3.DNA一级结构的表示方法:(1)结构式表示法:(2)线条式表示法:(3)字母式表示法:书与文献中DNA测序的生物学意义DNA是遗传信息的储存者和发布者,遗传信息是由碱基序列体现的,碱基序列略有改变,即可引起遗传信息的显著改变。所以DNA测序是研究DNA功能的基础,非常重要。DNA测序的实验方法(20世纪70年代三大进展促进了DNA的测序工作——限制性核酸内切酶的发现;改进多核苷酸片段的电泳分离法;DNA的克隆技术)酶法和化学法(Sanger和Gilbert法)4.DNA一级结构的研究方法:DNA的化学法测序片段5’-32P-GCATGCAT-3’待测DNA片段,经特异性切割后:GG+ACC+T3’TACGTACG5’G+A切割后:32P-GC32P-GCAT32P-GCATGC32PG切割后:32P32P-GCATC切割后:32P-G32P-GCATGC+T切割后:32P-G32P-GCA32P-GCATG32P-GCATGCA(二)DNA的二级结构1.定义:DNA的二级结构指DNA的双螺旋结构。1953年,J.Watson和F.Crick在前人研究工作的基础上,根据DNA纤维和DNA结晶的X-衍射图谱分析及DNA碱基组成的定量分析以及DNA中碱基的物化数据测定,提出了著名的DNA双螺旋结构模型,并对模型的生物学意义作出了科学的解释和预测。2.DNA双螺旋结构的特点(二)DNA的二级结构(1)DNA分子由两条多聚脱氧核糖核苷酸链(简称DNA单链)组成。两条链沿着同一根轴平行盘绕,形成右手双螺旋结构。螺旋中的两条链方向相反,即其中一条链的方向为5′→3′,而另一条链的方向为3′→5′,螺旋结构上有大沟和小沟。(2)嘌呤碱和嘧啶碱基位于螺旋的内侧,磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧,彼此以3'-5′磷酸二酯键连接,形成DNA分子的骨架。碱基环平面与螺旋轴垂直,糖基环平面与碱基环平面成90°角。2.DNA双螺旋结构的要点(3)螺旋横截面的直径约为2nm,每条链相邻两个碱基平面之间的距离为0.34nm,每10个核苷酸形成一个螺旋,其螺矩(即螺旋旋转一圈)高度为3.4nm。2.DNA双螺旋结构的要点2.DNA双螺旋结构的要点(4)双螺旋内部的碱基按规则配对,碱基的相互结合具有严格的配对规律,即腺嘌呤(A)与胸腺嘧啶(T)结合,鸟嘌呤(G)与胞嘧啶(C)结合,这种配对关系,称为碱基互补。A和T之间形成两个氢键,G与C之间形成三个氢键。双螺旋的两条链是互补关系。3.DNA双螺旋结构提出的生物学意义第一次阐述了遗传信息的储存方式及DNA复制的机理,以准确的语言回答了DNA是如何成为遗传物质的。大大推动了分子生物学和分子遗传学的发展,被誉为20世纪最伟大的发现之一。4.DNA双螺旋的稳定因素DNA双螺旋结构在生理条件下是很稳定的。维持这种稳定性的主要因素包括:两条DNA链之间碱基配对形成的氢键和碱基堆积力;另外,存在于DNA分子中的一些弱键在维持双螺旋结构的稳定性上也起一定的作用。即磷酸基团上的负电荷与介质中的阳离子间形成的离子键及范德华力。改变介质条件和环境温度,将影响双螺旋的稳定性。5.DNA二级结构的几种构象几种DNA螺旋结构的参数类型碱基倾角碱基间距(nm)每圈碱基数螺距(nm)螺旋直径(nm)B-DNAA-DNAZ-DNA0-119-2090.340.230.381011123.32-3.42.46-2.534.562.0-2.372.551.8-1.84C-DNAD-DNAtsDNAA-DNAB-DNA:在相对湿度为92%时的DNA钠盐。接近DNA在细胞中的构象。A-DNA:在相对湿度为75%以下时的DNA纤维。Z-DNA:左手螺旋(A.Rich的工作).ts-DNA:三股螺旋(在分子内或分子间形成,分子内形成时需要低pH下胞嘧啶质子化,故称H-DNA)(三)DNA的三级结构定义:DNA的三级结构指DNA分子(双螺旋)通过扭曲和折叠所形成的特定构象。包括不同二级结构单元间、单链与二级结构单元间的相互作用以及DNA的拓扑特征。超螺旋是DNA三级结构的一种类型。超螺旋即DNA双螺旋的螺旋。松弛形解链环形负超螺旋(一)RNA一级结构的特点RNA一级结构研究最多的是tRNA、rRNA以及一些小分子的RNA。组成RNA的核苷酸也是以3′-5′磷酸二酯键连接。其中1.tRNA一级结构具有以下特点:分子量25000左右,大约由70-90个核苷酸组成,沉降系数为4S左右。分子中含有较多的修饰成分。3′-末端都具有CpCpAOH的结构。5′端多为pG,也有pC。二、RNA的分子结构tRNA概述约占总RNA的10-15%。它在蛋白质生物合成中起翻译氨基酸信息,并将相应的氨基酸转运到核糖核蛋白体的作用。已知每一个氨基酸至少有一个相应的tRNA。tRNA分子的大小很相似,链长一般在73-93个核苷酸之间。2.mRNA约占总RNA的5%。不同细胞的mRNA的链长和分子量差异很大。它的功能是将DNA的遗传信息传递到蛋白质,指导蛋白质的合成。mRNA一级结构的特点真核:单顺反子、5’-末端有“帽子”、3’-末端有polyA片段和非编码区和非编码区原核:多顺反子5’-末端无“帽子”、3’-末端无polyA片段(病毒除外)有非编码区有非编码区顺反子:mRNA上具有翻译功能的核苷酸顺序。polyA片段:指20-250个多聚腺苷酸。“帽子”结构:5’-末端的G被甲基化,通过焦磷酸与另一个发生了核糖上甲基化的核苷酸以5’、5’-磷酸二酯键相连。极大多数真核细胞mRNA在3‘-末端有一段长约200核苷酸的polyA。polyA是在转录后经polyA聚合酶的作用而添加上去的。原核生物的mRNA一般无polyA,但某些病毒mBNA也有3’-polyA,polyA可能有多方面功能,与mRNA从细胞核到细胞质的转移有关;与mRNA的半寿期有关,新合成的RNA其polyA链较长,而衰老的mRNA,polyA链缩短。mRNA5’-末端的“帽子”结构m7G5’ppp5’Np(O型)m7G5’ppp5’NmpNp(I型)m7G5’ppp5’NmpNmpNp(II型)可能功能:抗核酸酶的水解;与蛋白质合成起始有关;作为mRNA与核糖体40S亚基结合的信号。3.rRNA(核糖体RNA)约占全部RNA的80%,是核糖核蛋白体的主要组成部分。rRNA的功能与蛋白质生物合成相关,可分别与mRNA、tRNA作用,催化肽键的形成。rRNA动物细胞核糖体rRNA有四类:5SrRNA,5.8SrRNA,18SrRNA,28SRNA。许多rRNA的一级结构及由一级结构推导出来的二级结构都已阐明,但是对许多rRNA的功能迄今仍不十分清楚。与tRNA不同,rRNA的甲基化多发生在核糖上。真核生物的rRNA中修饰核苷比原核生物多。(二)RNA的高级结构特点RNA是单链分子,因此,在RNA分子中,并不遵守碱基种类的数量比例关系,即分子中的嘌呤碱基总数不一定等于嘧啶碱基的总数。RNA分子中,部分区域也能形成双螺旋结构(类似A-DNA双螺旋结构),不能形成双螺旋的部分,则形成突环。这种结构可以形象地称为“发夹型”结构或茎环结构。在RNA的双螺旋结构中,碱基的配对情况不象DNA中严格。G除了可以和C配对外,也可以和U配对。G-U配对形成的氢键较弱。不同类型的RNA,其二级结构有明显的差异。tRNA中除了常见的碱基外,还存在一些稀有碱基,这类碱基大部分位于突环部分.tRNA的高级结构1、tRNA的二级结构tRNA的二级结构大都呈“三叶草”形状,在结构上具有某些共同之处,一般可将其分为四臂四环:包括氨基酸接受臂、反密码(环)臂、二氢尿嘧啶(环)臂、TC(环)臂和可变环。除了氨基酸接受区外,其余每个区均含有一个突环和一个臂。(1)氨基酸接受区包含有tRNA的3’-末端和5’-末端,3’-末端的最后3个核苷酸残基都是CCA,A为腺苷酸。氨基酸可与其成酯,该区在蛋白质合成中起携带氨基酸的作用。(2)反密码区与氨基酸接受区相对,一般环中含有7个核苷酸残基,臂中含有5对碱基。其中环中正中的3个核苷酸残基称为反密码子。(3)二氢尿嘧啶区该区含有二氢尿嘧啶。环由8-12个核苷酸组成,臂由3-4对碱基组成。(4)TC区该区与二氢尿嘧啶区相对,假尿嘧啶核苷—胸腺嘧啶核糖核苷环(TC)由7个核苷酸组成,通过由5对碱基组成的双螺旋区(TC臂)与tRNA的其余部分相连。除个别例外,几乎所有tBNA在此环中都含有TC。(5)可变区位于反密码区与TC区之间,不同的tRNA该区变化较大,一般有3-18个核苷酸组成。2、tRNA的三级结构在三叶草型二级结构的基础上,突环上未配对的碱基由于整个分子的扭曲而配成对,目前已知的tRNA的三级结构均为倒L形。