薄层色谱方法总结

薄层色谱方法总结1.方法原理A.流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。B.样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极-（诱导）-偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。2.溶剂使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇-冰乙酸-水=4：1：1，V/V/V），或者绝对量（如18ml甲苯+2ml甲醇）。其总量应足以使TLC/HPTLC板的浸入深度约为5mm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用，如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。一、溶剂选择规则考虑分离成分的极性、溶解度、吸附度根据相似相溶原则，注意，极性相差大的不混溶混合溶剂通常使用一个高极性和低极性溶剂组成的混合溶剂先加入极性较小的溶剂，若不溶再加入少量极性大的溶剂一般把两种溶剂混合时，采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂，如果有分开的迹象，再调整比例（或者加入第三种溶剂），达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。展开剂的比例要靠尝试二、展开剂的选择条件1.对所需成分有良好的溶解性2.可使成分间分开3.待测组分的Rf在0.2-0.8之间，定量测定在0.3-0.5之间4.不与待测组分或吸附剂发生化学反应5.沸点适中，黏度较小6.展开后组分斑点圆且集中7.混合溶剂最好用新鲜配制三、溶剂极性参数表环已烷:-0.2、石油醚（Ⅰ类，30~60℃）、石油醚（Ⅱ类，60~90℃）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.21.一般说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇、乙酸乙酯来调节系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮和萜类等的分离。2.中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇、乙酸乙酯等来调节，适合蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离。3.强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇、乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。四、展开剂的选择物质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。1.类极性较小的挥发性物质冰片：石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯(17:3)厚朴酚：苯－醋酸乙酯(9:1.5)丹皮酚：环己烷－醋酸乙酯(3:1)α-香附酮：苯－醋酯乙酯－冰醋酸(92:5:5)结论：以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂，通常起溶解和分离化合物的作用，而用醋酸乙酯为调节Rf（比移值）的溶剂。为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响，适当加入添加剂，如有机酸或者有机碱。2.类极性较小的不挥发性物质β-谷甾醇：环己烷－醋酸乙酯－甲醇(6:2.5:1)或者环己烷－丙酮(5:2)、熊果酸：甲苯－醋酸乙酯－冰醋酸(12:4:0.5)、齐墩果酸：氯仿－甲醇(40:1)、猪去氧胆酸：氯仿－乙醚－冰醋酸(2:2:1)、大黄素：苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇(8:1)、丹参酮ⅡA：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4)、穿心莲内酯：氯仿-无水乙醇(9:1)靛玉红、靛蓝氯仿－乙醇(9:1)或者苯－氯仿－丙酮(5:4:1)结论：这类物质展开剂极性比极性较小的挥发性物质洗脱力强一些，因为这类物质极性小的母核大，而极性大的基团通常可以形成氢键，比如羧酸、羟基。以上物质，母核分子量减小、母核结构中不饱和健的增加（尤其是出现苯环），极性基团的增加，都使极性增加，展开剂极性也增大。。这个范围内的物质很多，一般展开剂大百分数的溶剂可以从环己烷—〉甲苯—〉二甲苯—〉苯—〉氯仿的顺序，按照极性要求选择。这里注意，异丙醇、正丁醇极性指数也比较小，在这范围的化合物很少用，因为粘性大、展开慢，造成斑点扩散；另外，羟基的氢键作用力也有不利。调节Rf值的溶剂，从醋酸乙酯—〉甲醇—〉丙酮—〉乙醇。挥发性物质也有很多带羰基、羟基的，但从它的挥发性就可以明白，分子间作用力不强，另外，母核与石油醚、正构烷和苯的结构差异小，估计更容易脱离硅胶吸附，更快进入溶剂中，而不需要通过提高展开剂的极性。3.类极性大的小分子有机酸结论：这类物质多数是苯乙烯母核的，这个结构的极性本身比较大，另外有酚羟基和羧酸基团，个别有多羟基配基。皂苷的展开剂差不多，极性大。注意甲酸通常指的是浓度85%左右的，含有水。没食子酸：氯仿－醋酸乙酯－甲酸(5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸、异绿原酸。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。相应展开剂分别为：正己烷—乙醚—冰醋酸(5:5:0.1)、苯－冰醋酸－甲醇(30:1:3)、氯仿－甲醇－甲酸（9:1:0.5）、石油醚－乙酸乙酯－甲酸（3:6:1）、醋酸丁酯－甲酸－水(7:2.5:2.5)。4.类含氮有机物结论分析：由于NH2硅醇基的作用很强，在强极性展开剂加有机酸、有机碱扫尾。对于极性化合物，使用正丁醇对斑点扩散影响较小，因为化合物和硅胶的作用强。盐酸小檗碱：苯－醋酸乙酯－甲醇－异丙醇－浓氨试液(12：6：3：3：0.6)(氨蒸气饱和)或正丁醇－冰醋酸-水(7:1:2)、麻黄碱：氯仿－甲醇－浓氨试液(20:5:0.5)或正丁醇－冰醋酸－水(8:2:1)甘草酸铵：醋酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15:1:1:2)。五、TLC的通用显色方法1、紫外照射法：方便、不破坏样品；2、碘蒸气法：通用性强，与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用；3、荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显；4、硫酸溶剂：对绝大多数有机物有效，但有破坏性。六、薄层层析和纸色谱操作注意事项1、点样点样器点样于薄层板上,一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。点样时必须注意勿损伤薄层表面2、展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离（一般为8～15cm），取出薄层板，晾干，待检测。注：展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，密闭，一般保持15－30分钟。3、显色与检视供试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或加热显色，在日光下检视。有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在356nm紫外光灯下观察荧光色谱。对于可见光下无色，但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板（如GF254板），在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱。理想的显色希望灵敏度高，斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好，斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比，在样品组成并不完全已知的情况下，通用显色方法显得尤为重要，通常显色方法主要有：1.紫外照射法：方法、不破坏样品2.碘蒸气法：通用性强，与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用3.荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显四种体系展开剂PE(60-90)EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O2:1:1:1EtAc/PE=1:2EtAc/PE/AcOH15:5:1展开剂展开剂选择的大概原则选择展开剂一般要用混合溶剂：一般要有一种对所要展开样品溶解度较大的溶剂，视样品的极性，再选用相应的体系。极性小的用乙酸乙酯：石油醚极性较大的用甲醇：氯仿系统极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸TLC中样品拖尾现象是什么原因？该如何解决？关于TLC二次展开，是在第一次展开显色后再继续第二次展开，还是在第一次展开后，换另一种展开剂接着展开？有些问题：薄层板为什么会裂口和有凹槽？ThankYou!