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动物细胞工程通常采用的技术手段动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体动物细胞核移植是其他动物细胞工程技术的基础。一、动物细胞培养动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。1、概念：2、原理：细胞增殖一、动物细胞培养阅读“动物细胞培养过程”并思考：1、简述动物细胞培养的操作过程2、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？3、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？动物细胞培养过程3、动物细胞培养过程动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶或胶原蛋白酶10代细胞50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加培养液遗传物质未改变遗传物质已改变动物组织细胞间隙中含有一定量的纤维蛋白，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。（水解纤维蛋白）原代培养使组织细胞分散开的目的：①能保证细胞所需要的营养供应；②有利于细胞内有害代谢产物的及时排出传代培养一般传至10代直至50代就不能再分裂了，这时细胞核内遗传物质未发生变化，形成的细胞群传代培养过程中有个别细胞传至50代以后，由于遗传物质改变，失去控制，成为无限增殖的不死的癌症细胞，形成的细胞群4、结果：动物细胞培养最终不形成生物体贴壁生长接触抑制，单层细胞胰蛋白酶处理分瓶继续培养（3）能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？（1）动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？不能，因为动物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（pH=2.0）没有活性。胚胎组织或幼龄动物的组织或器官生命力旺盛，分裂能力强，容易培养探究（2）如何将动物组织分散成单个的细胞呢？先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理（4）胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。（5）什么叫细胞贴壁和接触抑制？悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上的现象，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。探究50代以后失去接触抑制接触抑制（6）什么是原代培养、传代培养？为什么要进行传代培养？原代培养：取材（动物组织）→细胞分散→初次培养传代培养：培养的细胞→细胞分散→继续培养进行传代培养的原因：接触抑制细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？遗传物质改变5、动物细胞培养条件：①无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）②营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）③温度和pH36.5±0.5℃,7.2-7.4④气体环境O2和CO2（95%空气和5%CO2）提供有利于细胞生长增殖的激素、生长因子或提供合成培养基所缺乏的营养物质等6、动物细胞培养的应用①获得细胞产物，如蛋白质生物制品－病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等②用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性③用于生理、病理、药理等方面的研究比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基类型培养基特有成分培养结果培养目的细胞的全能性细胞增殖植物组织培养和动物细胞培养的比较固体培养基液体培养基蔗糖、植物激素葡萄糖、动物血清植物体细胞株、细胞系快速繁殖、培育无病毒植株等获得细胞或细胞分泌蛋白卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核早期胚胎卵裂C母绵羊子宫多莉羊分娩妊娠融合后的卵细胞多莉羊的培育过程二、动物体细胞核移植技术和克隆动物动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中。使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。（克隆动物）1、动物核移植：2、分类胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易细胞分化程度高，恢复全能性不容易2、为什么不是取供体细胞核进行核移植操作，而是直接将供体细胞整个注入去核卵母细胞中？保证供核不被破坏，使所得个体的性状更符合供体。1、受体细胞为什么选用卵母细胞？卵母细胞体积大，易操作，而且含有促使细胞核表达全能性所需的物质和营养条件。3、体细胞核移植的过程供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质）去核无核卵母细胞注入细胞融合重组细胞构建重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体遗传基础相同的个体归纳:1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植2.取卵母细胞作受体细胞的原因是:卵母细胞体积大，易操作，而且含有促使细胞核表达全能性所需的物质和营养条件。１、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的遗传物质几乎全部来自有利用价值的动物提供的细胞。２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未变异3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？不是；克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞；此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处环境也有很大关系。思考题4、体细胞核移植技术的应用前景（1）在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程.（2）保护濒危物种，增加存活数量（3）医药卫生领域可以生产医用蛋白及组织器官的移植.•①成功率低•②克隆动物存在健康问题•③克隆动物食品的安全性问题存有争议5、体细胞核移植技术存在的问题知识结构动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物体细胞核移植技术和克隆动物核移植技术和克隆动物的概念体细胞核移植技术的过程体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术存在的问题科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛,如果要加速转基因奶牛的繁育速度,可以对此转基因奶牛进行克隆(如下图),结合图示回答下列相关问题：(1)在进行细胞培养之前,要对取自转基因奶牛的组织进行分离,形成单个细胞,这个过程中需要利用____酶处理.胰蛋白科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛,如果要加速转基因奶牛的繁育速度,可以对此转基因奶牛进行克隆(如下图),结合图示回答下列相关问题：(2)将进行细胞培养的供体细胞的细胞核注入去核的卵母细胞中,去掉卵母细胞细胞核的目的是_____________________________.克隆动物的遗传物质几乎全部来自供体细胞的细胞核科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛,如果要加速转基因奶牛的繁育速度,可以对此转基因奶牛进行克隆(如下图),结合图示回答下列相关问题：(3)在进行原代培养时,细胞增殖的方式是________；此外,还会表现出________和_______等特点.有丝分裂细胞贴壁生长接触抑制科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛,如果要加速转基因奶牛的繁育速度,可以对此转基因奶牛进行克隆(如下图),结合图示回答下列相关问题：(4)重组细胞在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛体内就会生出与供体奶牛遗传物质相同的犊牛,但也不是100%的复制,其原因可能是___________.①．生物性状受细胞核和细胞质共同控制；②．生物性状还受环境因素的影响科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛,如果要加速转基因奶牛的繁育速度,可以对此转基因奶牛进行克隆(如下图),结合图示回答下列相关问题：(5)上述动物细胞工程中涉及的技术有：_________、胚胎移植等，转基因奶牛的克隆成功,说明了动物的________具有全能性.核移植技术细胞核