临床PCR检测标准化研究

临床PCR检测的标准化卫生部临床检验中心李金明标准化(standardization)的概念Standard:文字Standards:物质Standardization:通过对测定方法和检测程序的规范化，使测定结果的量值可溯源至同一标准物质或参考方法，从而使测定结果在不同方法、不同试剂及不同的实验间具有可比性。标准物质、测定方法和检测程序标准化之间的关系为什么要进行标准化?通过标准化以改善实验室测定的准确度，从而提高不同的实验室间结果的可比性。缺乏标准化，则不同试剂、不同方法、不同实验室间的测定结果就无法一致，没有可比性，也无法对一种方法、一种试剂进行适当的评价。标准化的先决条件检测物的同一性标准品的同一性标准化组织世界卫生组织（WHO）生物学标准化专家委员会（TheExpertCommitteeonBiologicalStandardisation,ECBS）：负责建立生物物质的国际标准及参比材料。国家生物学标准和质控物研究所（NationalInstituteforBiologicalStandardsandControl,NIBSC）：WHO通过其提供国际标准品。一些区域和地区性组织：美国CDC、CAP、NIH国际性科学协会：IFCC、国家临床实验室标准化委员会（NationalCommitteeofClinicalLaboratoryStandardisation,NCCLS）以及美国和加拿大临床化学协会（AmericanSocietiesforClinicalChemistryandCanadianSocietiesforClinicalChemistryandCanadian,AACC和CSCC）等：组织编写一些临床检验的导则等文件标准品和质控品（1）可提供标准品的国际标准化组织有：WHO生物学标准化专家委员会（ECBS）、英国国家生物学标准和质控物研究所(NationalInstituteforBiologicalStandardsandControl,NIBSC)、美国CDC和CAP、国家卫生研究所（NIH）、IFCC等；国内有中国药品生物制品检定所、卫生部临床检验中心标准品和质控品（2）在美国临床PCR检验试剂方法用于临床必须有FDA批准；在德国监督机构为INSTAND；在国内试剂批准文号由SFDA负责。仅使用标准品并不能保证PCR测定结果的可比性，但其在保证PCR测定质量中的重要性却是不可替代的。标准品和质控品（3）标准品和质控品的功能:可用作临床检测的校准物;可用来评价试验的有效性;作为室内质控样本;作为室间质评样本.国际标准品分级:可分为第一,第二和第三等三个等级.一级标准数量有限,可使用10-20年,是冻干品,内含载体蛋白.一级标准可用来校准第二和第三级标准.国际标准品(IS)中作为第一级标准,二级标准可用来维持校准.国内标准品分级：一级和二级。标准品和质控品（4）标准品的单位:病毒核酸国际标准品均以IU/L表示。有关标准品单位和溯源的问题长度单位的确定和溯源举例标准品定值的测定方法:参考方法决定性方法（Definitivemethod）:是一个具有高精密度及没有系统偏差的参考方法。参考方法:(Referencemethod）:应有低测定下限、不受非特异干扰及不与相关的化合物发生交叉反应，同时还应该容易得到。为保持参考方法的有效性,有必要建立一个参考实验室的网络.国际单位(InternationalUnits)的由来国际单位（Internationalunits,IU）定义:国际标准的应用目的是为测定提供一个通用的标准单位,使用相同的测定生物学单位来指定标准品或工作校准品的单位.核酸检测国际标准项目研制者发布年编号浓度HBVDNANIBSC199997/746106IU/mlHCVRNANIBSC199796/790105IU/mlNIBSC200596/798105IU/mlHIV-1RNANIBSC199897/656105IU/瓶HAVRNANIBSC200300/560105IU/mlB19DNANIBSC200099/800106IU/ml病毒核酸检测国家标准项目研制者发布年编号浓度HBVDNANCCL2005GBW(E)0900311.03106IU/mlNCCL2007GBW09151HCVRNANCCL2005GBW(E)0900321.29105IU/mlNCCL2007GBW09152测定方法的标准化一个测定方法的组成（1）核酸提取方法；（2）扩增及产物分析方法；（3）如果靶核酸，还有反转录过程。核酸提取方法对抑制物去除的有效性；简便性。扩增及产物分析方法实时荧光PCRPCR-ELISA等。扩增检测条件（循环条件、试剂等）的理想化。内标的设置：假阴性质控的最有效的方法反转录试剂的效率。工作程序的标准化标本采集程序的标准化仪器设备的校准、维护和正确使用试剂和消耗品的质检防“污染”措施的实施人员的培训上岗严格的室内质量控制参加室间质量评价结果报告和解释的标准化工作规范的制订