分子克隆有详细的描述,具体步骤如下:1、估算含有质粒溶液的体积V,加入V/9体积的3MNaAc,(我喜欢在质粒溶液中再加入一定量的水,使得总体积大概在270ul左右,之后加30ulNaAc)使NaAc终浓度为0.3M。2、加入2倍体积冰冷无水乙醇,冰上孵育或-20度20min,3、最大速度离心10min,4、用75%乙醇洗涤2次(每次700ul即可),5、室温晾干,6、加入适当体积的水或TEbuffer溶解即可。质粒浓缩的办法总的来说是利用乙醇沉淀DNA的原理进行.首先你应当确定你提取的质粒量有多大,体积多少,这样才好确定浓缩的优化策略,详细步骤介绍如下:1确定体积,一般需要加2.5倍原始DNA溶液体积的95%乙醇(如果你提的质粒纯度好的话,可以将乙醇在-20度冰箱预冷后加入效果更好),同时加入1/10倍原始DNA溶液体积的醋酸钠(3M,pH4.8),;2离心,以离心机最大速度(13000rpm以上)离心10分钟;3倒掉上清,用10ul枪头吸去离心管里剩余的水,但不要吸到DNA;4室温放置10~15分钟,直至DNA刚刚晾干,但又不能干透成白色不透明状;5用适量去离子水或TE溶解至你所需要的浓度。为了浓缩达到你所需要的浓度,你应先对质粒定量,如果质粒总量小于2ug,在沉淀时可以加入1ul的糖原,以便于操作。biomiga-EndoFreeplasmidezFlowmaxikit(快速法)-内有质粒浓缩方法注:得到的DNA需要浓缩,请加入0.1倍体积的3M的醋酸钠(pH5.2)和0.7倍体积的异丙醇,室温10min,室温下高速离心10分钟,底部可见白色的DNA沉淀,弃去上清,加入1mL70%乙醇,高速离心5分钟,弃去上清,空气干燥20分钟,加入EndofreeElutionBuffer重新溶解质粒DNA。沉淀DNA时,醋酸钠和异丙醇一定要用常温的否则盐可能也被沉淀下来。如果提取的不是特别微量的样品,乙醇或异丙醇沉淀的时间最好不要太长,因为过长时间的沉淀会造成沉淀中的盐分升高,影响PCR和酶切.因此我个人都是:genomicDNA:2V乙醇+0.1V3MNaAc,室温10min;plasmid(碱裂解法):2V乙醇/1V异丙醇,室温10min;RNA:1V异丙醇,室温5min(很多国外RNA相关实验的Kit专门说明了不要超过5min,否则有可能影响后续实验).低温有助于低丰度/小片段沉淀,因此可以据具体情况-20度沉淀,但沉淀的时间最好不要太长,事实上长时间不会对沉淀量有质的改变,因此结合保证质量和提高效率两大原则,不要选择长时间沉淀.当室温静置片刻后离心,看不见沉淀,大可以再移入-20C处理的。