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实验一毛细血管采血白细胞计数临床检验基础实验王梅江苏大学基础医学与医学技术学院临床检验与输血教研室第一部分毛细血管采血毛细血管采血即皮肤采血法，主要用于需血量微小的检查项目。所获得的末稍血不单纯是毛细血管血，实际是是微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，并依采血时挤压的力度不同含有少量细胞间质和细胞内液。毛细血管采血器具采血笔采血笔结构示意图采血笔的使用拧下采血笔前端笔帽安装采血针采血采血针1、准备材料2、选择采血部位3、按摩皮肤4、消毒皮肤用75%乙醇脱脂棉球擦拭采血部位的皮肤，待干。5、针刺皮肤用左手拇指和示指固定绷紧皮肤，右手持采血针自指尖腹内侧迅速刺入6、拭去第一滴血7、吸血血液自然流出时，用微量吸管吸血至刻度8、止血毛细血管采血操作步骤1、采血前准备患者、器材2、选择采血部位皮肤完整处采血3、消毒皮肤无菌操作、一人一针一管、皮肤消毒应待乙醇或碘酊挥发后采血4、针刺皮肤迅速，伤口深度5、拭去第1滴血6、吸血与检测微量吸管校准、血液充入管内的速度、应及时测定毛细血管采血注意事项第二部分白细胞计数原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。试剂：白细胞稀释液：冰乙酸2.0ml10g/L亚甲蓝3滴加蒸馏水至100ml器材：微量吸管、带孔吸头、改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片1ml刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜微量吸管的使用1、将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气；2、拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气；3、将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指；4、用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触吸管下口吸去多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度；5、将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀；6、拔出微量吸管弃入污物桶。改良牛鲍血细胞计数板结构计数板上下各一个计数池血细胞计数池的方格计数区域分为9个大方格四角的大方格各划分为16个中方格中央大方格划分为25个中方格四角的大方格为白细胞计数区中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区白细胞数/L=N/4×10×106×稀释倍数每个大方格的容积=面积×高度=1mm2×0.1mm=0.1mm3(μl)每个大方格的面积=1mm×1mm=1mm2（N：4个大方格细胞总数）细胞计数原则•大方格四边压线细胞数左不数右，数上不数下，•弓形移动（1）加稀释液用移液管向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液。（2）采血、稀释用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等其溶血。（3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。（4）充计数池将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。（5）调试显微镜将计数板放置载物台上，转至低倍镜（10×），调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，调节光亮。（6）计数低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数下，数左不数右。白细胞计数操作步骤(1)稀释液密封保存，防止污染，小试管、计数板、盖片均须清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。(2)采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。(3)稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，无不足、外溢和气泡，细胞分布均匀。(4)白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10％。(5)白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。(6)调试显微镜将血细胞计数板平放于载物台，低倍镜处所充计数池正中盖片略上方，向下微调载物台（防止压碎盖片）至看清计数区域内分隔线条为止。白细胞计数操作注意事项实验报告内容原理试剂器材操作步骤实验结果注意事项思考题