高效液相色谱串联质谱法学习交流

高效液相色谱-串联质谱法学习交流学习提纲第一部分：仪器实验室（3.18-5.15）★★★第二部分：微生物实验室（5.18-5.29）第三部分：理化实验室（6.1-6.12）第四部分：仪器操作★★★第五部分：资料收集★★第六部分：学习总结、心得体会第一部分：仪器实验室（3.18-5.15）在仪器实验室的两个月时间里主要学习了高效液相色谱-串联质谱法和高效液相色谱法，简单的学习了原子吸收和原子荧光法的基本原理和检测内容。在学习液-质联用仪的过程中主要学习了样品前处理、标准样液的配制（扩项）、流动相的配制和仪器原理-仪器操作的学习。总计5大类，12个检测项目，13个常用标准1.豆芽中的赤霉素，六-苄基腺嘌呤（液相）；2.豆芽中的四氯苯氧乙酸钠（液相）；3.动物源性食品中的激素、瘦肉精（沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸克伦特罗）-（液质）；4.乳制品的维生素B6（液相）、维生素D（液相）、三聚氰胺（液质）5.蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，粮谷中农药和保健食品中脱氢表雄甾(zai)酮(DHEA)其中最多的是：1.豆芽中的赤霉素，六-苄基腺嘌呤；2.肉食品中的瘦肉精；3.乳品中的三聚氰胺2、主要检验的方法为高效液相色谱法和液相串联质谱法1、实验检测项目有1、出口水果中赤霉素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法----------SN/T0350-20122、无公害豆芽第3部分：6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定--------DB33/T625.3-20073、动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法（瘦肉精）--------GB/T22286-20084、原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法-------GB/T22388-2008（婴幼儿乳粉）5、婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定--------GB5413.13-20106、保健食品中脱氢表雄甾(zai)酮(DHEA)测定-------GB/T5009.193-20037、蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法液相色谱示差折光检测法------GB/T18932.22-20038、牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定液相色谱-串联质谱法（质控-3个混标）------GB/T22992-20089、婴幼儿配方粉及婴幼儿补充谷粉通用技术条件（含第1号、第2号和第3号修改单，已作废）GB10767-1997（维生素D测定D2、D3）10、动物源性食品中11种激素残留检测液相色谱-串联质谱法----------农业部1031号公告-1-200811、粮谷中486种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法（凝胶色谱渗透仪净化）---GB/T20770-200812、动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法---------GB/T21312-200713、食品安全地方标准火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定液相色谱-串联质谱法（地方标准）DB31/2010-2012仪器实验室具体实验内容有：★★★在本次仪器实验室学习的过程中，参与了质检院的何冲老师的一个CNAS认证，加有三个混标盲样（牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚残留量的测定GB/T22992-2008）的质控实验。实验过程中从实验原理、样品量取、样品前处理、净化的每一个过程中都做到认真、细心的学习和参与，保证实验中氮吹、固相萃取柱的活化、淋洗、洗脱以及流动相的配制等每个环节都顺利进行，圆满的完成了质控、比对实验，提高了我对标准的认识，注重实验过程中细节操作的重要性。第四部分：仪器操作此次培训学习中我主要学习操作的仪器是液相色谱-串联质谱，下面对其进行简单的介绍质谱仪器质谱组成部分进样系统离子源数据及供电系统质量分析器检测接收器真空系统三重四极杆基本功能●Q1可以筛选母离子Mz1●Q2通过碰撞碎裂打碎离子，形成碎片离子峰●Q3筛选子离子，定量子离子碎片强度Mz2液相色谱串联质谱原理简介1、四级杆分析器由四根棒状电极组成。相对两根电极间加有电压（Vdc+Vrf）,另外两根电极间加有-（Vdc+Vrf）,其中Vdc为直流电压，Vrf为射频电压。四个棒状电极形成一个四级电场，下图为分析器示意图。（Vdc+Vrf）-（Vdc+Vrf）2、离子从离子源经过离子光学系统聚焦后进入四极电场，在四极电场的作用下做简谐振荡，如果质量为m，电荷为e的离子从z方向进入四极场。1.子离子扫描2.母离子扫描3.中性丢失扫描4.多重反应监测串联质谱QQQ几种操作方式：Q1选择某一特定质量的母离子，Q2碰撞池碰撞产生碎片离子。Q3只分析一个碎片离子。此过程产生一个简单的单个离子碎片谱图1.子离子扫描Q1Q2碰撞池Q3Q1只允许目标离子210通过Q3只检测来自母离子210的碎片158，进行定性定量分析在QQQ中进行中性丢失扫描，Q1和Q3分析器的结合使灵敏度和选择性得到最大化。Q1/Q3中性丢失扫描可监测母离子特定的中性丢失，例如缩氨酸磷酸盐中一个磷酸根的丢失。在这个例子中，Q1和Q3的扫描得到母离子的谱图，这张谱图是母离子为了磷酸化，丢失了碎片98而得到的2.中性丢失扫描Q1Q3碰撞池扫描中性丢失扫描Q1选择某一质量的母离子，碰撞单元产生碎片离子。Q3用于搜寻多个选择反应监测，这就是多重反应监测（MRM）。3.多重反应检测Q1碰撞池Q3子离子扫描选择m/z只允许目标里子210和350通过Q3仅监测来自离子210的特征碎片191和来自离子350的特征碎片226，进行定性定量分析Q1和Q3均为选择性离子监测模式1、液质联用（LC-MS）主要可解决如下几方面的问题：不挥发性化合物分析测定；极性化合物的分析测定；热不稳定化合物的分析测定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析测定。2、质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。质谱应用1、样品必须离子化，只有离子是带电的，带电的才有可能分析，离子化的化合物才能被移动，控制和质量分析。2、必须具有一定的真空（真空系统）和分子涡旋泵，离子飞行的平均自由程需要最大化，理论上，真空度越高越好。3、必须测量离子的质量数、质荷比（m/z）质谱的特点常见术语1、质荷比：离子质量（以相对原子量单位计）与它所带电荷（以电子电量为单位计）的比值，写作m/z.2、峰：质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰。3、离子丰度：检测器检测到的离子信号强度。4、分子离子：自由基离子M+很活泼，易碎裂而产生广义的碎片离子。5、准分子离子：由软电离技术产生的质子或其它阳离子加合离子以及质子化或其它阴离子加合离子。6、碎片离子：电离后具有过剩内能的分子离子能以多种方式裂解生成碎片离子。学习过程中主要操作和使用的仪器设备有高效液相色谱串联质谱仪；液相色谱法；凝胶色谱渗透净化仪；氮吹仪；旋转蒸发仪；固相萃取装置，详细介绍如下：1、WatersACQUITYUPLC沃特世超高效液相色谱串联质谱仪液相质谱紫外TUVDetector自动进样器SampleManager抽真空泵BinarySolventMangerC18色谱柱连接2、Agilent6420液相色谱串联质谱仪液相质谱脱气真空泵自动进样器色谱柱C18色谱柱连接