通实俅芯_

1通脉养心丸的实验和临床研究天津中医药大学王怡[e-mail]2研究背景前期工作基础实验研究临床研究汇报内容3研究背景通脉养心丸系已故天津名老中医董晓初教授的经验方；1965年1月研制成功并应用于临床；四十多年来该药以其独特的疗效，成为治疗心血管疾病的经典名药之一；4炙甘草汤(张仲景)炙甘草、桂枝、地黄、阿胶、麦冬等组成生脉饮(李东垣)人参(或党参)、麦冬、五味子等组成通脉止痛补气养阴通脉养心丸功效：缓解心绞痛、纠正心律失常、降低心梗的发生率，辅助心梗后期的机能恢复。研究背景5动物实验抗心肌缺血作用抗血栓形成作用增强常压和减压条件下的耐缺氧能力临床试验气阴两虚型冠心病、心律失常减轻胸痛、胸闷憋气、心悸气短等症状减少心绞痛发作频数减少硝酸甘油的用量前期工作基础6实验研究7对肾上腺素所致大鼠心律失常的影响对乌头碱所致大鼠心律失常的影响对氯化钡所致大鼠心律失常的影响对氯仿所致小鼠心律失常的影响对气阴两虚型大鼠心肌缺血的保护作用整体实验抗大鼠心肌细胞缺氧损伤的作用及机制研究体外实验安全性评价急性毒性实验；长期毒性实验8实验一对氯仿所致小鼠心律失常的影响动物小鼠致心律失常药物氯仿观察指标心脏停搏(CA)的潜伏期室颤发生率(%)9实验分组：（1）模型组，蒸馏水（2）通脉养心丸，1g/kg剂量组（3）通脉养心丸，2g/kg剂量组（4）通脉养心丸，4g/kg剂量组（5）盐酸胺碘酮，50mg/kg剂量组给药方法：灌胃给药一次，连续给药7天10图1各组小鼠氯仿致心脏停搏(CA)(min)的比较通脉养心丸11表1通脉养心丸对氯仿所致小鼠心律失常的影响(n=10)组别剂量(g/kg)室颤发生率(%)CA的潜伏期(min)模型组—506.3±1.6通脉养心丸4.020**8.5±2.7*通脉养心丸2.010**9.4±2.7**通脉养心丸1.010**8.4±4.3盐酸胺碘酮0.0520**8.7±1.9**12小结通脉养心丸可明显降低氯仿所致心律失常中室颤发生率，延长CA潜伏期。表明通脉养心丸具有抗氯仿所致小鼠心律失常的作用。13实验二对氯化钡所致大鼠心律失常的影响动物：大鼠致心律失常药物：氯化钡观察指标：心律失常的持续时间14图2各组大鼠氯化钡致心律失常持续时间（min）比较通脉养心丸15小结通脉养心丸能显著缩短氯化钡所致大鼠心律失常持续时间。表明通脉养心丸具有抗氯化钡所致大鼠心律失常的作用。16实验三对乌头碱所致大鼠心律失常的影响动物：大鼠致心律失常药物：乌头碱观察指标：致大鼠心律失常阈剂量(μg/kg)动物的死亡率(%)17通脉养心丸图3各组大鼠乌头碱致心律失常阈剂量(μg/kg)的比较18通脉养心丸图4各组大鼠乌头碱致心律失常死亡率(%)的比较19小结通脉养心丸4.0、2.0g/kg剂量组能够显著提高乌头碱致心律失常的阈剂量、缩短心律失常持续时间，降低死亡率。20实验四对肾上腺素所致大鼠心律失常的影响动物：大鼠致心律失常药物：肾上腺素观察指标：致大鼠心律失常阈剂量(μg/kg)心律失常持续时间(min)动物的死亡率(%)21通脉养心丸图5各组大鼠肾上腺素致心律失常潜伏期(min)的比较通脉养心丸图6各组大鼠肾上腺素致心律失常持续时间(min)的比较22通脉养心丸图7各组大鼠肾上腺素致心律失常发生率(%)的比较23通脉养心丸药物治疗组能延长肾上腺素所致大鼠心律失常潜伏期，缩短心律失常的持续时间，降低心律失常发生率，表明通脉养心丸具有抗盐酸肾上腺素所致大鼠心律失常的作用。小结24实验五对实验性气阴两虚型大鼠心肌缺血的影响动物：大鼠致病因素：力竭性游泳(每天上、下午强制游泳2小时，连续7天）药物：垂体后叶素观察指标：心电图血清CK、LDHSOD活性和MDA含量25图8各组大鼠注射Pit后不同时间点(0～3h)Ⅱ导联心电图T波变化的比较60801001201401601802000306090120150180注射Pit后各时间点(min)T波峰值变化率(%)正常对照组模型组通脉养心丸4.0g/kg剂量组通脉养心丸2.0g/kg剂量组通脉养心丸1.0g/kg剂量组生脉饮组26图9各组大鼠注射Pit后(0～3h)心率变化率(%)比较607080901001100306090120150180注射Pit后各时间点(min)气阴两虚型心肌缺血心率变化率(%)正常对照组模型组通脉养心丸4.0g/kg剂量组通脉养心丸2.0g/kg剂量组通脉养心丸1.0g/kg剂量组生脉饮组27图10各组血清LDH、CK活性的比较#03006009001200正常对照模型组4.0g/kg2.0g/kg1.0g/kg生脉饮血清LDH(U/L)通脉养心丸#03006009001200正常对照模型组4.0g/kg2.0g/kg1.0g/kg生脉饮血清LDH(U/L)通脉养心丸通脉养心丸通脉养心丸****##030060090012001500正常对照模型组4.0g/kg2.0g/kg1.0g/kg生脉饮血清CK(U/L)通脉养心丸****##030060090012001500正常对照模型组4.0g/kg2.0g/kg1.0g/kg生脉饮血清CK(U/L)28***##100120140160180正常对照模型组4.0g/kg2.0g/kg1.0g/kg生脉饮SOD活力(U/ml)通脉养心丸***##100120140160180正常对照模型组4.0g/kg2.0g/kg1.0g/kg生脉饮SOD活力(U/ml)通脉养心丸图11各组大鼠注射Pit后血清SOD、MDA含量的比较通脉养心丸*##048121620正常对照模型组4.0g/kg2.0g/kg1.0g/kg生脉饮MDA(nmmol/ml)29小结通脉养心丸能够改善实验性气阴两虚型大鼠注射垂体后叶素(Pit)后所引起的心肌缺血心电图的变化，对抗心肌缺血时心率减慢；抑制受损心肌细胞释放CK、LDH；升高SOD、降低MDA含量；通脉养心丸具有抗气阴两虚型大鼠心肌缺血的作用。30实验六抗大鼠心肌细胞缺氧损伤的作用及机理研究模型：建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧损伤模型方法：血清药理学方法目的：观察通脉养心丸抗大鼠心肌细胞缺氧损伤的作用，并探讨其作用机制，为临床用药提供实验依据。31研究内容对细胞活力的影响对氧自由基的影响对心肌细胞内钙离子的影响对炎症反应的影响对心肌细胞凋亡的影响32检测指标MTT比色法测定细胞活力心肌酶：LDH、CK氧自由基方面：SOD、MDA、GSH、NO细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度变化炎性因子：IL-6、IL-1β流式细胞仪双标记法检测细胞凋亡率33分组空白对照组缺氧损伤组通脉养心丸1g/kg2g/kg4g/kg8g/kg34通脉养心丸(g/kg)****0.00.10.20.30.40.50.60.70.8空白对照1248OD值图12通脉养心丸对正常心肌细胞和缺氧损伤的心肌细胞活力的影响*******##0.00.10.20.30.40.50.60.7空白对照组缺氧损伤组1248OD值通脉养心丸(g/kg)35通脉养心丸(g/kg)********##010203040506070空白对照组缺氧损伤组1248LDH(U/L)通脉养心丸(g/kg)********##024681012141618空白对照组缺氧损伤组1248CK(U/L)图13通脉养心丸对缺氧心肌细胞LDH、CK活性的影响36通脉养心丸(g/kg)******##051015202530空白对照组缺氧损伤组1248SOD(U/ml)***##0.00.20.40.60.81.01.21.41.6空白对照组缺氧损伤组1248MDA(nmol/ml)通脉养心丸(g/kg)图14通脉养心丸对缺氧心肌细胞SOD、MDA含量的影响37********##035810131518202325空白对照组缺氧损伤组1248NO（μmol/gprot)通脉养心丸(g/kg)##******5.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.0空白对照组缺氧损伤组1248GSH(kg/l)通脉养心丸(g/kg)图15通脉养心丸对缺氧心肌细胞NO浓度的影响图16通脉养心丸对缺氧心肌细胞GSH浓度的影响38通脉养心丸(g/kg)##**0100200300400空白对照组缺氧损伤组1248IL-6(pg/ml)通脉养心丸(g/kg)*##050100150200250300350400空白对照组缺氧损伤组1248IL-1Β(pg/ml)图17通脉养心丸对缺氧心肌细胞IL-6浓度的影响图18通脉养心丸对缺氧心肌细胞IL-1β浓度的影响39图19通脉养心丸对缺氧心肌细胞凋亡率的影响通脉养心丸(g/kg)****##051015202530空白对照组缺氧损伤组1248凋亡率(%)40图20通脉养心丸对缺氧心肌细胞钙离子荧光强度的影响354555657585950510152025303540455055606570Times（s）fluorescenceintensity空白对照组缺氧损伤组1g/kg2g/kg4g/kg8g/kg41小结通脉养心丸能够提高正常大鼠心肌细胞及缺氧损伤心肌细胞活力降低心肌细胞缺氧损伤后LDH、CK的释放通脉养心丸有显著升高SOD活性，升高GSH浓度，降低MDA、NO浓度的作用降低炎症因子IL-6、IL-1β的表达降低缺氧损伤心肌细胞凋亡率减少缺氧损伤后造成的细胞内钙离子浓度升高42实验七安全性评价急性毒性试验长期毒性试验43急性毒性研究实验目的：观察24小时多次灌胃给药，动物在短期内出现的急性毒性反应，为临床安全用药提供参考信息受试药物：通脉养心丸药粉实验动物：小鼠，雌雄各半，每组20只给药方法：禁食12小时，自由饮水，给药体积0.4g/10g体重；24h内给药2次。对照组给同体积蒸馏水毒性反应情况：一般表现、呼吸、活动、有无惊厥、中毒发生时间、持续时间、恢复情况、死亡动物的大体解剖情况观察时间：14天44急性毒性结果24小时给药剂量累计32g药粉/kg，相当于临床用量（0.133g/kg）的240倍药后连续观察14天，小鼠未见明显毒性反应45长期毒性研究实验目的：观察可能产生的毒副作用及其严重程度，确定药物安全剂量范围，为人临床安全用药提供依据。受试药物：通脉养心丸药粉实验动物：大鼠，雌雄各半，每组30只给药剂量：8、4、2g/kg，相当人(按60kg计)临床剂量60、30、15倍给药时间：90天停药观察：15天46观察指标：一般状况观察：体重、饮食、行为活动等尿液常规指标血液学指标血液生化学指标系统解剖脏器称重病理组织学检查47长期毒性结果实验期间各组动物均未出现死亡对动物的平均体重、进食量、精神状态、行为活动、二便等一般状况无明显影响血液学、尿液学及血液生化学检查在正常范围器官解剖及病理组织学检查未见异常脏器系数无影响48长期毒性结论通脉养心丸8、4、2g(药粉)/kg，相当人(按60kg计)临床剂量60、30、15倍三个剂量连续给药90天，各项观察指标未见到与药物相关的毒性改变，停药15天未见到延迟性毒性反应；大鼠未观察到有害的作用剂量是8g(药粉)/kg，相当于临床用量的60倍；49总结（实验研究）抗心律失常的作用；该药通过抗炎、抗氧化、抗细胞凋亡、减轻心肌细胞钙超载，达到抗缺氧引起的心肌细胞损伤的作用，从而起到保护心肌细胞的作用；毒性研究结果表明临床用药安全；50临床研究51研究背景冠心病中医辨证气虚血瘀气阴两虚痰浊壅塞阴寒凝滞阳气虚衰52情志过极耗伤气阴年四十阴气自半感受外邪耗伤气阴冠心病心绞痛气阴两虚证的病机气虚则无以行血阴虚则脉络不利气阴两虚53试验单位天津中医药大学第二附属医院天津市北辰区中医院天津市中医院天津市第三中心医院2006年9月--2006年12月；多中心临床研究54研究方法冠心病心绞痛（气阴两虚证）