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0静脉免疫球蛋白对早产儿脐血T淋巴细胞功能的影响青岛大学医学院附属医院儿科张秋业常红盛红玲庄超1引言—研究目的•静脉免疫球蛋白(IVIG)被广泛应用于感染性和免疫相关性疾病的治疗。IVIG在新生儿尤其早产儿感染预防与重症感染治疗中疗效确切，但其安全性也日益受到关注。•近年研究发现足月新生儿应用大剂量IVIG后，T、B淋巴细胞增殖反应下降。而有关早产儿应用IVIG对其免疫功能影响的研究资料较少。•本研究目的：采用体外实验，选择不同剂量IVIG作用于早产儿脐血单个核细胞，观察其对Th细胞和调节性T细胞功能的影响，从免疫学角度探讨IVIG早产儿用药安全性。2材料与方法—研究对象选择2011年6月～2011年12月在青岛大学医学院附属医院母孕32～34周娩出的早产儿15例为研究对象，出生体重1300g～2450g，平均(1923±349)g。其母亲分娩前4周内无明显感染史，未使用免疫增强或抑制剂等药物。所有受试的早产儿母亲均知情同意。3材料与方法—研究方法标本采集CBMC制备CBMC培养(设置A组、B组、C组）CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞IFN-r、IL-4、IL-10、TGF-β14材料与方法—分组•IVIG的浓度选择37℃、饱和湿度、5%CO2条件培养72hA组（近生理状态组）B组（低剂量组）C组（高剂量组）6mg/ml9mg/ml12mg/ml5材料与方法—统计学处理采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。实验数据呈正态分布且方差齐，以x±s表示。采用单因素方差分析，LSD检验，P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01为差异有显著统计学意义。6结果组别例数IFN-γIL-4A组15175.68±86.8229.04±8.27▲B组15124.51±56.0618.01±5.72C组1532.59±26.82＊14.44±5.18注：＊与B组和A组比较,P0.01；▲与B组和C组比较，P0.01表1不同浓度IVIG对早产儿脐血CBMC分泌IFN-γ及IL-4水平的影响1、不同浓度IVIG对早产儿脐血CBMC分泌IFN-γ及IL-4水平的影响7结果组别例数IFN-γ/IL-4A组155.61±2.38B组158.22±4.21☆C组152.41±1.72△表2不同浓度IVIG对CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值变化的影响注：△与B组和A组比较，P0.01；☆与A组比较，P0.05.2、不同浓度IVIG对CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值变化的影响8结果020406080100120140160180200IFN-γIL-4A组B组C组图1不同浓度IVIG对CBMC分泌细胞因子影响0123456789A组B组C组A组B组C组图2不同浓度IVIG对CBMC上清液IFN-γ/IL-4比值变化影响9结果3、IVIG对早产儿CBMC体外培养后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达的影响:实验显示：早产儿CBMC在不同浓度IVIG干预下，各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的表达率比较均无显著性差异(P均0.05)。10结果4、IVIG对早产儿CBMC体外产生IL-10和TGF-β1水平的影响：C组CBMC分泌IL-10水平明显低于B组(P0.05)，显著低于A组(P0.01)；B组CBMC分泌IL-10水平也明显低于A组(P0.05)。C组CBMC分泌TGF-β1水平显著低于A组(P0.01)，但与B组比较无显著性差异(P0.05)；B组CBMC分泌TGF-β1水平明显低于A组(P0.05)。11图3IVIG对早产儿CBMC体外培养后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达的影响00.511.522.5A组B组C组结果05101520253035IL-10TGF-β1A组B组C组图4IVIG对早产儿CBMC体外培养后IL-10和TGF-β1水平影响12讨论•IVIG除免疫替代外可通过多种机制发挥免疫调节作用、用于治疗多种免疫相关性疾病◇中和清除致病抗原，特别是超抗原◇改变免疫复合物的特性，减少免疫复合物的沉积◇免疫封闭巨噬细胞和B淋巴细胞，抑制巨噬细胞的吞噬功能和B淋巴细胞的活化◇恢复独特型-抗独特型网络，抑制自身抗体的产生◇抑制T淋巴细胞活化，减少各种细胞因子的产生等13•新生儿（包括早产儿）Thl/Th2功能状态特点◇足月儿T淋巴细胞功能呈生理性低下状态，且其Th细胞亚群功能发育不平衡，Th2类细胞功能相对占优势◇早产儿IFN-γ、IL-4的水平明显低于足月儿，以IFN-γ更为突出，即仍然Th2亚群功能相对占优势14•IVIG对新生儿T细胞功能的影响：◇体外实验显示：IVIG10mg/ml可以明显抑制PHA-P诱导的足月新生儿CBMC分泌IFN-γ，也可以抑制CBMC中IL-4mRNA的表达；同时抑制PHA诱导的足月新生儿CBMC分泌IL-10与TGF-β1。◇IVIG能抑制脂多糖诱导的新生儿单核巨噬细胞的活化，从而抑制其分泌IL-6，而IL-6能促进T细胞的活化及向Thl、Th2分化，间接证明了IVIG对T细胞尤其是Thl、Th2细胞因子的抑制作用15◇IVIG对新生儿肺炎似无明显疗效，大剂量使用IVIG可能因其至少短期内具有抑制T、B淋巴细胞功能作用而加重新生儿期暂时免疫缺陷。◇对极低出生体重儿过大剂量或短期内反复使用IVIG预防感染无明显疗效，而且可能加重暂时免疫低应答反应，影响细胞免疫的自然发育过程。16•本实验研究结果：◇与近似生理状态组比较，低剂量IVIG组CBMC分泌IL-4显著降低，而IFN-γ变化轻微；较大剂量IVIG组IFN-γ和IL-4的水平皆明显降低，但以IFN-γ降低更为显著◇结果提示：IVIG可抑制早产儿脐血Thl、Th2细胞功能，并且与其剂量相关。低剂量时主要抑制Th2细胞功能，较大剂量时Th1、Th2细胞均受抑，但以Th1细胞更为显著17本实验研究结果显示：◇早产儿CBMC经不同剂量IVIG干预后，其CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达率无显著差异。◇较大剂量IVIG组CBMC分泌IL-10水平明显低于低剂量组和近生理状态组，低剂量组也明显低于近生理状态组；较大和低剂量组CBMC分泌TGF-β1水平均明显低于近生理状态组，但较大剂量组与低剂量组比较无显著性差异。◇结果提示：IVIG对早产儿CBMC中天然Treg细胞的数量并无影响。但IVIG能抑制早产儿CBMCIL-10和TGF-β1的分泌。IVIG浓度越高，IL-10分泌越少；而TGF-β1当IVIG达到一定浓度后其抑制分泌程度无进一步加重。181.正常2.过敏体质伴炎症反应3.过敏体质未伴炎症反应123TH1/TH17/TH2/Treg细胞19•综合国内外文献和本研究结果：早产儿应用较大剂量IVIG对其T细胞功能有明显影响，可进一步加重Th1/Th2失衡，抑制Treg细胞功能，加重暂时免疫低应答反应，影响细胞免疫的自然发育过程，可能增加日后变态反应性疾病的发生。提示早产儿应用IVIG需选择适宜剂量。20结论•IVIG可抑制早产儿脐血Thl、Th2细胞功能，并且与其剂量相关。低剂量时主要抑制Th2细胞功能，较大剂量时Th1、Th2细胞均受抑，但以Th1细胞更为显著。•IVIG不能直接影响早产儿脐血天然Treg细胞的数量，但可以通过调节细胞因子IL-10和TGF-β1的分泌抑制Treg细胞的功能且有剂量依赖效应。21树突细胞（DC）在机体免疫系统中处于中心地位作为一种专职抗原提呈细胞，DC可经其膜表面的Toll样受体（TLR）等来识别各种微生物的病原相关分子模式（PAMP），通过提呈抗原、表达共刺激分子和分泌相应细胞因子，在指导Th0细胞分化为Th1、Th2、Th17、Treg细胞的过程中发挥了重要作用22APC诱导T细胞亚群分化Th9IL-4iTh9TSLPR？23免疫系统和免疫反应--TOLL样受体