阪崎肠杆菌的测定

讲解人：冷静阪崎肠杆菌的概述1961——英国2例产黄色素阴沟肠杆菌(阪崎肠杆菌)致新生儿脑膜炎1980——将产黄色素的阴沟肠杆菌重新分类命名为阪崎肠杆菌（Enterobactersakazakii）2002年，国际食品微生物学规格委员会（ICMSF）将阪崎肠杆菌归类为“对特殊人群具有严重危害，威胁生命或者产生器质性慢性后遗症、长期影响”的微生物2004年2月，WHO/FAO就婴儿配方奶粉含阪崎肠杆菌课题共同召开专家会议，做了初步的危险评估，将阪崎肠杆菌归类于“A”类微生物，与严重的沙门氏菌相提并论2004年3月，CAC食品卫生委员会（CCFH）同意尽快进行修订婴幼儿食品卫生操作国际标准，包括阪崎肠杆菌及相关微生物的微生物学标准阪崎肠杆菌的分布1.环境原油、切削液、苍蝇、食品加工厂（奶制品、谷类、巧克力、马铃薯粉），医院（空气、听诊器、临床食品）、家庭、温泉、鼠、沉积物、沼泽地、土壤2.食品及相关用品啤酒杯、干酪、婴儿配方奶粉和豆粉、婴儿配方粉冲调用品（搅拌器、勺子、甁刷），普通奶粉、碎牛肉、肉类、香肠、发酵面包、豆腐、蔬菜、水（管道、生物膜）、调味品婴儿配方粉中的污染状况公共卫生关注的婴儿配方粉中阪崎肠杆菌的来源包括以下2种情况：内在污染—二次污染如：加工环境中微生物的存在；加工装置的表面微生物的存在，热处理后，与干燥基粉混合的加入成分中存在的微生物。外源性污染—配方粉中调制环境和调制器皿受阪崎污染的配方粉或调制配方在较高温度下存放，食用前不加热或加热不彻底，喂食时间较长等都可导致阪崎有机会生长繁殖，增加患病的危险性。阪崎肠杆菌的危害婴儿：1.脑膜炎2.坏死性小肠结肠炎3.菌血症•严重的神经系统后遗症成人：局部感染、菌血症、术后骨髓炎阪崎肠杆菌的生物学特征1、G－，周身鞭毛，兼性厌氧2、肠杆菌科克罗诺杆菌属3、在6℃~47℃范围内均可生长，最适35℃~37℃4、平均繁殖时间在23℃为40min，10℃为4.98h，冷藏条件下可以生长5、在TSA培养基上产生黄色色素6、产生α-葡萄糖苷酶，其它肠杆菌均不产生；7、较强的耐干燥性，耐高渗透压，“干燥逆境抗性”比其他，大多数乳品中分离得到的肠杆菌更加耐热，但标准的高温短时巴氏杀菌可消灭易感人群•阪崎肠杆菌可引起各年龄段的感染，但从报道病例的年龄分布来看，高危人群主要是婴儿（即＜1岁的儿童），新生儿（≤28天）、尤其是早产儿、低出生体重或免疫力下的婴儿，发生严重感染的危险性最高。•母亲HIV阳性的婴儿主要感染渠道虽然现在还不能确定阪崎肠杆菌的宿主和传播模型，但在多起新生儿阪崎肠杆菌感染事件的调查中发现婴幼儿配方粉是主要的感染渠道阪崎检测步骤1前增菌2选择性增菌3平板分离4平板确认5生化鉴定阪崎肠杆菌检验——前增菌操作：100g样品+900mL增菌液，培养18h±2hGB使用的增菌液为BPW主要作用：营养丰富，更利于食品检验具有缓冲体系未混匀混合均匀阪崎肠杆菌检验——选择性增菌增菌操作：1mL样液+10mL增菌液，44℃±0.5℃培养24h±2h培养基的作用改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨加万古霉素增菌液(mLST-Vm)，Vm有效抑制G+，同时能在高温下长的更好。而较高温度可以抑制其他细菌生长mLST含盐高，利于筛选高渗透压的阪崎因前增菌优化，仅使用1mL前增菌液即可注：mLST-Vm，灭菌后使用前加Vm，放置不超24h要求44℃培养，温度波动＜0.5℃阪崎肠杆菌检验——平板分离操作：各取培养物一环，接种显色平板，培养24h±2h培养基作用显色培养基•显色培养基利用阪崎特异性α-葡萄糖苷酶原理，分解底物形成蓝绿色菌落，选择性极佳阪崎显色培养基阪崎肠杆菌检验——平板确认操作：挑取1~5个典型或疑似菌落，划线于胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）25℃±1℃培养在TSA培养基上产生黄色色素生化鉴定（API20E）步骤一步骤二步骤三生化鉴定（API20E）