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(1)图中基因工程的基本过程可以概括为“四步曲”：即；；；。(2)能否利用人的皮肤细胞来完成①过程？，为什么？。目的基因的获取基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定将目的基因导入受体细胞不能胰岛素基因在人的皮肤细胞中不表达，没有相应的mRNA。下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图回答：(3)过程②必需的酶是酶，过程③必需的酶是酶。(4)在利用AB获得C的过程中，必须用切割A和B，使它们产生，再加入，才可形成C。(5)为使过程⑧更易进行，可用(药剂)处理D。逆转录DNA解旋同一种限制性内切酶相同的黏性末端DNA连接酶CaCl2临沂二中生物备课组高三第一轮复习：选修三考纲下载1.基因工程的诞生Ⅰ2.基因工程的原理及技术Ⅱ热点提示1.基因工程的实质2.基因工程操作的四步曲及其操作实例考点1、基因工程的基本工具及其作用原理（1）基因的“剪刀”：限制性核酸内切酶来源作用特点作用结果作用实质发现意义使DNA重组成为可能只能识别和切割DNA分子中一小段特殊的核苷酸序列形成黏性末端或平末端使特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开多数来自原核生物(2)基因的针线：DNA连接酶作用实质：将2个DNA片段连接在一起，形成重组DNA分子。E·coli连接酶只能连接黏性末端；T4连接酶既可“缝合”黏性末端，又可“缝合”平末端。两种不同DNA连接酶的区别DNA连接酶和DNA聚合酶的比较DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链是否需要模板连接部位在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段上，形成磷酸二酯键双链单链不需要需要3.基因工程的载体——质粒动植物病毒λ噬菌体的衍生物(1)本质：小型环状DNA分子。(2)具备的条件不会破坏受体细胞能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。有多个限制性核酸内切酶切割位点，以便与外源基因连接。具有某些遗传标记基因，以便进行鉴定与筛选。限制性核酸内切酶切割位点必须在所需的标记基因之外筛选含有目的基因的受体细胞(1)原理：质粒上有抗性基因。(2)方法：利用选择培养基筛选。（含四环素抗性基因）即时突破1.(2007·全国高考Ⅱ,4)下列有关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是()A．一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列B．限制性核酸内切酶的活性受温度影响C．限制性核酸内切酶能识别和切割RNAD．限制性核酸内切酶可从原核生物中提取答案：C2.下列关于DNA连接酶作用的叙述，正确的是()A．将单个核苷酸加到某DNA片段末端，形成磷酸二酯键B．将断开的两个DNA片段的骨架连接起来，重新形成磷酸二酯键C．连接两条DNA链上碱基之间的氢键D．只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来,而不能将双链DNA片段末端之间进行连接答案：B考点2基因工程的基本操作程序(一)基因工程图解：抗虫棉的培育过程目的基因的获取基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定将目的基因导入受体细胞(二)基本操作步骤1.获取目的基因(1)从基因文库中获取(2)PCR技术(扩增)(3)人工合成目的基因化学合成法、逆转录法获得、2．基因表达载体的构建(核心步骤)表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因将含有目的基因的DNA与质粒表达载体用同一种限制性内切酶切割，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有多少种？3．将目的基因导入受体细胞生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞受体细胞体细胞受精卵受精卵原核细胞方法农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法显微注射法感受态细胞法（Ca2+）4、目的基因的检测与鉴定②表达检测转录检测：分子杂交法检测mRNA翻译检测：免疫法，提取蛋白质用相应的抗体进行抗体——抗原杂交③个体生物学水平鉴定：如对转基因作物进行抗虫或抗病等的接种实验。分子水平①导入检测：DNA分子杂交法(使用DNA探针)。(4)目的基因的检测与鉴定类型检测内容方法结果显示分子检测导入检测目的基因是否进入受体细胞DNA分子杂交(DNA和DNA之间)杂交带转录检测目的基因是否转录出mRNA分子杂交(DNA和mRNA之间)杂交带翻译检测目的基因是否翻译成蛋白质抗原—抗体杂交杂交带个体水平检测包括做抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；对基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较，以确定功能活性是否相同(2008·海南高考)下图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因。tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶切位点。据图回答：(1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有____________、___________、________________三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行_________________________________________________。(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是__________________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物有_______________。(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是________，其合成的产物是________。(4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是________。．答案：（1）目的基因-载体连接物载体-载体连接物目的基因-目的基因连接物分离纯化（2）载体-载体连接物目的基因-载体连接物、载体-载体连接物（3）启动子mRNA（4）EcoRⅠ和BamHⅠ作业：完成学案228-229页习题。考点3：基因工程的应用3．基因工程的应用(1）植物的抗虫基因Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等(2)乳腺生物反应器与微生物生产的比较类型项目乳腺生物反应器微生物生产基因结构动物基因结构与人类基因结构相同与人类基因结构不同基因表达与天然蛋白质活性没有区别由于缺少内质网、高尔基体等细胞器，产物可能不具有生物活性产物提取从乳汁中较易分离提取从细胞中提取，较为复杂生产设备畜牧业生产，加提取设备工业生产，设备精良(3)基因治疗项目类型外源基因类型及举例过程特点成果举例体外基因治疗腺苷酸脱氨酶基因①从病人体内获得某种细胞②细胞培养③体外完成基因转移④筛选并扩增培养⑤重新输入患者体内操作复杂，但成功率高治疗复合型免疫缺陷症项目类型外源基因类型及举例过程特点成果举例体内基因治疗治疗遗传性囊性纤维化病的基因外源基因→载体携带体内相应组织细胞操作简单，成功率低治疗遗传性囊性纤维化病转移