BCR-ABL概述

BCR-ABL上海睿昂技术部主要内容典型BCR-ABL融合基因检测不典型BCR-ABL融合基因检测ABL激酶区耐药检测相关检测产品典型BCR-ABL融合基因检测背景知识•t（9;22）(q34;q11)易位形成•存在于95%的慢性髓细胞白血病(CML)，20%-30%的成人急性淋巴细胞白血病(ALL)和2%-5%的儿童ALL患者中。•根据BCR基因的断裂点不同，可分为m-BCR（p190），M-BCR(p210)，u-BCR(p230)三种。•在30-50%的成人ph+的ALL，20-30%儿童ph+的ALL病例中BCR/ABL融合基因是p210型的。•60%的ph+的ALL患者的BCR-ABL融合基因是p190型的。•其中P230融合基因非常罕见。•p190刺激细胞增殖的能力比p210要强，病情发展快、恶性程度更高，BCR-ABLBCR-ABL•在ALL中，Ph阳性和随之出现的BCR/ABL融合基因是一个非常不好的标志，它影响着病人血相的完全缓解率和可能的生成率。•该基因阳性的病人，可用格列卫(TKI)进行治疗。•但是BCR-ABL阳性的ALL患者预后差，5年存活率20%，因此这些患者在缓解后需进行骨髓移植治疗。注：IS(国际标准化)Ph（费城染色体）TKI（酪氨酸激酶抑制剂）初诊CML时需做BCR-ABL基因检测进行确诊（Ph)慢性髓系白血病(CML)慢性期患者的诊断及初始治疗示意图伊马替尼400mg每日1次尼洛替尼300mgBID达沙替尼100mg每日1次症状体征：脾大情况血常规血生化检查HLA配型骨髓穿刺及活检骨髓评价原始细胞比例嗜碱粒细胞比例细胞遗传学分析FISH检测QPCR（IS）检测判断风险分期成人CML慢性期考虑治疗方案:①TKI②干细胞移植③临床试验Ph(-)BCR-ABL融合基因(-)Ph(+)BCR-ABL融合基因(+)诊断为其他疾病（排除CML）注：IS(国际标准化)Ph（费城染色体）TKI（酪氨酸激酶抑制剂）治疗3个月后BCR-ABL定量检测对诊疗方案选择十分重要注：PCyR(部分细胞遗传学反应)CCyR(完全细胞遗传学反应)时间反应推荐方案3个月BCR-ABL/ABL1≤10%(IS)或PCyR继续使用相同的TKI药物BCR-ABL/ABL110%(IS)或未达到PCyR伊马替尼为主要治疗药物更换可替代的TKI药物加大伊马替尼的使用量，最大可至800mg。（在没有可替代的TKI药物时）达沙替尼或尼洛替尼为这也要治疗药物继续使用同样的TKI药物或更换可替代的TKI药物（除了伊马替尼）6个月BCR-ABL/ABL1≤10%(IS)或PCyR继续使用相同的TKI药物BCR-ABL/ABL110%(IS)或未达到PCyR更换可替代的TKI药物12个月CCyR继续使用相同的TKI药物PCyR继续使用相同的TKI药物或更换可替代的TKI药物加大伊马替尼的使用量，最大可至800mg。（在没有可替代的TKI药物时）有少量或没有细胞遗传学反应更换可替代的TKI药物细胞遗传学复发更换可替代的TKI药物加大伊马替尼的使用量，最大可至800mg。（在没有可替代的TKI药物时）18个月CCyR继续使用相同的TKI药物PCyR更换可替代的TKI药物细胞遗传学复发更换可替代的TKI药物NCCN推荐CML跟踪治疗监测标准CML-如何进行相关实验室检测QPCR检测：1,在诊断时;2,当患者对治疗有反应时,每三个月检测一次;达到CCyR后，3年时间里每三个月检测一次，之后每3-6个月检测一次；3，若发现在MMR阶段,BCR-ABL上升（1Log），应在1-3个月内重复QPCR检测.对数级减少BCR-ABL下降基线-1log-2log-3log-4log-5log国际标准（IS）100%10%1.0%0.1%0.01%0.001%完全血液学缓解CHR完全细胞遗传学缓解CCYR主要分子学缓解MMR完全分子学缓解CMR（检测不到BCR-ABL转录）BCR-ABL（%）CML分子学缓解的评估标准BCR-ABL融合基因定量的意义1、对BCR-ABL融合基因的检测不仅可以对该类病人进行确诊，而且可以根据定量的结果制定合适的治疗方案2、在治疗过程中，根据融合基因的定量情况，对疗效进行评价和预后判断3、在达临床缓解后，对融合基因进行定量检测还可以对复发进行预测，从而确定干预性治疗的时间，剂量等，使病人获得一个长的无病生存期不典型BCR-ABL融合基因检测不典型BCR-ABL融合基因•除了三类典型的BCR-ABL融合基因外，约有1%的CML患者其断裂点不在以上常见的位点，从而形成不典型BCR-ABL融合基因亚型，包括e3a2、e6a2、e8a2、e13a2、e19a2、e14a3、e1a3、e13a3等。•由于BCR-ABL常规检测类型中并不包括少见的不典型BCR-ABL融合基因亚型，因此容易导致PCR检测结果的假阴性，延误该类病人的诊断和治疗。e6a2来源：ActaHaematol.2009.7.29;122(1):11-16.[Epubaheadofprint]Links具有bcr-abl罕见断裂点e6a2的2位病人伊马替尼无效e1a3测序结果：采用VCP化疗方案联合伊马替尼治疗1个月后，BCR-ABL融合基因转阴，进一步证实e1a3对TKI敏感。e14a3和e19a2伴不典型BCR-ABL融合基因的CML发病率极低，酪氨酸及酶抑制剂或HSCT都可以取得疗效。实例分析：e13a34例标本验证：FISH检测阳性，但是筛查或BCR-ABL荧光定量检测结果阴性。不典型BCR-ABL融合基因荧光验证结果：e13a3不典型BCR-ABL荧光检测结果（标本验证）全基因组测序发现新的融合方式：e13a2DetectionandcharacterizationofanovelBCR-ABL1fusioninchronicmyeloidleukemiabynext-generationsequencing这个初诊为CML，染色体核型分析未见分裂像，所有BCR-ABL1检测都是阴性.经NGSWGS检测，发现一个新的BCR-ABL1融合基因(e13a2).CANCERBIOLOGY&THERAPY2016,VOL.0,NO.0,1–7CML案例,细胞遗传学分析和FISH检测结果费城易位，而BCR-ABL1检测是阴性。经NGSWGS检测，发现一个新的BCR-ABL1融合基因(e14a3).全基因组测序发现新的融合方式：e14a3Lyuetal.MolecularCytogenetics(2016)9:47DOI10.1186/s13039-016-0257-5AnovelBCR-ABL1fusiongeneanditstranscriptinaCMLcase.ABL激酶区耐药检测背景知识•近年来出现的靶向治疗药物，酪氨酸激酶抑制剂(tyrosinekinaseinhibitors，TKIs)因药物安全系数高，且服用方便，对患者生活质量影响小，被广泛应用于临床治疗CML。其中伊马替尼逐渐取代传统治疗方法，成为CML的一线治疗方案。•随着伊马替尼广泛应用于临床，部分患者在服药过程中失去了对于伊马替尼的有效反应，或出现疾病进展，研究发现是ABL激酶区突变导致，因此早期发现BCR-ABL突变，监测疾病进展和伊马替尼反应情况，对于疾病诊疗至关重要。ABL激酶区突变种类伊马替尼耐药机制中，主要是BCR-ABL点突变，超过90%，可分为4类：在ATP结合位点形成突变(P-loop)、发生于激活环，阻止形成伊马替尼结合所需的构象激酶发生于催化区直接损害伊马替尼结合NCCN推荐BCR-ABL激酶突变分析的检测规范推荐的检测时间•慢性阶段治疗反应欠佳（没有达到部分细胞遗传学反应或在3-6个月内未达到BCR-ABL≤10%或在12-18月时未达到CCyR；任何治疗失败的迹象（明确的血液学或细胞遗传学复发）BCR-ABL转录本升高1-log或MMR失败；•疾病进展加速或爆发阶段时间最佳=继续治疗警告=更仔细的检测，部分患者可能通过换药而获益失败=更改治疗方案3个月Ph+细胞≤95%，或BCR-ABL10%Ph+细胞36%～65%Ph+细胞95%,或BCR-ABL10%6个月Ph+细胞≤35%，或BCR-ABL10%Ph+细胞65%,或BCR-ABL10%12个月Ph+细胞0，或BCR-ABL≤1%Ph+细胞≥1%,或BCR-ABL1%任何时间稳定或达到主要分子学反应丢失主要分子学反应丢失主要分子学反应；丢失完全细胞遗传学反应；发生突变2012年欧洲肿瘤内科学会（ESMO2012）TKI治疗慢性髓性白血病慢性期疗效标准使用达沙替尼ee:F317L/V/I/C,T315AV299L使用尼洛替尼ff:E255K/V,F317L/V/I/C,F359V/C/I,T315A,Y253H使用Bosutinibgg:T315I使用普纳替尼不同的耐药位点---不同的二代药物X针对Y253H，E255K/V，F359V/C/I突变患者Y针对F317L/V/I/C,T315A,V299L突变患者Z针对E255K/V，F317L/V/I/C,F359V/C/I,T315A,Y253H突变患者q针对T315I突变患者或使用2种或以上TKI治疗无效的患者D2种或以上TKI治疗耐药的患者不同突变对各种药物耐药的敏感性来源于长期伊马替尼疗效研究项目（Long-TermImatinibEffects，ILTE）Haematologica2016Volume101(7):830-838Ultra-deepsequencingleadstoearlierandmoresensitivedetectionofthetyrosinekinaseinhibitorresistancemutationT315Iinchronicmyeloidleukemia二代测序能更早的监测到T315I的突变TheT315Imutationmediatesresistancetoimatinib,dasatinib,nilotinibandbosutinib,whereassensitivitytoponatinibremains.T315Imutationscouldbedetectedearlierbyultra-deepsequencingcomparedtoSangersequencinginaselectedgroupofcases.Earliermutationdetectionbyultra-deepsequencingmightallowtreatmenttobechangedbeforeclonalincreaseofcellswiththeT315Imutation.相关检测产品白血病相关融合基因检测试剂盒（PCR荧光探针法）BCR-ABL分型检测RT-PCR法20T/kitFAMC100007M白血病相关融合基因检测试剂盒（PCR荧光探针法）BCR-ABLRT-PCR法20T/kitFAMC100004M白血病相关融合基因检测试剂盒（PCR荧光探针法）BCR-ABL210RT-PCR法20T/kitFAMC100005M白血病相关融合基因检测试剂盒（PCR荧光探针法）BCR-ABL190RT-PCR法20T/kitFAMC100006M白血病相关融合基因检测试剂盒（PCR荧光探针法）BCR-ABL230RT-