液相分析中样品溶剂的选择

1/20液相分析中样品溶剂的选择2/20目录溶剂效应的概念含有离子对试剂实验中的溶剂效应梯度洗脱方法中的溶剂效应抗生素与甲硝唑实验中的溶剂效应3/20什么是溶剂效应？溶剂效应的现象色谱图上较早洗脱的峰前沿或者开叉，与此同时较晚洗脱的峰则较为正常，这些现象可能是有以下原因引起的——样品溶液的溶剂很可能强于流动相。可能发生溶剂效应的情况出峰时间早保留弱进样量大溶剂效应样品溶液的溶剂强度强于流动相溶剂强度时可能会造成的峰展宽、峰分叉现象。4/20离子对方法中的溶剂效应5/20051015205mL10mL20mL30mL40mL50mL75mL100mL[min]硫胺吡哆醇核黄素样品溶剂:CH3CN/H2O=10/90126/2005101520[min]5mL10mL20mL30mL40mL50mL75mL100mL吡哆醇硫胺核黄素样品溶剂:流动相127/20使用10%乙腈作为样品溶剂时，随着进样量的增加，保留较弱的吡哆醇和硫胺出现裂峰使用含有离子对试剂的流动相作为样品溶剂时，则不会发生上述现象。结论8/20CAPCELLPAKC18MG,2.0mmi.d.X150mm,40℃H2O,CH3OH,0-100%梯度分析,200mL/min杀虫剂的标准混合物质(10µg/mL)用甲醇溶解,Injectionvol.10mLLeading梯度洗脱时的溶剂效应9/20结论出峰早的峰受溶剂效应影响发生前沿解决方案:①降低进样量；②使用初始有机相进行样品溶解10/20抗生素甲硝唑分析中的溶剂效应实验背景：我们按照2007版化妆品卫生规范中抗生素与甲硝唑的方法进行分析，在实验中发现溶剂效应。11/20化妆品中抗生素与甲硝唑的分析1、盐酸美满霉素（M.W.493.9）Minocyclinehydrochloride2、甲硝唑（M.W.171.15）Metronidazole3、二水土霉素（M.W.496.46）Oxytetracyclinedihydrate4、盐酸四环素（M.W.480.9）Tetracyclinehydrochloride5、盐酸金霉素（M.W.515.34）Chlortetracyclinehydrochloride6、盐酸多西环素（M.W.480.9）Doxycyclinehydrochloride7、氯霉素（M.W.323.13）Chloramphenicol12/2007版卫生规范实验条件实验方法介绍甲醇+0.1mol/L盐酸=1+1色谱柱：C18250mm*4.6mmI.D.，5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长268nm；流动相：0.01mol/L草酸溶液（磷酸调节水溶液的pH至2.0）+甲醇+乙腈=67+11+22（HPLC分析前，经0.45μm滤膜过滤及真空脱气）；流量：0.8mL/min；柱温：室温。样品溶剂13/20minmAU0.02.55.07.510.012.515.017.50250500PDAMulti1268nm,4nm1234567MG混标结果：按照07版化妆品卫生规范的样品提取溶液（甲醇+0.1mol/L盐酸=1:1）溶解基线抬高，影响定量07版化妆品卫生规范方法14/20MG空白结果由于出现未知的基线抬升，为确定是何原因引起的，分别对空白溶剂和各个单标进行分析minmAU01234502505007501000PDAMulti1268nm,4nmMG单标1结果minmAU012345670100200300PDAMulti1268nm,4nmMG单标2结果minmAU0.02.55.07.510.002505007501000PDAMulti1268nm,4nm各单标及空白均无杂峰15/20数据文件名:MG-hunhe-0.1mgml-1225-1.lcd0.02.55.07.510.012.515.017.5min-100010020030040050060070080090010001100mAUMG-danbiao2l-1225-3.lcdPDACh1-268nm,4nmMG-danbiao1-1225-4.lcdPDACh1-268nm,4nm268nm,4nm通过混标与单标对比，发现每个单标均无杂峰；单标1、2在混合进样后峰高降低了（实际样品量同为1ug）；因此确定1、2号峰中间的物质为1、2号标准品在卫生规范溶剂中相互作用的结果。数据文件名:MG-hunhe-0.1mgml-1225-1.lcd2.02.53.03.54.04.55.05.5min0100200300400500600700800900mAUMG-danbiao4-1225-6.lcdPDACh1-268nm,4nmMG-danbiao3-1225-5.lcdPDACh1-268nm,4nmMG-danbiao2l-1225-3.lcdPDACh1-268nm,4nmMG-danbiao1-1225-4.lcdPDACh1-268nm,4nm268nm,4nm123416/20minmAU012345670100200300400PDAMulti1268nm,4nm样品溶解方法：取单标1、2各100μL混合用卫生规范溶剂定溶至1mL结果不同溶剂下单标1、2混合物的出峰行为minmAU012345678905001000PDAMulti1268nm,4nm样品溶解方法：取单标1、2各250μL混合用流动相定溶至1mL结果minmAU0.02.55.07.510.00250500750PDAMulti1268nm,4nm样品溶解方法：取单标1、2各100μL混合用流动相定溶至1mL结果随着样品溶剂中流动相比例增大会逐渐消除单标1和2之间的相互作用17/20MG流动相溶解标准品结果用流动相溶解标准物质1和2之间基线未抬升HPLCConditions：色谱柱：CAPCELLPAKC18MG250mm*4.6mmI.D.，5μm；检测器：二极管阵列检测器，检测波长268nm；流动相：0.01mol/L草酸溶液（磷酸调节水溶液的pH至2.0）+甲醇、乙腈=74+26（HPLC分析前，经0.45μm滤膜过滤及真空脱气）；流量：0.8mL/min；柱温：30℃。minmAU0.02.55.07.510.012.515.017.50250500750PDAMulti1268nm,4nm123456718/20结论综上所述，样品1-盐酸美满霉素与样品2-甲硝唑在07版卫生规范中的提取溶液内会发生某种相互作用，导致混合样品中相应峰高降低，基线抬升；若在提取后用流动相进行10倍稀释，或直接用流动相对标准品进行溶解则可解决该问题。19/20结论尽可能选用流动相作为样品溶剂20/20