高效液相色谱及其应用

高效液相色谱简介高效液相色谱特点高效液相色谱分类高效液相色谱应用高效液相色谱发展高效液相色谱简介20世纪初：俄国植物学家茨维特提出经典液相色谱法。经典液相色谱法包括柱色谱、薄层色谱、纸色谱。20世纪60年代末：随着色谱理论的发展、高效细微固定相的开发、高压恒流泵及高灵敏度检测器的应用，高效液相色谱法得到了突破性的发展。高效液相色谱的特点高压：流动相流经色谱柱时，受阻力较大，为了迅速通过色谱柱，必须对流动相加高压。高效：分离效能高，柱效达2×103-5×104块/m。高灵敏度：最低可检测10-9g（ppb），痕量分析时可达10-12g(ppt)。应用范围广：约80%的有机物，特别是高沸点、大分子、热稳定性差的有机化合物。分析速度快：通常分析一个样品在15-30分钟，甚至有的样品在5分钟内即可完成，一般小于1小时。（三高一广一快）高效液相色谱法局限性成本高易污染环境缺少通用型检测器不能代替气相色谱，无法完成柱效高达10万块理论塔板数的分析不能代替中低压柱色谱法高效液相色谱分类吸附色谱法分配色谱法离子交换色谱法体积排阻色谱法按分离原理分类：正相色谱反相色谱高效液相分析方法的建立收集样品信息，明确分析目的和要求选择样品制备方法确定分析模式，选择相应色谱柱确定检测方法和条件优化分离条件方法验证定量分析样品前处理技术高速离心过滤、超滤选择性沉淀萃取索氏抽提衍生化反应样品浓缩—旋蒸等新技术—加速溶剂萃取（ASE）高效液相色谱的应用食品工业中的应用在制药工业中的应用在环境监测中的应用在生物工程和生物化学中的应用在精细化工分析中的应用营养成份分析氨基酸、碳水化合物、维生素等食品添加剂防腐剂、香料、保鲜剂等有害成分兽药残留、农药残留等无机成份各种无机盐食品工业中的应用在制药工业中的应用药物鉴别如：青霉素中有效成份可用反相色谱法分离杂质检测（原料、中间体、副产物等）含量测定手性分离药物代谢动力学研究、临床血药浓度等检测中应用非常广泛在环境监测中的应用多环芳烃的检测（有机燃料未完全燃烧产生）多氯联苯（PCB）的检测农药残留的检测（有机磷、氯、除草剂等）酚类和胺类的检测（化工、燃料、制药等产生的工业废水）在生物工程和生物化学中的应用氨基酸、多肽和蛋白质的分析研究核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究生物胺的分析研究变性高效液相色谱检测法（DHPLC）是近年来发展起来的一项相对较新的技术，主要应用于基因突变分析中，能够满足大规模的基因变异检测筛查。在精细化工分析中的应用醇、醛和酮、醚的分离分析酸和酯的分离分析表面活性剂的分析聚合物的分析研究高效液相色谱的发展超高效液相色谱（UPLC）联用技术（LC-MS，LC-MS-MS)超高效液相色谱（UPLC）waters从上世纪60年代首推第一台液相色谱，到70年代液相色谱商业化，至2004年UPLC系统推出，一直是行业领导者。UPLC的特点超强分离能力（1.7um颗粒）超高速度（压力可达105MPa）超高灵敏度简便方便的方法转换快速自动进样（采用针内针）最佳的质谱接入口UPLC的特点及应用UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍UPLC主要应用于代谢组织学分析、环境监测及其他一些生化领域，包括天然产物的分析。特别是中药研究领域的发展是一个极大的促进。UPLC是HPLC的未来高效液相-质谱联用（LC-MS）色谱的优势在于分离，质谱能够提供物质的分子量及结构信息。液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来。LC-MS特点分析范围广分离能力强。通过MS的特征离子质量色谱图能分别给出各组分的色谱图来进行定性定量；定性分析结果可靠。可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息；MS具备高灵敏度。检测能力提高一个数量级以上；分析时间快。LC-MS使用的液相色谱柱为窄径柱，缩短了分析时间，提高了分离效果；自动化程度高，LC-MS具有高度的自动化。液质联用应用领域生化方面的分析研究天然产物分析研究药物和保健食品的分析研究环境检测的分析研究化工行业分析研究谢谢