实验四_血凝和血凝抑制试验

实验四血凝和血凝抑制试验一、实验目的掌握血凝和血凝抑制试验的原理和操作方法，能够正确判定试验结果并对结果进行分析。二、血凝试验（Hemagglutination,HA）血凝现象：有些病毒可凝集某些动物（如鸡、鹅、豚鼠、绵羊）和人的红细胞(RBC)原理：血凝素与RBC表面相应受体结合，引起RBC凝集，用以测定病毒的含量HA试验的原理示意图用途：①确定病毒的含量；②计算病毒的血凝价，为血凝抑制试验做准备血凝价：能使血球产生50%凝集的病毒最高稀释度血凝单位试验材料•鸡新城疫病毒•鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，用生理盐水洗涤3-5次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配成1%红细胞悬液备用•灭菌0.85%生理盐水•96孔U型微量反应板、微量移液器、灭菌塑料吸头操作步骤1.在血凝板第一排的1-12孔加入50μl生理盐水。2.在第1孔中加入50μl病毒，混匀后吸50μl到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃50μl；最后两孔（11、12）为红细胞对照。3.将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1-12孔中每孔加入50μl。4.手工震荡，37℃静置30min(室温40分钟)后观察结果孔号1234567891011（C）12（C）生理盐水（μl）505050505050505050505050病毒悬液（μl）50505050505050505050//1%红细胞（μl）505050505050505050505050弃50μl结果判定血凝价A:26B:25C:22D:27ABCD以50%的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度作为该病毒液的红细胞凝聚效价，即一个血凝单位。血凝价:1:256三、血凝抑制试验（HemagglutinationInhibition,HI）原理：抗体与血凝素结合，封闭血凝素，使之不能与红细胞结合HI试验的原理图用途:①用于检测血清中抗体含量；②鉴定病毒的型、亚型；血凝抑制价：能完全抑制血球凝集的最高血清稀释度即为该血清的血凝抑制价试验材料•4个血凝单位鸡新城疫病毒•鸡红细胞：同上•被检血清(采自被检鸡的血清)•灭菌0.85%生理盐水•96孔U型微量反应板、微量移液器、灭菌塑料吸头1.在血凝板的1-12孔加入25μl生理盐水，最后2孔加50μl。2.第1孔加入待检血清25μl，混匀后吸25μl至第2孔，倍比稀释直至第10孔，混匀后弃25μl。3.在1-10孔，每孔加稀释好的25μl4个血凝单位的病毒悬液，室温静置30分钟4.将红细胞轻轻摇动混匀，在1-12孔中每孔加入50μl5.手工震荡1min，在37℃静置30min(室温40分钟)后观察结果操作步骤判定结果：能将病毒凝集红细胞的作用完全抑制的血清的最高稀释倍数为该血清的红细胞凝集抑制效价，以2的指数表示。（上图抗体结果从上至下依次为：8/7/8/9/8/7/7/6）123456789101112HA试验HI试验