实验一 细胞膜的渗透性及去污剂对红细胞膜稳定性的影响

细胞生物学实验主讲教师：余光辉，李劲，袁琳，刘红实验教师：刘梅芳，冯天辉2008年9月序号实验名称学时数实验性质一细胞膜的渗透性及去污剂对红细胞膜稳定性的影响4定性二植物细胞骨架和胞间连丝的观察4综合三线粒体和液泡系的超活染色与观察4综合四叶绿体的分离与荧光观察4综合五线粒体和细胞核的制备与观察4综合六酸性磷酸酶的显示方法6综合七DNA的孚尔根(Feulgen)反应5设计性八植物凝集素对红细胞的凝集反应5设计性合计36实验一细胞膜的渗透性及去污剂对红细胞膜稳定性的影响一细胞膜的渗透性（一）、实验目的1.了解细胞膜的渗透性2.了解各种小分子物质跨膜进入红细胞的速度1物质运输小分子：大分子：（二）、实验原理2.等渗（isotonicorisosmotic）溶液和溶血在等渗溶液中的红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；在渗透压递减的一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双侧凸起，当体积增加30%时成为球形；体积增加45%～60%则细胞膜损伤而发生溶血，絮状物消失，溶液由悬浊液变为澄清，这时血红蛋白逸出细胞外。将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血，由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。（三）、实验材料、用品1.器材50ml烧杯，试管(1～10cm),试管架，移液管(5mL、0.5mL).2.材料鸡血.3.试剂0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化铵，0.17mol/L醋酸铵，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/L草酸铵，0.12mol/L硫酸钠，0.32mol/L葡萄糖，0.32mol/L甘油，0.32mol/L乙醇，0.32mol/L丙酮，（四）、实验步骤1.鸡血细胞悬液取50ml小烧杯一个，加1份鸡血(加抗凝剂）和10份0.17mol/L氯化钠，形成一种不透明的红色液体，此即为稀释的鸡血.2.低渗溶液取试管一支，加入5ml蒸馏水，再加入0.5ml稀释鸡血，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。3.鸡红细胞的渗透性1）取试管一支，加入0.17mol/L氯化钠5ml，再加入0.5ml稀释鸡血，轻轻摇动，注意观察溶液颜色有无变化，有无溶血现象，为什么？不同低渗溶液中的溶血现象试管编号是否溶血时间结果分析1.5ml蒸馏水+0.5ml稀释鸡血2.5ml氯化钠+0.5ml稀释鸡血3.5ml氯化铵+0.5ml稀释鸡血4.5ml醋酸铵+0.5ml稀释鸡血5.5ml硝酸钠+0.5ml稀释鸡血6.5ml草酸铵+0.5ml稀释鸡血7.5ml硫酸钠+0.5ml稀释鸡血8.5ml葡萄糖+0.5ml稀释鸡血9.5ml甘油+0.5ml稀释鸡血10.5ml乙醇+0.5ml稀释鸡血11.5ml丙酮+0.5ml稀释鸡血注意事项由于溶血时间有快有慢，故要求计时要精确到秒。每一管计时的起点要一致。移液管的正确使用方法。试管振荡时的正确操作。（五）、实验结果将观察到的现象列入下表，对实验结果进行比较和分析。二去污剂对红细胞膜稳定性的影响（一）、实验目的掌握用比色计测量去污剂对细胞膜溶解作用的原理。了解各种去污剂对细胞膜稳定性的影响，学会比较这种影响的方法。（二）、实验原理多种去污剂可以溶解细胞膜上的磷脂化合物，从而使细胞膜破裂，释放出细胞内物质。本实验以红血球为材料，检测几种去污剂破坏红血球细胞膜的作用。通过测定几种去污剂作用后的无细胞溶液在540毫微米（血红蛋白的特异吸收高峰）波长处的光密度值，进行检验。（三）、实验材料、用品1、材料：鸡血2、试剂：（1）中性去污剂：10mL/L(1%)TritonX-100，（2）阴离子去污剂：1g/L(0.1%)十二烷基硫酸钠（SDS）（3）1000mg/LTritonX-100:用生理盐水配制以下不同浓度：180mg/L、170mg/L、160mg/L、150mg/L、140mg/L、130mg/L、120mg/L、100mg/L.3、仪器：722型分光光度计，离心机，移液管（5、1、0.5mL），试管，离心管，恒温水浴。（四）、实验步骤1.红血球等渗溶液的制备（老师完成）取已加抗凝剂的鸡血7.5mL，加生理盐水30.0mL，2500rpm离心10分钟，收集沉下的红血球，用生理盐水洗涤一次（15mL），再离心10分钟（2500rpm），收集沉淀，加30mL生理盐水，悬浮红血球，即为红血球等渗溶液，备用。2.不同去污剂对细胞膜的溶解作用表1不同去污剂对细胞膜的溶解作用比较三种不同去污剂的相对溶解作用。3.不同浓度中性去污剂对细胞膜的溶解作用表2不同浓度中性去污剂对细胞膜的溶解作用管号012345678910去污剂浓度(mg/L)18017016015014013012011010080加去污剂(1000mg/L)体积(mL)(0.1%)0.810.770.720.680.630.590.540.500.450.4加生理盐水体积(mL)3.693.733.783.823.873.913.964.004.054.１0室温红血球等渗液(mL)0.5溶血所需时间以TritonX-100的A值作为100%的溶解作用(对照)，计算其它去污剂的相对溶解作用。表3不同去污剂对细胞膜的溶解作用4.50.24.5分子量TritonX-100647CATB364.446SDS288.38４．５：Ｘ＝６４７：３６４．４４６Ｘ＝２．５３４７８６Ｙ＝２.００５７３４以TritonX-100的A值作为100%的溶解作用(对照)，计算其它去污剂的相对溶解作用。表3不同去污剂对细胞膜的溶解作用4.50.24.5２.５３１.９７２.５３２.１７２.０２.５２.０２.７不同浓度TritonX-100对红细胞膜溶解的影响01020304050607080908090100110120130140150160TritonX-100浓度(mg/L)溶血时间(min)将测得的溶血时间为纵坐标，中性去污剂的浓度为横坐标，作图。思考题:阴离子及中性去污剂对细胞膜稳定性的影响如何？原因是什么？