Waters-HPLC色谱柱介绍

©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation1如何选择理想的如何选择理想的如何选择理想的如何选择理想的HPLCHPLCHPLCHPLC分析柱分析柱分析柱分析柱©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation2如何看待色谱柱？
色谱柱是液相色谱工作的最重要又最常使用的工具
对工具了解越多，越有可能尽早选对合适的工具，使工作开展的更顺利
工欲善其事，必先利其器！©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation3沃特世价值所在：技术能力+品质保障+专业服务Bettertraceability&controloftheentireprocessWaters•ManufacturesundercGMP,ISO9001andISO13485guidelines•RegisteredwithFDAasamedicaldevicemanufacturer©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation4概概概概要要要要
如何认识色谱柱如何认识色谱柱如何认识色谱柱如何认识色谱柱？？？？
沃特世色谱柱沃特世色谱柱沃特世色谱柱沃特世色谱柱：：：：为色谱工作者的任务而设计为色谱工作者的任务而设计为色谱工作者的任务而设计为色谱工作者的任务而设计XBridgeAtlantisSunFireXSelect
UPLC—HPLC方法转换方法转换方法转换方法转换
HPLC—OBD制备柱无优放大制备柱无优放大制备柱无优放大制备柱无优放大©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation5沃特世色谱柱：专为色谱分析工作者所需而设计
宽pH范围、耐受性最强、最通用的色谱柱
增强极性化合物保留的专用硅胶色谱柱
高容量、峰形柱效最优化的通用硅胶色谱柱
宽选择性覆盖、LCMS方法开发的首选色谱柱©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation6应对耐受性、通用性的需求色色色色谱谱谱谱工作者的需求工作者的需求工作者的需求工作者的需求：：：：
方法在高高高高pH条件下！！
方法在较高温度高温度高温度高温度条件下！！
耐受性耐受性耐受性耐受性？！
通用性通用性通用性通用性？！
柱效？！
样品复杂难以分离？！
需要各种键合相？
需要各种柱规格？2.5,3.5,5,10µm©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation7高pH耐受性对碱性化合物的分析特别有利—分离选择性、方法耐受性与柱使用寿命©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation8XBridge：基于第二代杂化颗粒技术BEH(BridgedEthyleneHybrid)Anal.Chem.2003,75,6781-6788U.S.PatentNo.6,686,035B2硅氧骨架中嵌入亚乙基桥-pH范围耐受更宽-机械强度更高-柱效佳©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation9增加化合物的保留并提高灵敏度：HighpHMobilephaseCompounds1.10-hydroxymorphine2.Morphine-3β-D-glucuronide3.Morphine-6β-D-glucuronide4.Morphine5.MorphineN-oxide6.6-acetylmorphineMinutes0.200.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.80%00.200.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.403.603.80%0LOWpH0.1%HCOOHHIGHpH0.1%NH4OH5123461234,5610-hydroxymorphineMorphine-3ß–o-glucuronideMorphine-6ß–o-glucuronideMorphineN-oxide6-acetylmorphineMorphine©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation10XBridge—耐受性最强、最为广泛适用2.5,3.5,5,10µm1.7µm耐受性最耐受性最耐受性最耐受性最强强强强、、、、最最最最为为为为广泛广泛广泛广泛适适适适用的色用的色用的色用的色谱谱谱谱柱柱柱柱
第二代杂化颗粒技术
无以伦比的流动相pH、温度和压力的耐受范围
达到前所未有的柱效、峰形和稳定性水平
广泛的键合相选择，配合各种分析物所需
齐全的柱规格供应，满足各种规模需要©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation11特殊键合相满足特定需求ShieldRP18：内嵌极性基团C18CH3NH3CH+17
通过极性嵌入基团保留水
可完全兼容100%水相
屏蔽硅醇基，对碱性化合物峰形更佳
提供与C18不同的选择性©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation12ShieldRP技术改善碱性峰形实例（（（（XBridgeRP18有更宽有更宽有更宽有更宽pH范围范围范围范围，，，，pH2-11！）！）！）！）pH7.0注：所示色谱柱性能比较情况，与具体操作条件相关，可能不能代表所有应用情况（法律申明）©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation13痢特灵(Furazolidone)原料药的杂质分析实例ShieldRP技术提供选择性实例（（（（XBridgeRP18有更有更有更有更宽宽宽宽pH范范范范围围围围，，，，pH2-11！）！）！）！）©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation14HilicModeColumn:BEHAmide&BEHHilic
Ligandtype:TrifunctionalAmide
Particlesize:1.7,3.5µm
Liganddensity:7.5µmol/m2
Carbonload:12%
Endcapstyle:None
pHrange:2-11
Ligandtype:Unbonded
Particlesize:1.7,2.5,3.5,5µm
Liganddensity:—
Carbonload:—
Endcapstyle:—
pHrange:1-9©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation15XBridgeTMHILIC与反相提供互补的分离选择性Minutes0.001.002.003.004.005.006.00112233332211V0=0.26V0=0.25Reversed-PhaseXBridgeC18HILICXBridgeHILIC3.Morphine3-ß-D-Glucuronide2.morphine1.6-acetylmorphineHILIC可以提供和可以提供和可以提供和可以提供和反相不同的分离选反相不同的分离选反相不同的分离选反相不同的分离选择性择性择性择性©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation16Hilic方法开发策略如需了解更多，请联系Waters消耗品部应用工程师©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation17应对越来越多的生物医药项目
应用于生物医药行业的：—肽的反相分析与分离纯化—小蛋白药物的反相分析—寡核苷酸的离子对反相分析与分离纯化
杂化颗粒，无以伦比的流动相pH与温度的耐受性
完整的方法与应用资料，整体方案
专用柱，经肽谱、蛋白混标或寡核苷酸阶梯混标质控确保批次重现性©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation18应对耐受性、广泛适用的需求—XBridge解决色解决色解决色解决色谱谱谱谱工作者的需求工作者的需求工作者的需求工作者的需求：：：：适用于高pH方法！！耐受较高温度条件！！耐受性极佳！通用性好！柱效高！多种键合相、多种柱规格适应各种项目需要！2.5,3.5,5,10µm©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation19应对极性化合物极性化合物极性化合物极性化合物保留的需求色色色色谱谱谱谱工作者的需求和工作者的需求和工作者的需求和工作者的需求和问题问题问题问题：：：：
越来越多的极性化合物项目！
极性化合物的保留难？！
离子对试剂应用不便！
峰形？！
柱耐受性？！©2009WatersCorporation|COMPANYCONFIDENTIAL©2011WatersCorporation©2011WatersCorporation20反相条件下增强极性保留，峰形普遍良好对嘌呤碱表现良好峰形对嘌呤碱表现良好峰形对嘌呤碱表现良好峰形对嘌呤碱表现良好峰形Compounds:1.Cytosine胞核嘧啶2.5-Fluorocytosine5-氟胞核嘧啶3.Uracil尿嘧啶4.5-Fluorouracil5-氟尿嘧啶5.Guanine鸟嘌呤6.Thymine胸腺嘧啶7.Adenine腺嘌呤123456Minutes1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.007V0=1.83minConditionsColumn:Atlantis®T34.6x100mm,3µmMobilePhaseA:10mM乙酸铵,pH5.0MobilePhaseB:乙腈FlowRate:1.0mL/minGradient:TimeProfile(min)%A%B0.0100010.094615