waters液相色谱仪的维护与常见故障

©2007WatersCorporationWatersHPLC仪器培训讲座2008.10.22蒙牛©2007WatersCorporation2培训时间安排WatersHPLC仪器的使用和保养相关知识。2008-10-22下午14:00-14:40提问10分钟=====================================WatersHPLC仪器常见故障以及处理方法。2007-6-29下午14:50-15:30提问10分钟©2007WatersCorporationWatersHPLC仪器的使用和保养相关知识©2007WatersCorporation5仪器配置2695+柱温箱2489Empower2©2007WatersCorporation6流动相及溶剂瓶使用HPLC试剂/溶剂，含缓冲盐的流动相过0.45μm膜除去微粒物质;更换流动相时,应彻底清洗，防止交叉污染。定期清洁溶剂瓶及附件，防止长微生物。©2007WatersCorporation7输液泵2695©2007WatersCorporation8输液泵密封垫易损坏引起故障，每天实验结束一定要认真冲洗泵,减少密封垫损耗，并注意防止堵塞,使用缓冲盐流动相时,更要小心。使用HPLC级试剂,注意泵压力不要太高,要适当调整压力,一般压力上限在3500-4000PSI，下限为50PSI，注意防止因泵堵塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧坏电机。©2007WatersCorporation9正确使用您的色谱泵：•使用高品质的溶剂•溶剂过滤（注意滤膜的选择）•脱气溶剂•柱塞杆清洗•注意调节流量时的变化速度输液泵©2007WatersCorporation10进样器2695©2007WatersCorporation11进样器停机前一定冲洗干净进样器内残留的样品或缓冲盐，防止样品和无机盐沉积造成样品交叉污染，硬件磨损或管路堵塞。注射器，样品瓶最好使用仪器自配的，不要用其它仪器的。©2007WatersCorporation12柱—防止柱性能下降1溶剂的化学腐蚀性不能太强；2避免颗粒物在柱头沉降；3柱压不能太高，防止冲击太大；4流动相pH值小于7时，最好用大粒度同种填料的预柱；5柱头加滤片（烧结不锈钢),需要时加保护柱；6经常清洗柱；7长时间不用时要保存好,一定要洗去缓冲盐,加入大于10%有机溶剂，将柱两端拧紧,保持柱填料湿润。©2007WatersCorporation13检测器2489双波长紫外检测器©2007WatersCorporation14检测器保持清洁，每天用后与色谱柱一起清洗；使用脱过气的流动相，防止气泡滞留池内；检测器灯有一定寿命，超过4小时不用时可以不开灯。©2007WatersCorporation15数据处理系统WatersEmpower2©2007WatersCorporation16数据处理系统Empower色谱工作站:尽量使用正版软件；防止网上病毒损坏软件；不装杀毒软件；不做与实验无关的操作。©2007WatersCorporation17提问时间©2007WatersCorporationWatersHPLC仪器常见故障以及处理方法©2007WatersCorporation191、流动相及溶剂瓶脱气不充分(噪声大，出毛刺)用He脱气（600，2695）真空脱气（Degasser，2695，1525）超声脱气（超声波清洗器）©2007WatersCorporation201、流动相及溶剂瓶流动相供给不畅，泵压力不稳流动相接近用完溶剂滤头堵塞（有颗粒，长霉）溶剂过滤头©2007WatersCorporation211、流动相及溶剂瓶溶剂瓶或流动相被污染产生有规则的噪声；基线上升，梯度洗脱出鬼峰；原因:溶剂质量差（含杂质多）；配流动相的玻璃器皿不合格,微生物影响；配制流动相的操作不当（过滤、脱气、搅拌).©2007WatersCorporation222、输液泵单向阀a.球和阀座粘在一起，堵死，打不出溶剂，(缓冲盐流动相)用高质量的溶剂冲洗，不同极性溶剂冲洗,如水、甲醇、异丙醇、二氯甲烷…，更换新单向阀。©2007WatersCorporation232、输液泵b.球和阀座密封不严，压力不稳，气泡进入阀中，紧贴在阀体内，使球难以返回阀座，引起倒流，压力和流速变化大，可能有小晶体颗粒。清除气泡的办法：打开排液阀，大流量冲洗，用脱过气的甲醇冲洗，一般可解决问题。WetPrime©2007WatersCorporation24PN：700000254PerformancePLUSCheckValves输液泵（2695/510/515/15xx/600））•易于使用•提高效率•长寿命•溶剂赖受性更好•兼容2690/5泵进口阀•兼容600,515,501泵进、处口阀•兼容510、M6000A泵进口阀©2007WatersCorporation252、输液泵泵垫圈磨损或破碎：高压下压力不稳，从泵头往外渗漏流动相，色谱峰的保留时间会改变。解决办法：更换新垫圈。更换方法按维修说明书上的方法一步步操作。©2007WatersCorporation262、输液泵注意：输液泵的垫圈要和流动相匹配协调。多数垫圈和流动相是协调的,但有的垫圈适用于甲醇、水、乙腈，在四氢呋喃中溶解、变粘、变软。需换垫圈时,应向Waters咨询垫圈的规格型号。色谱工作者一般应学会换密封垫圈。©2007WatersCorporation272、输液泵柱塞杆故障磨损、漏液(正常损耗)使用不当被折断(多为安装不合适导致)柱塞杆被卡住，不能运动。更换新柱塞杆初次请维修工程师帮助解决。©2007WatersCorporation28输液泵（2695）©2007WatersCorporation29PrimaryHeadAccum.HeadPrimaryX-ducerSystemX-ducerPrime/VentValveIn-LineFilterToSampleManagementSystemFromDegasserGPV输液泵（2690/2695）•注意流动相组分的互溶性！•使用正确的SealWash溶剂！©2007WatersCorporation30输液泵（2690/2695）阀芯注意箭头方向！常见故障：LostPrime©2007WatersCorporation31输液泵（2690/2695）单向阀的清洗如果使用过缓冲盐溶液请使用40℃~50℃的温水超声20min如果使用过纯乙腈请使用异丙醇超声20min如果使用过其他流动相或上述两种溶液超声后请使用纯甲醇超声20min©2007WatersCorporation32输液泵（2690/2695）2695初始化错误：Plungerhomingoverpressure在线过滤器©2007WatersCorporation33输液泵（2690/2695）©2007WatersCorporation343、进样系统a.样品瓶不配套瓶小——针弯、折断瓶大——样品少，抽不上样瓶破碎更换合适的样品瓶。自动进样系统©2007WatersCorporation353、进样系统b.注意样品瓶隔垫，防止污染。c.进样器针头堵塞（样品、缓冲盐、隔垫碎片、针头本身)，可用溶剂清洗，或换新针头。自动进样系统©2007WatersCorporation363、进样系统d.样品滞留：空白溶剂出色谱峰.加倍清洗，或调整样品瓶顺序，（从低浓度开始，高浓度放后面）或在样品瓶前放清洗液瓶.自动进样系统©2007WatersCorporation37自动进样器（717/2690/2695）©2007WatersCorporation38自动进样器（717/2690/2695）正确使用步骤：•选择适当的洗针溶剂（绿管溶剂）和SealWash溶剂•清洗进样针（NeedleWash）•清洗柱塞杆密封（SealWash）•平衡系统•Purge进样器•实验操作•清洗系统•Purge进样器•清洗进样针（NeedleWash）•清洗柱塞杆密封（SealWash）©2007WatersCorporation39自动进样器（717/2690/2695）注意：每次进样前仪器会洗针（Needleswash）进样之后不洗针推荐：每次批量进完样后手动清洗，或最后进一针50ul流动相，如果流动相中有盐的话则用纯净水替代缓冲盐那部分比例。©2007WatersCorporation40自动进样器（717/2690/2695）其它注意事项：•打开样品仓盖后，等待样品盘停止转动后再取出•关机前取出所有样品瓶，或将样品盘全部取出•注意保持样品仓内和样品盘清洁•请使用Waters公司认可的样品瓶•使用微量进样瓶请设定正确的针尖高度值（DepthofNeedle〕•进样瓶垫损环后，请勿使用其它替代品©2007WatersCorporation41自动进样器（717/2690/2695）其它注意事项：•仪器右侧的Syringe要注意不能有气泡，一旦出现，请使用面板上的PurgeInjector功能©2007WatersCorporation422695常用操作正确的冲洗系统，对于保证设备的正常使用是很关键的，在使用前后都要注意。冲洗包括：DryPrimeWetPrimePurgeInjectorPrimeSealWashNeedleWash这些操作的具体步骤参见本次讲座的参考资料©2007WatersCorporation432695常用操作溶剂置换缓冲盐溶液水有机相溶液下班过程上班过程©2007WatersCorporation444、色谱柱1)塔板数下降a.样品处理不合适，选择适当的样净化方法，选择合适流动相。b.柱头塌陷,考虑重新购买。2)峰形变坏a.出现拖尾峰，分叉峰，非高斯峰。b.与塔板数下降有关，峰形坏保留时间不变，可能是柱堵塞(不锈钢烧结片)，或柱头有死体积（常见于使用Peek接头）。©2007WatersCorporation454、色谱柱3)柱压突然增大a.样品沉积在柱内,用能溶解样品的溶剂冲洗（断开柱和检测器）可正向冲，反向冲（慎用）。b.柱内硬件有问题：滤片堵塞，换新片;塌陷：考虑买新柱。©2007WatersCorporation464、色谱柱4)保留时间改变不同柱保留时间的变化,主要是填料差异造成的,不同牌号柱出峰顺序不变，保留时间有小的变化。©2007WatersCorporation47由色谱柱引起的故障故障现象解决办法过滤片堵塞压力增高、柱效下降、峰形差倒柱冲洗或换过滤片柱头塌陷峰分叉、柱效下降考虑购买新柱键合相流失保留值改变、峰形差、柱效下降考虑购买新柱样品堵塞压力高用能溶解样品的溶剂冲洗强吸收样品柱效下降、保留值小强溶剂反冲©2007WatersCorporation48注意色谱柱连接WatersOtherPEEK接头PN:PSL613315√XX©2007WatersCorporation495、检测器a.灯故障:基线噪声大,灵敏度低,灯承诺寿命:2000hor1Year代表机型：2996，996，2487，2998，2489紫外—可见光检测器©2007WatersCorporation505、检测器b.流动池流动池内有气泡：用脱气甲醇，不同流量冲洗。池堵塞（入口、出口、池内）：用可溶堵塞物的溶剂冲洗（缓冲盐用水冲洗）池污染：异丙醇、二氯甲烷、6mol/LHNO3冲洗.紫外—可见光检测器©2007WatersCorporation515、检测器b.流动池检测池和参比池UV以空气为参比，一般不扣流动相本底，若用有紫外吸收的流动相，参比信号不为零，会出现倒峰和伪峰。此时，选择合适的流动相。紫外—可见光检测器©2007WatersCorporation525检测器环境温度变化引起基线漂移。流动相温度变化引起折射率改变，紫外光传导变化。柱温变化引起基线漂移。c.温度影响©2007WatersCorporation53Peaknotfound:656nm