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专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养基础知识（一）培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称培养基1.培养基的种类液体培养基（一般用锥形瓶盛装）。固体培养基（一般用试管或培养皿盛装），在液体培养基的基础上再添加琼脂。最早进行微生物培养的科学家是：巴斯德液体培养基固体培养基：菌落培养基的基本成分一般都含有碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）、无机盐和水等。其他条件pH、特殊营养物质（如维生素等）、氧气的需求等。（二）无菌技术无菌操作泛指在获得纯净培养物的关键是无菌技术就是对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行__________将培养皿、接种用具进行_________接种的过程要在_________附近进行。实验后对培养基等也要_______处理防止外来杂菌的入侵防止杂菌污染的操作技术。培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。包括清洁消毒灭菌酒精灯灭菌消毒无菌技术的种类灭菌使用较为温和的方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的微生物。使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。常用的消毒方法煮沸消毒法巴氏消毒法酒精擦拭双手氯气消毒水源紫外线或化学药品（石碳酸或煤酚皂溶液）消毒不包括芽孢和孢子不耐高温的70-75度30分钟或80度15分钟先用消毒液，再用紫外线，消毒液即可加强紫外线的消毒效果1.灼烧灭菌：常用的灭菌方法2.干热灭菌：3.高压蒸汽灭菌：接种用具和接种过程中的_______或______放在酒精灯火焰的___________中进行灼烧灭菌。将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在___________中加热________即可。将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内______，待______排尽后，密闭继续加热至锅内压力到______，温度到______后，维持15～30min即可。试管口瓶口充分燃烧层160～170OC1～2h煮沸冷空气100kPa121OC实验操作（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方物质牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL2.称量按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易______，称取时动作要_______，称后________________。吸潮迅速及时盖上瓶盖先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，最后加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至1000mL。将配制好的培养基放到锥形瓶中，瓶口加棉塞，包上牛皮纸，连同培养皿（5～8套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。待培养基冷却到__________左右时，在___________________倒平板50OC酒精灯火焰附近3.溶化4.灭菌5.倒平板讨论1.培养基灭菌后要冷却到50OC时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手时即可开始倒平板。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过__________，防止瓶口的_______污染培养基。灼烧灭菌微生物3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结______，凝固后的培养基表面的_____也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分__________，又可以防止皿盖上的水珠____________，造成污染。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？_______________可能在_______________的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。空气中的微生物皿盖与皿底之间水珠湿度更好地挥发落入培养基（二）纯化大肠杆菌微生物接种方法常见的有_____________________1.平板划线法通过_______在琼脂固体培养基表面___________的操作，将____________逐步稀释分散到培养基的表面在数次划线后可以分离到由__________繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称_______。平板划线法稀释涂布平板法聚集的菌种接种环连续划线菌落一个细胞1.为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？操作的第一步灼烧接种环是为了____每次划线前灼烧接种环是为了杀死____划线结束后仍然要灼烧接种环，能____讨论避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；上次划线结束后，接种环上残留的菌种。及时杀死接种环上残留的菌种，避免____________和___________细菌污染环境感染操作者2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比____________要少，每次从上一次划线的末端开始，能使___________随着________________而逐步________，最终能得到由_____________繁殖而来的________。以免接种环温度太高，杀死菌种。线条起始处细菌的数目划线次数的增加减少单个细菌菌落2.稀释涂布平板法将菌液进行一系列的__________，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到______________的表面进行培养。在______________的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成_________，从而能在培养基表面形成单个的_______。稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即______________和________________梯度稀释琼脂固体培养基稀释度足够高单个细胞菌落系列稀释操作涂布平板操作。系列稀释操作101102103104105106(1)将分别盛有_______的试管灭菌并编号。(2)用移液管吸取____培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，__________使之充分混匀。(3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。9mL水1mL吹吸三次涂布平板操作(1)将________浸在盛有70％的酒精的烧杯中。(2)取少量菌液（不超0.1mL），滴加到培养基表面。(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却_______。(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。8～10s涂布器讨论涂布平板的所有操作都应在_________进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。将_______和_________（作为对照组）的培养基均放到370C的恒温箱中，培养12～24h后进行观察并记录结果。火焰附近如何对照？接种后未接种结果分析与评价1.未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。2.在接种大肠杆菌的培养基上，能否观察到独立的菌落？它们的大小、形状、颜色相似？如果接种成功的话，在培养基的表面可观察到大小、形状、颜色相似的菌落。3.培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大4.如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。1可能是培养基灭菌不彻底；2可能是接种时发生了污染；3也可能是在培养的过程中受到了污染。无菌操作未达到要求：课题延伸—菌种的保存1.试管低温临时保存将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，培养成菌落后，置于4OC的冰箱中保存（每隔3～6个月要重新接种培养后再保存）。2.甘油管长期保存在3mL的甘油瓶中加入1mL的甘油，高压灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，充分混合后，置于－20OC的冷冻箱中保存。标准：低温干燥低氧降低新陈代谢速度课堂巩固1.（2007.宁夏高考）某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。（1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了和。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是和。（2）对培养基进行灭菌，应该采取的方法是。碳源氮源无机盐水高压蒸汽灭菌（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得的结果可靠，还应该同时在另一平板上接种作为对照进行实验。（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越。恒温箱无菌水多大2.（2009.宁夏高考）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑、和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、、等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行（填“消毒”或“灭菌”）；操作者的双手需要进行清洗和（填“消毒”或“灭菌”）；静止空气中细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能。温度酸碱度易培养生活周期短灭菌消毒损伤DNA的结构（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的。（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是、。。（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。比例合适鉴定将未接种的空白培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。灭菌