食用菌各级菌种的制作

食用菌原种栽培种制作第三章食用菌各级菌种的制作人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。1）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体称为母种。2）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。3）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成为生产上使用的菌种称为栽培种。一般1支试管菌种可繁殖4-6瓶原种，每瓶原种又可扩大繁殖60-100瓶栽培种。食用菌菌种原种和栽培种的生产，无论是培养基成分，配制方法和灭菌方法基本上是相同的。1）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作种源接种而成，主要用于繁殖栽培种，也可直接用于生产。（母种→原种）2）栽培种：由原种作种源扩大而成，只能用于生产。（原种→栽培种）一、常用培养料的配方和配制方法培养料木屑——米糠培养料：木生菇类，如：木耳、银耳、香菇；谷粒——多种菇类。棉籽壳——米糠培养料：多种菇类。1、木屑米糠培养基（适用于木腐菌食用菌菌丝生长）木屑78%、麸皮或米糠20%、石膏1%、蔗糖1%、水适量。2、棉籽壳麸皮培养基（适用于大多数食用菌菌丝生长）棉籽壳78%、麸皮20%、蔗糖1%、石膏1%、水适量。3、棉籽壳木屑综合培养基（适用于大多数食用菌菌丝生长）木屑32%、棉籽壳50%、麸皮15%、石膏1%、蔗糖1%、过磷酸钙0.5%、尿素0.5%，水适量。4、麦粒培养基（适用于大多数食用菌菌丝生长）小麦98%、石膏2%、水适量。一、常用培养料的配方和配制方法⑴掌握碳氮比例食用菌对碳和氮的需要有一个比例，简称碳氮比（C／Ｎ）。菌丝体生长阶段：C／Ｎ=20∶1；子实体形成阶段：C／Ｎ=30-40∶1。二、培养基（料）配制原则⑵选好培养材料选不含杀菌物质的木屑杉、松、樟等树种，含酚、酯、精油等杀菌物质，会抑制食用菌生长。要用必须经过处理，如：蒸煮、晒等。二、培养基（料）配制原则⑶注意物理性状培养原料要注意颗粒粗细、质地软硬程度，以及持水性能等物理性状。⑷调节酸碱度各种食用菌需要的pH值不同，配制培养料时，应选用NaOH、石灰、盐酸或过磷酸钙等物质调节pH值。霉菌比食用菌喜欢更低的pH值，生产上有时为了控制这类杂菌的发生，往往将pH值适当调高0.5-1。二、培养基（料）配制原则⑴米糠、麸皮作用作用：补充氮源和维生素。稻草、麦秸、木屑、棉籽壳等纤维素原料，含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。麸皮：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。米糠：含氮量比麸皮少。用量：一般10%-20%，过多易引起污染。三、培养基原料用途的几点说明⑵加糖的作用①初期补充碳源，用量1%-5%。②诱导胞外酶的产生。纤维素原料，食用菌利用缓慢。加入少量白糖作为食用菌初期补充碳源，促进菌丝快速生长，同时诱导纤维素酶的产生，更好地利用纤维素。三、培养基原料用途的几点说明⑶Ca2＋作用①提供食用菌钙离子：原料中加石膏、CaCO3或过磷酸钙、骨粉提供食用菌钙离子；②钙不断中和食用菌产生的有机酸；③钙还能中和单宁。三、培养基原料用途的几点说明按配方称取原料→拌料→调节含水量65%左右→装袋→灭菌（1.5kg／cm2，1.5-2h）→冷却→接种（接入黄豆大小一块菌种）→培养（25℃-27℃）→菌丝长满瓶（袋）→培养7d-8d→扩大成栽培种。四、原种、栽培种的制作方法含水量65%左右判断：用手紧握培养料，手指缝中有水珠渗出，但不滴下。接种后的原种，一般在3d~5d左右菌丝恢复生长，应每天全面检查杂菌情况，如有污染及时剔除；如发现接种块无新菌丝萌发，则认为是死菌，应及时补种。正常：菌丝白色杂菌：黄、红、绿、黑死菌：补种五、杂菌检查（菌种检查）三、原种、栽培种的接种接原种用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上接栽培种用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋的两端或瓶中料面上栽培种接种(一)培养条件场所清洁空气清新光线暗空气湿度60%-70%温度约25℃四、菌种培养（二）技术环节1.母种培养及时挑拣污染管分离的母种要纯化→出菇试验→使用控制菌龄（即将长满斜面）培养时间5~10天母种培养2.原种栽培种的培养培养时间：约30天勿堆放过挤及时挑拣污染瓶（袋）栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧控制菌龄（菌丝长满后7~10天使用）二、菌种质量的鉴定形态特征、生理特性、栽培性状、经济效益等鉴定项目（一）母种质量的鉴定、菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快等1.外观好差丝干燥、收缩、自溶产生红褐色液体等退化母种好母种2.鉴定耐干湿性试验接入母种→正常生长原种培养基含水量＜50%＞70%耐高温性试验仍正常生长适温培养7天30~35℃锻炼24h再适温培养出菇试验栽培出菇快产量高品质好抗逆性强（二）原种、栽培种质量的鉴定具有菌丝白（符合该菌种的颜色）均匀、粗壮、有菇香味接种后萌发快菌种种类品种名称菌种级别代时生产厂家接种日期用于生产没有无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象黄水污染食用菌菌种的保存无论是母种、原种或栽培种，如果未及时使用，其菌丝就会很快衰老，降低生产力，影响产量和质量。因此，菌种必须进行适当的保存，其目的是防止退化，确保菌种纯一，防止杂菌感染。菌种保存的基本原理，主要是通过采用低温、干燥与缺氧的条件，以中止菌种的繁殖，降低其新陈代谢，使之处于休眠状态。1.斜面低温保存法将斜面菌种，置于冰箱内，在4℃左右低温下保存，以后每隔2～3个月转管移接一次。这种保存方法适于大多数食用菌菌种。但草菇菌种在5℃以下很快死亡；所以草菇的菌种，不必放在冰箱中，置于室温保存即可。为了延长保存时间，试管口处要用塑料薄膜包扎，以防培养基干固。在农村没有冰箱设备的，可把母种试管，用石蜡封口，再用塑料薄膜包封，沉放于清凉的井底保存。2.液体石蜡保存法食用菌的菌丝体都可用此法保存，方法简单，只在斜面菌种试管内，注入一层已灭过菌的液体石蜡，注入量以高出斜面1厘米为宜，使菌种与空气隔绝，降低其新陈代谢的活动，然后在棉塞外包以塑料薄膜，直立存放于室内干燥处或低温下保存，一般可保存一年以上。使用液体石蜡菌种时，只要用接种针从斜面上挑取少许菌体，放在新鲜的培养基上；经过培养，即可应用，原种则重新蜡封，继续保存。3.木屑试管菌种保存法用杂木屑按原种的培养基配制装入大号试管，容量为管高的三分之二，擦净管口塞紧棉塞，用牛皮纸包扎管口后高压灭菌，然后移入母种，在25～28℃下培养，待长满菌丝后，立即移到低温干燥环境保存、或埋于尿素、硝酸铵或地洞中保存，效果更好，并能延长保存时间。4.冷冻干燥保藏法这种方法采用真空、干燥、低温等手段，使菌种新陈代谢活动处于相对静止状态，在低温下快速冷冻，又在低温下真空干燥，而使菌细胞的结构与成分保持原来状态而保存菌种。还有沙土保存法、液氮超低温保藏法、滤纸片保存法、菌丝球生理盐水保藏法、麦粒保藏法、干孢子真空保藏法等。这里不一一介绍。要根据自己的工作需要及具体条件而定，一边保存，一边还要分离，复壮，做好选育工作，延续菌种的优良性能。原种和栽培种培养好后，应立即用于扩接栽培种或栽培生产，不宜保存过久，时间越长，生活力越差，也越容易感染杂菌。若因特殊情况不能及时使用，原种瓶口用牛皮纸包好，置4～14℃条件下可保藏一年左右。栽培种短期保存也可放于阴凉、干燥通风的室内，但种瓶不宜堆叠过高，以免堆内发热，加速菌丝老化。如何防止食用菌菌种退化菌种退化：在菌种传代、保藏和长期栽培过程中，某些原来的优良性状可能会消失或变弱，造成遗传的变异，出现长势弱、抗性差、出菇迟、产量低品质低劣等现象。菌种退化会导致菌丝体生长缓慢，对环境、杂菌等的抵抗力变弱，子实体形成期提前或推后，出菇潮次不明显等现象。1、引起菌种退化的原因很多：遗传变异、不良环境条件、杂菌污染、自然退化2、防止菌种退化的措施有：（1）选优分离（2）更换培养基的营养成分（3）有性繁殖（4）适宜条件培养菌种（5）选优去劣第一节食用菌的形态结构一、食用菌的基本组成二、菌丝体的形态结构三、子实体的形态结构第二章食用菌学基础知识结构菌丝体子实体有性孢子一、食用菌的基本组成在分类学上，食用菌属于真菌界中的担子菌门和子囊菌门。食用菌形态上有菌丝体和子实体两种形式。食用菌的子实体一般都比较大，直径和高度可达2-40cm，所以又称食用菌为大型真菌。菌丝体是食用菌的营养结构，主要功能是分解基质，吸收、输送及贮藏养分；子实体是繁殖结构，其主要作用是产生孢子，繁殖后代。菌丝体（营养体）子实体（繁殖体）子实体（繁殖体）多为担子菌门的真菌主要进行有性繁殖无光合作用多为腐生菌前期为菌丝体后期为大型子实体食用菌特点食用菌形态（伞菌为例）子实体菌丝体食用菌繁殖器官，主要功能是产生孢子，繁殖后代。菌盖菌柄食用菌营养器官，主要功能是分解基质，吸收营养。一次菌丝体（初生菌丝体）---单核菌丝次生菌丝体----双核菌丝三生菌丝---结实性双核菌丝菌托菌环1.概念(一)菌丝及菌丝体的正常形态结构菌丝：在培养基上向各个方向呈辐射状延伸、分支的每一根细线，称为菌丝。细胞管状，壁薄、透明，细胞内含有一个、两个或多个细胞核。菌丝体：是由基质内无数纤细的菌丝交织而成的丝状体或网状体二、菌丝及菌丝体的形态结构菌丝形态1孢子2孢子膨大3孢子萌发4菌丝分枝5菌丝体6放大的菌丝体a细胞壁b细胞核c细胞质d细胞隔膜集聚时多呈白色绒毛状孢子萌发或菌丝片断伸长分支吸收水分和养料，是营养器官在菌丝尖端，向四周辐射伸展2.概况生长点作用来源特征蘑菇圈蘑菇圈(fairyring):也叫仙人圈，仙人环，是由于蘑菇菌丝辐射生长的缘故。菌丝由中间一点向四周辐射生长，时间长了，中心点及老化的菌丝相继死去，外面的生活力强，于是形成了自然的菌丝体环，并长成蘑菇圈。3.菌丝体的划分菌丝体部位基内菌丝：基质内的菌丝气生菌丝：空气中的菌丝根据菌丝发育的顺序和细胞中细胞核的数目初生菌丝次生菌丝三生菌丝特点菌丝细，分支少，生长慢，生长期短，一般不结实。①初生菌丝刚从担孢子萌发出的菌丝概念特征初期无隔，单细胞多核菌丝很快生隔为多细胞单核菌丝②次生菌丝两初生菌丝质配而成来源多细胞双核菌丝细胞壁上有锁把状突起特征特点粗壮，分支多，生长快多以锁状联合方式分裂生理成熟时形成子实体生长期长质配结果质配始突起部位：次生菌丝顶端细胞实质：有丝分裂结果：菌丝伸长分支痕迹：丝壁有突起锁状联合锁状联合过程是已组织化的次生菌丝③三生菌丝(二)菌丝体特殊形态菌索形似根须状，顶端有生长点菌核坚硬块状物的休眠体子座容纳子实体的棒状或头状结构适应不良环境或利于繁殖作用蜜环菌的菌索茯苓菌核冬虫夏草子座蝙蝠蛾幼虫被虫草菌(Cordycepssinensis)感染，死后尸体、组织与菌丝结成坚硬的假菌核，在冬季低温干燥土壤内保持虫形不变达数月之久(冬虫)，待夏季温湿适宜时从菌核长出棒状子实体(子囊座)并露出地面(夏草)，可入药。产生有性孢子的肉质或胶质的大型菌丝组织体概念（一）概况成熟的次生菌丝扭结分化而成来源产生有性孢子的部位繁殖器官、食用部分作用三、子实体的形态结构猴头菌（头状）杏鲍菇（保龄球状）双孢菇（伞状）（二）子实体的形态特征马勃（球状）银耳（叶状）榆耳（耳状）珊瑚菌（树枝状）牛舌菌（舌状）角勺（匙状）块菌(块状)金耳（脑状）竹荪（笔状）肉球菌杯菌牛肝菌绣球菌喇叭菌（三）子实体的宏观结构特征都有部分有菌环菌托结构菌盖菌柄⑴菌盖组成质地：肉质、胶质、木栓质等组成：丝状菌丝或泡囊状菌丝菌肉表皮（各色）菌褶或菌管菌盖下面，产担孢子部位有子实层（生担孢子）⑵菌柄支撑菌盖，输送养料次要食用部位作用着生方式中生偏生侧生中生偏生侧生⑵菌柄菌柄与菌褶的着生关系直生延生弯生离生⑶菌环和菌托菌幕外菌幕：包被整个幼小子实体的膜内菌幕：菌盖和菌柄间的连接膜菌环内菌幕被撑破残留在菌柄上的单层或双层环状膜菌环1-2.单层；3-4.双层、可滑动；5.絮状；6.蛛网状；7-8.破裂后附着菌盖边沿菌托外菌幕被撑破残留在菌柄基部发育成的杯状、苞状或环圈状的构造1．苞状,2.鞘状,3.鳞茎状,4.杯状,5.杵状,6.瓣裂,7.菌托退化,8.带状,9.数圈颗粒状位于菌盖皮层下的松软组织叫菌肉。菌肉