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第七章人工授精目录第一节概述第二节采精第三节精液品质检查第四节精液的稀释与保存第五节输精第六节冷冻精液第一节概述概念人工授精是利用器械采集雄性动物的精液。经检查和处理后，再用器械将精液输入到发情雌性动物的生殖道内，以代替自然交配而繁殖后代的一种技术。一、人工授精的发展概况人工授精的发展经历下列三个阶段：1.试验阶段：1780年，意大利生理学家Spallanzani，第一次成功地用狗进行了人工授精试验。2.实用阶段：上世纪40-60年代，人工授精的应用蓬勃发展成为繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，发展最快，技术水平较高。3．冷冻精液阶段：50年代英国的Smith和Polge研究牛精液的冷冻保存方法，人工授精技术进入了一个新的发展阶段。二、人工授精的优越性1.提高了优良种公畜的配种效能和种用价值2.加速家畜品种改良，促进育种工作3.降低了饲养管理费用4.防止各种疾病，特别是生殖道传染病的传播5.有利于提高母畜的受胎率6.可以进行精液的长期保存7.这开展科学研究提供了有效手段三、人工授精的限制1、通过人工授精可能使不良的公畜影响范围更大2、必须投入一定资金，进行房舍建设和设备购置3、必须进行人员的技术培训，不良的操作会造成更严重的问题第二节采精采精的基本要求安全：对种公畜、对人员必须确保安全洁净：采集的精液不能受到任何生物和化学污染全部：能够采集到种公畜全部的精液一、采精前的准备（一）采精场地采精要有一定的采精环境，以便雄性动物建立起巩固的条件反射，同时防止精液污染。采精场地应该宽敞、平坦、安静、清洁，场内设有采精架以保定台畜，或设立假台畜，供公畜爬跨进行采精，采精场应与人工授精操作室和公畜舍相连。室内采精场的面积一般为10×10平方米，并附设喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备。公猪采精室（二）台畜的准备台畜有真假台畜之分真台畜是指使用与公畜同种的母畜、阉畜或另一头种公畜作台畜。真台畜应健康、体壮、大小适中、性情温顺。选发情的母畜比较理想，经过训练的公、母畜也可作台畜。假台畜即采精台，是模仿母畜体型高低大小，选用金属材料或木料做成的一个具有一定支撑力的支架。（三）调教种公畜爬跨假台畜利用假台畜采精，要事先对种公畜进行调教，使其建立条件反射。调教的方法有如下几种：1.在假台畜的后躯涂抹发情母畜的阴道粘液或尿液，公畜则会受到剌激而引起性兴奋并爬跨假台畜，经过几次采精后即可调教成功；2.在假台畜旁边牵一发情母畜，诱使公畜进行爬跨，但不让交配而把其拉下，反复多次，待公畜性冲动达到高峰时，迅速牵走母畜，令其爬跨假台畜采精；3.将待调教的公畜拴系在假台畜附近，让其目睹另一头已调教好的公畜爬跨假台畜，然后再诱其爬跨。公畜调教时应注意的事项1.调教过程中，要反复进行训练，耐心诱导，切勿施用强迫、恐吓、抽打等不良剌激，以防止性抑制而给调教造成困难；2.调教时应注意公畜外生殖器的清洁卫生；3.最好选择在早上调教，早上精力充沛，性欲盛；4.调教时间、地点要固定，每次调教时间不宜长；(三)器械准备采精所需要的器械要事先准备好，力求清洁无菌，在使用之前要严格消毒，每次使用后必须洗刷干净。(四)种公畜的准备种公畜采精前的准备，包括体表的清洁消毒和诱情（性准备）两个方面。这和精液的质量和数量都有密切的关系。采精前应擦拭公畜下腹部，用0.1%高锰酸钾溶液等洗净其包皮外并抹干，挤出包皮腔内积尿和其他残留物并抹干。在采精前，需以不同诱情方法使公畜有充分的性兴奋和性欲，一般采取让公畜在台畜附近停留片刻，进行几次假爬跨。二、采精技术采精方法雄性动物的采精方法很多，主要有假阴道法、手握法、电剌激法、按摩法、海绵法等。假阴道法适用于各种家畜和部分小动物，手握法是当前公猪采精普遍应用的方法，按摩法主要用于禽类和犬类，电剌激法主要用于野生动物的采精。（一）假阴道法原理：它是模拟母畜阴道环境条件的人工阴道，诱导公畜射精而采集精液的方法。1.假阴道的结构假阴道是一筒状结构，主要由外壳、内胎、集精杯及附件组成。外壳为一圆筒，由轻质铁皮或硬塑料制成，内胎为弹性强、薄而柔软无毒的橡胶筒，装在外壳内，构成假阴道内壁；集精杯由暗色玻璃或塑料制成，装在假阴道的一端。此外，还有固定内胎的胶圈，保定集精杯用的三角保定带，充气用的活塞和双联球等一些附件。各种家畜的假阴道结构基本相同，但形状和大小不一。2.假阴道的准备假阴道应具备五个条件：1)适宜温度：采精时假阴道内腔温度应保持在38-40℃，集精杯也应保持34-35℃。2)适当压力：借助注入水和空气来调节假阴道的压力。3)适当润滑度：涂抹润滑剂的部位是假阴道前段1/3-1/2处到外口周围，但涂布不可过长过多。。4)无菌：凡接触精液的部分均须经消毒。5)无破损漏洞：假阴道不得漏水或漏气。牛羊假阴道安装充气后理想的状态不太理想的状态（但可以用）牛的假阴道法采精羊的假阴道法采精(二)手握法适用于猪的采精。是目前广泛使用的采集的一种方法。操作时，采精员要戴上灭菌胶手套，蹲在假台畜左侧，待公猪爬跨台畜后，当阴茎从包皮内开始伸出时，立即紧握龟头，待其抽送片刻后，锁定公猪的龟头。待阴茎充分勃起时，顺势牵引向前，就能导致公猪射精。另一只手持带有一次过滤网的的集精杯收集精子浓厚部分的精液，其它稀薄精液及颗粒状胶冻分泌物排出时可随时弃掉。分段采精：弃掉含副性腺分泌物多、精子较少、精液清亮白色的第一段和精液较稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液浓、精子多、呈乳白色的第二段。目录猪的拳握法采精(三)电剌激法本法是通过电流剌激公畜引起射精而采集精液的一种方法。适用于各种动物。电剌激采精器由电子控制器和电极探棒两部分组成。电剌激采精应将公畜以站立或侧卧姿势保定。保定后，剪去包皮及其周围的被毛，并用生理盐水冲洗拭干，然后将电极探棒经肛门缓慢插入直肠，达到靠近输精管壶腹部的直肠底壁，大家畜插入深度约20-25厘米，羊10厘米，犬10-15厘米，兔5厘米。然后调节控制器，选择好频率，开通电源。调节电压时，由低开始，按一定时间通电及间歇，逐步增高剌激强度和电压，直至公畜伸出阴茎，勃起射精，将精液收集于附有保温装置的集精瓶内。(四)按摩法此法适用于牛、犬和禽类。这里重点介绍禽的按摩采精。鸡的按摩采精一般二人进行，一人用两手分别握着公鸡两腿，以自然宽度分开，使鸡头向后，尾部朝向术者。术者先以剪子剪去公鸡泄殖腔周围的羽毛，再以酒精棉花球消毒泄殖腔周围，待酒精干后再进行采精。采精时术者用右手中指和无名指夹着经消毒、清洗、烘干的采精器，使器口握在手心内，手心朝向下方，以避免按摩时公鸡排粪污染，左手沿公鸡背鞍部向尾羽方向，抚摩几次，以减轻公鸡惊恐并引起性感。接着术者左手顺势翻转手掌，将尾羽翻向背侧，并以拇指与食指跨在泄殖腔两上侧，右手拇指与食指跨在泄殖腔两下侧腹部柔软部，以迅速敏捷手法，抖动触摸腹部柔软处，然后迅速轻轻地用力向上抵压泄殖腔，左手拇指和食指即可在泄殖腔两上侧作微微挤压，精液即可顺利排出。与此同时，迅速将右手夹着的集精器口翻上，承接精液流入集精器中。三、采精频率采精频率是指第周对雄性动物的采精次数。为了既能最大限度地采集精液，又能维持其健康体况和正常生殖机能，必须合理安排采精频率。牛：每周2天采精，当日采2次猪：隔日一次，最好3天一次羊：每周3天，当日采2次。犬：隔日一次第三节精液品质检查一、目的二、项目三、方法一、检查的目的1.检查种公畜的配种能力2.公畜的繁殖问题3.确定精液可稀释的倍数4.检查精液的处理方法是否正确5.检查精液产品的质量二、检查的项目（一）直观项目（二）微观项目(一)直观检查项目射精量色泽气味云雾状PH值美兰退色试验(二)微观检查项目精子活力估测精子活力计数密度测定:计数板计数、比色计测定畸形率：形态畸形率、顶体畸形率三、主要项目检查方法（一）直观项目检查（二）微观项目检查（一）直观项目检查1.射精量2.色泽3.气味4.云雾状(1)射精量的测定方法(2)公畜的正常射精量(3)采精量不正常的原因1、射精量(1)射精量的测定方法概念:射精量是指每次射精的体积测定:以连续3次以上正常采集到的精液的平均值代表测定方法:可用体积测量容器如刻度试管或量筒,也可用电子秤称重近似代表体积(2)公畜的正常射精量影响射精量的因素:种类、睾丸大小质地、季节、健康状况不同畜种的正常射精量：畜种奶牛水牛马猪绵羊山羊射精量ml5-103-630-100200-3000.8-1.20.5-1.5050100150200250奶牛水牛马猪绵羊山羊射精量不同畜种的射精量比较（3）射精量不正常的原因现象原因过少采精过频、性机能衰退、睾丸炎、发育不良过多副性腺发炎、假阴道漏水、尿潴留、采精操作不熟练2.色泽色泽：是指精液的颜色及其浓厚程度，它某种程度反应精液是否正常，精子的浓度高低正常的精液：猪：浅灰白至白色牛羊：乳白色或乳黄色不正常精液原因分析正常精液特征依从浓到稀：乳黄-乳白-白色-灰白淡红（鲜红）生殖道下段出血或龟头出血淡红（暗红）副性腺或生殖道出血绿副性腺或尿生殖道化脓褐混有尿液3.气味正常的精液：应没有很浓的气味，或略带动物特有的腥膻味腥味：有脓液臊味：有尿液或包皮液4.云雾状是指新鲜精液在33-35℃温度下，精子成群运动所产生的上下翻卷的现象。云雾状的明显程度代表高浓度的精液中精子活力的高低。云雾状分级标准+++翻明显而且较快++翻明显但较慢+仔细看才能看到精液的移动-无精液移动（二）微观项目检查1.活力估测2.密度测定3.畸形率测定1.活力的估测(1)概念:37℃下,精液中前进运动精子占总精子数的百分率(2)主要测定方法:估测法活力测定时精液的稀释用品例：牛精子活力检查的程序载玻片预温精液稀释取样检查镜检活力估测活力记录将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37℃，然后放在载玻片将生理盐水与精液等温后，按1:10稀释取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片用100倍和400倍观察判断视野中前进运动精子占的百分率按10级制评分和记录2.精子的密度检查(1)密度的概念及表示方法单位体积精液中所含的精子数表示方法:个/ml或亿/ml(2)各种家畜精液的精子密度畜种牛羊猪马鸡密度亿/ml8-1220-302-31.5-330-50(3)各种家畜精子密度比较010203040牛羊猪马鸡亿/ml(4)精子密度的测定方法精子密度计数板(器)简介精液的稀释精液注入计数室精子计数精子密度计算精子密度计数板(器)简介精子计数室长宽各1mm,面积1mm2高度0.1mm,体积0.1mm3由双线或三线组成25个(5X5)中方格每个中方格内有16个小方格(4X4)共计400个小方格精子计数室及一个中方格精液的稀释将精液注入计数室前必须对精液进行稀释,以便于计数稀释的比例根据动物精液的密度范围确定稀释方法:用5-25ul移液器和100-1000移液器,在小试管中进行组合不同的稀释.如牛精液稀释100倍,为5ul原精+500ul稀释液稀释液:3%氯化钠溶液,用以杀死精子,便于计数注入计数室前各种家畜精液建议稀释比例畜种牛羊猪马鸡稀释倍数10020040404003%氯化钠ul原精液ul500510005200-55200-5520005返回精液注入计数室将洁净的计数板放在载物台上固定好,盖上干净的盖玻片。取25ul稀释后的精液,将吸咀放于盖玻片与计数板的接缝处。缓慢注入精液,使精液依靠毛细作用吸入计数室。注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！用吸管稀释后精液注入计数室共有两个对称的计数室用移液器注入精液精子计数将计数板固定在显微镜的推进器内，用100倍放大找到计数室，再用400倍找到计数室的第一个中方格。计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。进行精子计数的中方格数可以是四角一中心共5个中方格也可以是从左角到右下角五个中方格