鉴别法取代。2005年版《药典》在鉴别制剂中的大黄、决明子、何首乌等药味时，已不再采用蒽醌的颜色反应，而收载了薄层鉴别法。（3）易发生假阳性或假阴性反应解决方法如下：①对样品进行预处理，除去干扰性成分，富集被检成分。②选用专属性较强的检测试剂。③必要时做阳性或阴性对照试验加以验证，保证其专属性和灵敏度。3提取操作：（1）酸性乙醇回流：酚类、有机酸、生物碱等。（2）水冷浸：氨基酸、蛋白质。（3）水温浸：单糖、多糖、鞣质、皂苷等。（4）乙醚等低极性有机试剂：苷元。（5）挥去乙醚的药渣用甲醇超声：苷。（6）水蒸气蒸馏：挥发油。4常用的一般化学反应主要用于制剂中生物碱、黄酮类、蒽醌类、皂苷、香豆素、萜类以及各种矿物类成分的鉴别（1）生物碱碘化铋钾反应产生红棕色沉淀碘化汞钾反应产生类白色沉淀硅钨酸反应产生白色沉淀苦味酸反应产生黄色结晶性沉淀需在酸性条件下进行。注意事先排除其它成分的干扰。少数生物碱不与上述通用沉淀试剂反应，而具有专属性较强的其它反应。（2）黄酮类化合物最多使用的检识反应为盐酸-镁粉反应，呈紫红色。大山楂丸（山楂）、抗骨增生丸（淫羊藿）、参茸保胎丸（黄芩）等。此外，黄芩提取物采用二氯氧锆-盐酸显色反应进行检识。（3）蒽醌类化合物主要应用碱液反应（Borntrager反应），阳性反应呈红色，加酸红色褪去呈黄色。例如大黄流浸膏。（4）皂苷常用的定性鉴别反应有：①泡沫反应样品水溶液振摇后，产生持久性泡沫。②醋酐-浓硫酸反应甾体皂苷呈现污绿色，三萜皂苷呈现红、红紫色。③浓硫酸反应呈现红、红紫色。④三氯化锑或五氯化锑反应氯仿液呈紫兰色。⑤氯仿-浓硫酸反应氯仿层出现红色或兰色，并具绿色荧光。地奥心血康胶囊（黄山药和穿山龙薯蓣的提取物）、养心定悸膏（甘草、红参、麦冬）。（5）香豆素、内酯类和酚类①氯亚氨基-2，6-二氯醌-四硼酸钠反应（Gibbs反应），呈现蓝色。②异羟肟酸铁反应呈红色。应用品种有：养阴清肺膏（牡丹皮）、前列舒丸（牡丹皮）等。（6）挥发性成分主要使用香草醛-浓硫酸反应检识此类成分，正反应呈红、红紫色。应用品种主要有：万应锭（冰片）、牛黄解毒片（冰片）、养心定悸膏（桂枝、生姜）等。二微量升华法1原理：利用某些成分的升华性，在一定温度下将其从制剂中升华分离出来，并以升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴别的依据。2特点：简便、实用，由于升华性仅为少数中药化学成分所具有且升华物纯度较高，故专属性较好。3操作方法：微量升华法常用，少数使用坩埚法或蒸发皿法。三光谱法1紫外光谱法利用药材中成分共轭体系产生的紫外吸收特征。木香槟榔丸处方：木香、槟榔、枳壳、陈皮、青皮（醋炒）、香附（醋制）、三棱（醋制）、莪术（醋制）取本品粉末4g，置蒸馏瓶中，加水10ml，使供试品湿润后，水蒸汽蒸馏，收集馏液约100ml，照紫外分光光度法（中国药典附录VA）测定，在253nm波长处有最大吸收。2荧光鉴别法利用制剂中某些成分在可见光或紫外光照射下能产生一定颜色荧光的性质，对中药制剂进行鉴别。有的成分本身不具荧光性，但加酸、碱处理后，或经其它化学方法处理后也可产生荧光供鉴别用。3红外光谱法分子的官能团信息和谱中的指纹区信息。四色谱法（一）薄层色谱法（二）气相色谱法（三）高效液相色谱法（一）薄层色谱鉴别法1原理相同物质在同一的色谱条件下，表现出相同的色谱行为。在同一块薄层板上点供试品和对照物，在相同条件下展开，显色检出色谱斑点后，计算各斑点的比移值（Rf）并将所得供试品与对照物的色谱图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。限度检查时要求供试品中的待检斑点颜色或荧光强度不得更深。含量测定采用薄层色谱扫描法。2特点简便、快速、易普及、具有分离和分析双重功能，且采用供试品与标准对照物同板对比分析法，专属性亦较强。3用途除用于鉴别外，还用于限度检查和含量测定。4要求：系统适用性试验（05版药典新增）①检测灵敏度（限量检查时要求）采用供试品溶液和对照品溶液与稀释若干倍的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一块薄层板上点样、展开、检视，后者应显示清晰的斑点。②分离度鉴别时要求对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点，应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时，要求定量斑点与相邻斑点之间有较好的分离度，除另有规定外，分离度应大于1.0。分离度（R）的计算公式R=2(d2-d1)/(W1+W2)d1后一成分斑点（峰）与原点的距离；d2前一成分斑点（峰）与原点的距离；W1及W2为相邻两成分斑（峰）点各自的点的展向长度（峰宽）。ABW1W2d1d2CAB化合物A的Rf=a/ca化合物B的Rf=b/cb起始线溶剂前沿比移值(Rf)样品经展开后，化合物斑点相对位置的表示，是化合物在两相(吸附剂与展开剂系统)中迁移位置，通过计算求出数值：Rf＝原点至化合物斑点中心的距离(x)/原点至展开剂前沿的距离(C)③重复性（含量测定时要求）同一供试品溶液在同一块薄层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差(RSD)应不大于3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。5材料（1）薄层板药典中分析大多数品种采用硅胶薄层色谱法，少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。常用的有硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板。除另有规定外，一般要求使用市售薄层板。市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板两种。此外尚有纤维素薄层板、C18键合相薄层板、氨基键合相薄层板、腈基键合相薄层板、二醇基键合相薄层板等。附：自制薄层板自制薄层板通常使用玻璃，规格常有10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm、20cm×20cm。常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254等。其颗粒大小，一般要求直径为10～40μm。薄层板多采用湿法制备，能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层（250～300μm）。除手工直接铺制外，还可采用涂布器。涂布器有手动、半自动、全自动等类型。（2）对照物和阴性对照方法①对照物A对照物的分类：为三种，依次是化学对照品（单体化学成分）、对照药材和对照提取物B对照物的设置方式：有四种，依次为设置一种或数种对照品、设置对照提取物、设置一种或数种对照药材和同时设置对照品和对照药材。C对照物有称之为阳性对照。②阴性对照试验A目的：为了考察制剂中其他药味对欲鉴定药味在薄层色谱中是否有干扰。B阴性对照溶液的制备：从制剂处方中减去欲鉴定的药味，其他所有各药味按制剂处方加工处理，再以供试品溶液相同的方法制得。标准化学对照品标准化学对照品对照药材（3）点样器材为了增强药品定性鉴别的可比性，药典规定采用定量点样。最常用的是微升毛细管（定容毛细管），还可用点样辅助设备，如点样支架、半自动或自动点样器。（4）展开容器专用的展开缸有水平式及直立式两种类型。上行展开一般使用直立展开缸，它又分为平底式和双槽式，双槽展开缸具有节省溶剂、便于预平衡、可控制展开箱内的湿度等优点。展开缸盖子应能密闭，体积应与薄层板大小相适应。（5）显色（检视）装置展开后的薄层板，多需经过显色（检视）方法使板上的被检成分斑点显色后便与观察和检识。喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀雾状喷出。浸渍显色可用专用玻璃器皿或展开缸做为浸渍槽。蒸气熏蒸显色可在双槽展开缸或适宜的干燥器中进行。荧光检视装置为可见光；254nm及365nm紫外光源的荧光灯下进行。喷雾显色荧光显色6操作过程薄层板活化→点样→展开→显色与检视→结果判断（1）薄层板的活化吸附原理的薄层法用板应在110℃活化30分钟，放干燥器中备用。①市售薄层板：如在贮放期间被空气中杂质污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗后活化。②自制薄层板：除另有规定外，将1份固定相和3份水（或0.2%～0.5%羧甲基纤维素钠水溶液）在研钵中向同一方向研磨混合，去除表面的气泡后铺板，置水平台上室温下晾干后，在反射光及透射光下检查其质量，若板面不均匀、不平整或有麻点、有气泡、有破损及污染等情况，应重新铺制检查合格后活化。（2）点样①供试品溶液和对照物溶液的制备多采用易挥发溶剂溶解供试品及对照物。②点样的操作除另有规定外，在干燥洁净的环境，用专用毛细管或半自动、自动点样器械点样于薄层板上形成原点。原点一般为圆点状或窄细的条带状。原点基线距板底边10～15mm，高效板原点基线离底边8～10mm。圆点状原点直径一般不大于3mm；条带状的宽度一般为5～10mm。高效板条带宽度为4～8mm，原点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般不少于8mm，高效板样品间隔不少于5mm。毛细管接触点样时应少量多次点加（每次溶剂挥干后点下一次），才能保证原点小而圆。还需注意勿损伤薄层表面，点加条带原点时应注意条带的均匀性，用喷雾状条带点样器，可保证点样的质量。原点起始线≥5mm≥8mm8~15cm1~1.5cm溶剂前沿展开剂液面原点（展开距离）(点样位置)（3）展开展开前一般需用展开剂对展开缸进行预平衡，即使缸内展开剂气液两相达到动态平衡，该过程亦称“饱和”。为此可在展开缸内加入适量展开剂，密闭，保持15～30分钟。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用。展开剂配制后若分层，则应按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层）使用。若薄层板需同时预平衡，可将点样后的薄层板放入双槽展开缸的一侧槽中，另一侧槽中加入展开剂，如上法预平衡。预平衡后，迅速将薄层板放入展开槽中，立即密闭，展开。展开时薄层板浸入展开剂的深度以液面距原点5mm为宜。溶剂前沿达到规定的展距后，取出薄层板，晾干，待检测。一般上行展开8～15cm，高效板上行展开5～8cm。必要时可进行二次展开或双向展开。（4）显色与检视①颜色较深的成分可直接在日光下检视其斑点。②无色或浅色的成分多用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或再加热使之显色，在日光下检视。浸渍显色时，可将展开后的薄层板平稳垂直地放入盛有显色剂的浸渍槽中一至数秒钟后取出，并揩净薄层板背面残存的试剂。斑点显色均匀是其优点，但有的样品经试剂浸渍后，斑点容易被浸润而产生拖尾。加热显色应注意加热时间和温度，尤其是含羧甲基纤维素钠的薄层板，加热温度过高或加热时间过长，容易引起板面焦化，若用硫酸或含硫