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下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究专业：口腔正畸学导师：王小琴教授研究生：赵华前言材料与方法结果讨论结论前言AllwrightandBundred通过流行病学调查显示在亚洲人群中下颌前突(MandibularPrognathism,MP)患病率较其他地区相对较高，大约为8-40%但是其致病原因至今仍不清楚。MP有家族聚集倾向MP可能为常染色体显性遗传病局部因素有一个影响MP的主基因且符合孟德尔遗传多因素影响GherianiMarazita许多学者RicardoSilviene2007年，余兴华等人对MP患者和正常下颌患者进行了生长激素受体基因单核苷酸多态性分析。另外还有许多学者在研究与下颌骨发育有关的基因，比如Shh﹑Nell-1﹑Ptc等。结果发现了一个位于第10外显子的1673位SNP位点碱基突变类型为腺嘌呤(A)→胞嘧啶(C)。国内研究现状Nell-1基因目前对Nell-1基因的研究主要集中在骨组织工程学方面，基因改变研究未见报道。本实验对105例（实验组60例，对照组45例）受试者的Nell-1基因SNP位点rs61150458进行了初步研究。SNP位点基因GC蛋白质GluAsp天冬氨酸谷氨酸研究目的探讨Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458在下颌前突与正常人群之间的差异为下颌前突的病因学机制提供理论基础。材料与方法仪器及材料厂家PCR扩增仪深圳泰立仪器仪表有限公司紫外凝胶分析系统UVP凝胶电泳仪HoeferScientificInstrumentsHinfⅠ限制性内切酶Fermentaslifesciences引物生工生物工程有限公司实验试剂与仪器研究对象满足以下条件的进行头颅侧位片测量：均为汉族人，且没有异族通婚史双侧颌面对称，无面部畸形无不良习惯及替牙障碍均为成年人，无外伤史，无手术史纳入标准对照组(正常)：SNA、SNB、ANB、上颌长、上颌位置、MP-FH在正常范围之内，2°＜ANB＜4°实验组(MP)：SNA、上颌长、上颌位置、MP-FH在正常范围之内，ANB＜0°。实验组60人对照组45人采静脉血5ml提取全部DNA设计相应目的基因的引物PCR扩增目的基因HinfⅠ酶切统计学分析实验步骤DNA提取采用TKM血细胞DNA快速提取法DNA提取目的基因引物的设计引物的设计采用Printer3.0软件上游引物：gcttccagggtggagtttta下游引物：cacagagttttggacccatgt50μLPCR反应体系试剂名称剂量10×Buffer5μLMgCl2(25mM)4μLdNTP(10mM)1μL上游引物(10μM)1μL下游引物(10μM)1μLTaq酶0.4μL模板DNA10μL三蒸水28μLPCR反应参数温度（℃）时间预热942min变性9420s退火5630s延伸7230s循环次数36次1SspIaat|att131tctttccctaatatttggcttccagggtggagttttagtaaaaattacagaaatgtgtcc61MboIIn|nnnnnnntcttc8461NdeII|gatc8361MboI|gatc83HinfIg|antc10161tcctttgaactgctcagaaaaggatcacattcttcctgagaatcagtgctgccgtgtctg121MboIIn|nnnnnnntcttc167121tagaggtaagtgggcttggtggtgggccatgcgtggggtgaggctggggctggtcttctg181gggcatgagattttaatgaatagtatgataataacatgggtccaaaactctgtgcgctgc酶的确定HinfⅠ5’…GANTC…3’3’…CTNAG…5’统计学分析比较各组间等位基因频率和基因型分布，采用卡方检验。对两组研究对象的基因型分布进行Hardy-Weinberg遗传平衡性检验所有统计学检验采用SPSS17.0软件完成，以P＜0.05代表有统计学差异结果电泳结果目的基因扩增产物200bpMarker目的基因实验组酶切后凝胶电泳图100bp200bpGG型酶切后片段长度：83bp、134bp；CC型酶切后片段长度：217bpGC型酶切后片段长度：83bp、134bp、217bp对照组酶切后凝胶电泳图100bp200bpGG型酶切后片段长度：83bp、134bp；CC型酶切后片段长度：217bpGC型酶切后片段长度：83bp、134bp、217bp等位基因频率分析组别等位基因X2P基因频数频率实验组G410.67C190.33对照组G280.620.4260.514C170.38注：P＞0.05，即实验组与对照组之间等位基因频率差异无显著性。基因型分析组别基因型频数频率X2P实验组GG320.52GC180.30CC100.18对照组GG230.511.8350.400GC100.22CC120.27注：P＞0.05，即实验组与对照组之间的基因型分布差异无显著性。讨论可单独引起成骨细胞的分化可以通过操纵一些成骨相关基因的下游途径来影响其他信号通路而促进成骨细胞的分化Cowan研究表明Nell-1蛋白只作用于颅颌面的成骨细胞，特别是对下颌骨的成骨有其特异性Nell-1基因的特点MP的致病原因与Nell-1基因无关。由于样本量有限，其代表性有限。MP的致病原因与Nell-1的该SNP位点的变异无关。结果分析由于实验组与对照组的病例有限，对Nell-1基因与MP患者的内在联系需增加样本量做进一步的研究，对其它位点及二者之间的内在联系仍需深入探讨。Nell-1基因的rs61150458多态性位点在中国汉族MP人群与正常人群之间的等位基因频率及基因型分布差异无显著性，尚不能认为MP的致病原因与该位点的变异有关。12主要参考文献[1]AlexanderAE,McNamaraJAJr,FranchiL,etal.SemilongitudinalcephalometricstudyofcraniofacialgrowthinuntreatedClassIIImalocclusion[J].OrthodDentofacialOrthop,2009,135(6):1-14[2]BaccettiT,ReyD,ObertiG,etal.Long-termoutcomesofClassIIItreatmentwithmandibularcervicalheadgearfollowedbyfixedappliances[J].AngleOrthod,2009.79(5):828-234[5]WatanabeM,SudaN,OhyamaK.MandibularprognathisminJapanesefamiliesascertainedthroughorthognathicallytreatedpatients[J].OrthodDentofacialOrthop,2005,128(4):466-470[6]ChangHP,TsengYC,ChangHE.Treatmentofmandibularprognathism[J].FormosMedAssoc,2006,105(10):781-790[7]T.Yamaguchi,S.B.Park,A.Narita,etal.Genome-wideLinkageAnalysisofMandibularPrognathisminKoreanandJapanesePatients[J].DentResearch,2005,84(3):255-259[8]FrazierBS,RinconRR,ZhouJ,etal.EvidenceoflinkageinaHispaniccohortwithaClassⅢdentofacialphenotype[J].DentRes,2009,88(1):56-60[9]王豫蓉,余兴华,戴红卫,等.生长激素受体基因单核苷酸多态性在下颌前突与正常人群中的分布研究[J].2008,33(12):1522-1524[10]CowanCM,ChengS,TingK,etal.Nell-1inducedboneformationwithinthedistractedintermaxillarysuture[J].Bone,2006,28(1):48-58[11]ZhangX,KurodaS,CarpenterD,etal.CraniosynostosisintransgenicmiceoverexpessingNell-1[J].ClinInvest,2002,112(6):861-870[12]CowanCM,ShiYY,Aalamioo,etal.Adipose-derivedadultstromalcellshealcritical-sizemousecalvarialdefects[J].NatBiotechnol,2004,22(5):560-567[12]ZhangX,CarpenterD,BokuiN,etal.OverexpressionofNell-1,acraniosynostosis-associatedgene,inducesapoptosisinosteoblastsduringcraniofacialdevelopment[J].BoneMinerRes,2003,18(12):2126-2134[13]LiebermanJR,DaluiskiA,EinhomTA.Theroleofgrowthfactorintherepairofbone.Biologyandclinicalapplications[J].BoneJointSurg,2002,84-A(6):1032-1044[14]A.A.El-Gheriani,B.S.Maher,A.S.El-Gheriani,etal.MarazitaSegregationAnalysisofMandibularPrognathisminLibya[J].DentResearch2003,82(7):523-527[15]RicardoMachadoCruz,HenriqueKrieger,RicardoFerreira,etal.MajorGeneandMultifactorialInheritanceofMandibularPrognathism[J].AmericanMedicalGenetics,2008,146A(1):71-77[16]StocktonDW,DasP,GoldenbergM,etal.MutationofPax9isassociatedwitholigodontia[J].NatGenet.2000,24(1):18-19[17]ZhouJ,LuY,GaoXH,etal.ThegrowthhormonereceptorgeneisassociatedwithmandibularheightinaChinesepopulation[J].DentRes,2005,84(11):1052-1057[18]ZhangX,KurodaS,CarpenterD,etal.CraniosynostosisintransgenicmiceoverexpressingNell-1[J].ClinInvest,2002,110(6):861-870[19]LanderES.Thenewgenomics:globalviewsofbiology[J].Science,1996,274(5287):536-539[20]DavidG,Wang.Large-scaleidentificationmappingandgenotypingofsinglenuclotidepolymorphismsinthehumangenome[J].Science,1998,280(5366):1077-1082[