基因工程原理(答案)

1基因工程原理（答案）一、填空题1．基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。2．基因工程的两个基本特点是：(1)____________，(2)___________。3．基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的___________。5．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________(3)___________等。7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)____________；(2)________________的活性。10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。11．EGTA是____________离子螯合剂。13．切口移位(nicktranslation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有____________的作用，可以将DNA-RNA杂种双链中的___________水解掉。16．基因工程中有3种主要类型的载体：_______________、_____________、2______________。17．就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。18．一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫。19．pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于，它的四环素抗性基因来自于，它的氨苄青霉素抗性基因来自于。20．YAC的最大容载能力是，BAC载体的最大容载能力是。21．pSCl01是一种复制的质粒。22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过和两种质粒改造而来。它的复制子来自，Amp抗性基因则是来自。23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是；二是。24．野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是和。25．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS位点序列来自，最大的克隆片段达到kb。26．野生型的噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1)(2)(3)。27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是，而来自噬菌体的主要结构是。28．噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基因组的的范围内。29．在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的3是。30．用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc，其目的是。31．引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1)(2)(3)(4)。32．Clark发现用TaqDNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的。33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在。34．乙醇沉淀DNA的原理是。35．假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：(1)_______________________________(2)_____________________________(3)_________________________________。36．受体细胞的感受态是___________________________________。37．DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)_________________(2)_______________(3)_____________(4)_______________________。38．将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个_________________。39．将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个____________，源于同一批RNA制备物的克隆群则构建了一个_________________。40．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用___________可以将这段DNA进行百万倍的扩增。41．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA,___________时摄人DNA。42．目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。大致可以分为：(1)_______________(2)____________(3)_____________(4)____________________________等。43．PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于___________________________。444．核酸杂交探针可分为两大类：DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为__________探针和__________________探针。45．如果用限制性内切核酸酶切割双链DNA产生5’突出的黏性末端，则可以用__________进行3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割DNA产生的是3’突出的黏性末端，可以用__________________进行3’末端标记。46．单链DNA探针的标记可以采用下列方法：(1)_________________________(2)__________________________(3)_____________________________________。47．根据Northern杂交的结果可以说明：_____________________________。48．差示杂交(differentialhybridization)技术需要__________________________。49．RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)上，同一放射DNA探针杂交的技术称_______________________。50．在________________技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。51．可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。52．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：(1)_______________(2)__________________(3)_________________。53．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别：(1)__________________________________________________________________(2)_________________________________________________________________。54．放射免疫筛选的原理基于以下三点：(1)_________________(2)_________________(3)________________________。二、选择题(单选或多选)1．因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是()(a)A．Kornberg(b)W．Gilbert(c)P．Berg(d)B．McClintock2．第一个作为重组DNA载体的质粒是()5(a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl83．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当。(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4．Ⅱ型限制性内切核酸酶：()(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列(b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供(c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供5．下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?()(a)限制酶是外切酶而不是内切酶(b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割(c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端(e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端6．第一个被分离的Ⅱ类酶是：()(a)EcoK(b)HindⅢ(c)HindⅡ(d)EcoB7．在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?()(a)反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度8．在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?()(a)EDTA(b)柠檬酸钠(c)SDS(d)EGTA9．在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?()(a)S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal31核酸酶10．限制性内切核酸酶可以特异性地识别：()(a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列(c)特定的三联密码(d)以上都正确11．下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是()。(a)Sau3AI(b)E．coRI(c)hindIII(d)Sau3A1612．限制性内切核酸酶的星号活性是指：()(a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。(b)活性大大提高(c)切割速度大大加快(d)识别序列与原来的完全不同13．下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?()(a)甘油含量过高(b)反应体系中含有有机溶剂(c)含有非Mg2+的二价阳离子(d)酶切反应时酶浓度过低14．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统15．在长模板链的指导下引物延伸合成长的DNA互补链时应选用()(a)T4DNA聚合酶(b)Klenow酶．(c)大肠杆菌DNA聚合酶I(d)T7DNA聚合酶16．末端转移酶是合成酶类，()(a)作用时不需要模板(b)在Ca2+的存在下，可以在突出的3′末端延长DNA链(c)在Ca2+的存在下，可以在隐蔽的3′末端延长DNA链(d)上述说法有两种是正确的17．在基因工程中，可用碱性磷酸酶()(a)防止DNA的自身环化(b)同多核苷酸激酶一起进行DNA的5′末端标记(c)制备突出的3′末端(d)上述说法都正确18．下列酶中，除()外都具有磷酸酶的活性(a)λ核酸外切酶(b)外切酶Ⅲ(c)单核苷酸激酶(d)碱性磷酸酶19．下列哪一种