放散试验

放散试验原理红细胞上的抗原与血清中抗体在适合条件下发生凝集或致敏，这种结合是可逆的。如改变某些物理条件，抗体又可从结合的细胞上放散，再以相应的红细胞鉴定放散液内抗体的种类并测定其强度，用以判定原来红细胞上抗原的型别。这种方法常用于ABO亚型的鉴定、全凝集或多凝集红细胞的定型、类B的鉴定以及新生儿溶血病的诊断等放散试验方法放散试验的方法很多，ABO血型IgM抗体以热放散法为常用。Rh血型IgG抗体以乙醚放散法为常用。加热放散法试剂操作注意事项加热放散法试剂抗A和抗B分型血清。2%A型和B型试剂红细胞盐水悬液。受检红细胞。加热放散法操作1.将受检红细胞以大量生理盐水洗涤3次，末次洗涤后，将盐水除尽，取压实红细胞l份，分别与2份抗A和抗B分型血清混合。置4℃lh，每隔10min将试管振摇1次，使充分混合。加热放散法操作2.离心去除上清液，以4℃冷盐水洗涤红细胞3-4次，倾去洗涤液，留取压实红细胞，加1/2容积的生理盐水(如放散液不立刻进行检查，应以AB型血清代理生理盐水)，置56℃水浴中10min,每隔15s振摇l次，使吸附在红细胞上的抗体充分放散。加热放散法操作3.立刻以3000r/min离心，离心时套管内放温水，使温度尽量保持在56℃，分离得的上清液即为放散液。4.将放散液用2%A型和B型试剂红细胞鉴定抗体，即可检出受检红细胞的血型。加热放散法操作如实验的目的鉴定A亚型，则可用已知A亚型红细胞同时作放散实验，按放散液抗体的强度A1﹤A2﹤A3﹤Ax﹤Am，判定受检红细胞亚型的型别，B亚型的放散液鉴定方法相似。加热放散法注意事项1.为了使放散液内含有最多的抗体，吸收血清量应加大。2.放散时，应严格注意温度和时间。温度过高红细胞易溶解;温度过低，抗体从红细胞上放散不完全。3.直接抗人球蛋白试验阳性的红细胞，如新生儿溶血病患儿或自身免疫性溶血性贫血患者，经洗涤后即可作抗体放散试验。4.放散液中抗体易变性，故应立刻进行鉴定。若需保存，应将抗体放散于选定的AB型血清或牛白蛋白液中。乙醚放散法试剂操作特点乙醚放散法试剂受检者血清相应抗原的红细胞(抗凝血)乙醚（分析试剂）AB血清乙醚放散法操作取具有相应抗抗原的抗凝血，离心后吸去血浆，加大量生理盐水，洗涤1次，离心，取压实红细胞备用。取受检者血清5ml，加压实红细胞1ml，混匀后放在适当温度中1小时，在此期间要摇匀1-2次。离心。离心后取出，将上清液吸出另放1管，鉴定上清液中的抗体。乙醚放散法操作将红细胞用盐水洗涤3次，离心压实红细胞。取1体积压实红细胞，加1体积AB型血清或生理盐水和2体积乙醚，颠倒摇匀10min，然后以3000r/min离心5min.离心后即分成3层，最上层是乙醚，中层是细胞基质，下层是具有抗体的放散液，其色深红。乙醚放散法操作用清洁的吸管吸出放散液，若有混浊，可再离心1次。将放散液放置37℃水浴中30min，除尽乙醚，然后鉴定抗体。乙醚放散法特点本试验适用于鉴定Rh抗体。最大优点用于检查获得性溶血性贫血，此种患者的红细胞为直接抗人球蛋白试验阳性，说明在体内已有自身抗体吸附在红细胞上。这种抗体常常有Rh特异性。