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实验中心网站：***2019年8月15日星期四微生物无菌技术及仪器备使用和维护2010.10~2010.12细菌生理生化反应2微生物包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物等在内的一大类生物群体，个体微小，与人类生活密切相关。广泛涉及健康、医药、工农业、环保等诸多领域。细菌生理生化反应3细菌生理生化反应4发酵工程基因工程细胞工程酶工程微生物学实验技术细菌生理生化反应5一．微生物无菌技术及仪器设备使用和维护二．混合菌种的分离三．菌种保存及细菌形态观察四．酵母菌的形态观察及微生物直接计数五．霉菌的形态观察六．葡萄酒的酿制实验项目细菌生理生化反应6实验要求一．1．课前认真预习，明确本次实验的目的、要求、内容、方法及步骤二．2．提前5-10min进入实验室，检查实验所需物品是否齐全，做好实验准备工作。三．3．实验时严肃认真，根据实验指导要求进行操作，仔细观察和记录，并进行独立思考，按时完成实验内容和实验报告。四．4．保持实验室安静，实验时不得随意走动和谈笑。室内严禁吸烟、不允许在实验室内接听手机细菌生理生化反应7一．5．保持实验室清洁整齐，书包、衣帽等应放在指定位置，不能置于实验台上；一切实验用具用完后擦洗干净，放回原处。二．6．爱护实验室一切仪器设备，珍惜药品及一切消耗用品，节约水、电。三．7．实验完毕后，值日生值日。值日工作范围包括：关闭水、电、门、窗；查看水池，实验台，桌椅，地面是否干净整齐；最后在值日生记录本上登记值日情况，再交于老师签字后方可离开。（各班负责人分配值日生，并将名单交给老师处一份备案。）细菌生理生化反应8考核办法实验习惯10％：迟到1次扣1分，早退扣1分，不穿实验服者扣1分，不写预习实验报告扣5分，值日生必须最后走，早走者扣1分。实验报告20％：自己归纳总结，格式规范。按时交报告，迟交报告者要扣分。实验操作30%：实验思路清晰，各项操作都能认真练习并熟练掌握，各组员之间协调合理，配合得当。实验考试成绩30％：笔试（实验结束1至2周后考试）预习报告10％：迟到、早退、缺一次实验以上者或考试不及格者均不能得优秀，缺两次实验的不能得良好，缺该课程1/3以上者或不参加实验考试者，均没有实验成绩。细菌生理生化反应9实验报告的格式：（1）实验名称（2）实验目的（3）实验原理（4）实验步骤（5）实验结果细菌生理生化反应10实验目的1.掌握包扎常用器材；2.掌握和运用微生物实验中常用的仪器和设备细菌生理生化反应11微生物实验操作基本技术一．制作棉塞和包扎常用的实验器材（视频）培养皿、移液管、锥形瓶、试管细菌生理生化反应12塞棉塞和包扎1）棉塞的制作：现场演示用途：①避免杂菌侵入②保证良好的通气性能。2）旧报纸包扎：演示用途：①防止灭菌时水蒸气打湿棉塞②减缓培养基水分的蒸发。细菌生理生化反应13常用仪器设备使用原理及操作一．灭菌锅二．摇床（水浴、气浴）三．培养箱四．无菌工作台细菌生理生化反应14灭菌锅细菌生理生化反应15一．适用于医疗卫生事业，科研，农业等单位，对医疗器械，敷料，玻璃器皿，溶液培养基等进行消毒灭菌。二．供微生物学实验、细胞生物学实验、发酵学实验、分子生物实验等学科使用。细菌生理生化反应16原理及使用方法一．原理高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽,待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细菌生理生化反应17一．使用方法：一.开盖向左转动手轮数圈，直至转动到顶，使锅盖充分提起，拉起左立柱上的保险销，向右推开横梁移开锅盖。二.通电接通电源，将控制面板上的电源开关按至ON处，此时欠压蜂鸣器响，显示本机锅内无压力（当锅内压力升至约0.03Mpa时蜂鸣器自动关闭），控制面板上的缺水位灯和低水位灯均亮。低水位（LOW红灯）亮，蒸发锅内属断水状态，缺水位（LACK黄灯）亮，显示电源已正常输入本机。细菌生理生化反应18三.加水第一次使用时加入约8L的纯水，观察控制面板上的缺水位灯和低水位灯相继灭，继续加水至高水位灯（HIGH绿灯）亮，每次使用时需要补充适量是纯水使高水位灯亮。如加水过多的发现内胆中有存水时，应开启下排气阀放去内胆中的多余水量。四.堆放将包扎灭菌的物品放入灭菌筐内，各包之间留有空隙。细菌生理生化反应19五.密封把横梁推向左立柱内，横梁必须全部推入立柱槽内，手动保险销自动下落锁住横梁。并将手轮向左旋转，使锅盖向下压紧锅体，加力使之充分密合，致使密封开关处于联通状态。当连锁灯亮时，显示容器密封到位。六.温度、时间的设定设定温度1.按动一下确认键，绿色数显在闪烁表示可以进行设定状态。2.按动增加键△或是减少键▽，将温度上调或下调，设定所需温度后再按一下确认键。细菌生理生化反应20一．设定时间1.按一下确认键将温度显示切换成时间显示状态，绿色数显在闪烁表示可以进行设定状态，前两位为小时，后两位为分钟。2.按动增加键△或是减少键▽，将温度上调或下调，设定所需温度后再按一下确认键。七.灭菌八.干燥需要迅速干燥的物品需要打开安全阀或将排汽排水阀向左旋转至“开”位置。九.启盖向左转动手轮数圈，直至转动到顶，使锅盖充分提起，拉起左立柱上的保险销，向右推开横梁移开锅盖。细菌生理生化反应21注意事项1.堆放灭菌物品时，严禁堵塞安全阀和放气阀的出气孔，必须留出空位保证其空气畅通，否则安全阀和放气阀因出气堵塞不能工作，造成事故。2.灭菌液体时，应将液体灌装在硬制的耐热玻璃瓶中，以不超过3/4体积为好，瓶口选用棉花纱塞，切勿使用未打孔的橡胶或软木塞。3.灭菌液体结束时，不准立即释放蒸汽，必须待压力表指针回零位方可放余汽。细菌生理生化反应224.对不同类型、不同灭菌物要求的物品，如敷料和液体等，切勿放在一起灭菌，以免造成损失。5.灭菌终了时，若压力表指针已回复零位，而盖不易开启时，则可将放气阀摘子置于放气方汽。使外界空气进入灭菌器内，真空消除后，盖即可开启。6.平时应将设备保持清洁和干燥，方可延长使用年限，橡胶密封圈使用日久会老化，应定期更换。细菌生理生化反应23摇床（气浴、水浴）一．振荡器（摇床）是生物、医药、卫生等行业用于微生物细胞组织生长的理想培养装置。二．供微生物实验、发酵学实验以及植物细胞培养。三．目的：为了增加空气与发酵液的接触面积，同时可以是发酵液保持良好的混合状态。细菌生理生化反应24照片细菌生理生化反应25原理及使用方法一．原理水浴摇床：水浴箱和振荡器相结合组成的水浴摇床，由水提供水浴和恒温环境。气浴摇床（又称空气摇床）：由恒温培养箱和振荡器相结合生化仪器的，由空气提供恒温环境。细菌生理生化反应26一．使用方法a.将机器背面的“断路器“置于”“通”位置b.将电源开关置于“∣”c.将旋转按钮置于“∣”2.旋钮功能按下旋钮：逐个进入设置温度和设定时间界面（顺时针-增加，逆时针-减少）设置转速：直接扭动旋钮进行转速更改，面板位置显示的是设定值，顺时针拨动，设置转速值增加，每次增加5，逆时针拨动，设置转速值减小，每次减少5。2秒不操作时系统确认后显示实际测得转速。细菌生理生化反应27设置温度：按一下旋钮保持3秒钟，设置温度值成闪烁状态，顺时针拨动，设置值增加，每次增加0.1，逆时针拨动，设置值减小，每次减小0.1。2秒不操作时系统确认后显示实际测得转速。设置时间：按一下旋钮，面板上显示的是当前设置的温度，再按一下旋钮，进入时间设定状态顺时针拨动，设置值增加，每次增加1，逆时针拨动，设置值减小，每次减小1。2秒不操作时系统确认后显示实际测得转速。细菌生理生化反应28注意事项1.需要仪器进行长期运行，请将时间设置为0.2.设备处于在工作状态时严禁把手或物体伸入容器壁与摇篮的缝隙之间，以免伤及人身和破坏设备。3.使用前检查箱内夹具或水位，以确保安全无误。细菌生理生化反应29无菌工作台细菌生理生化反应30一．洁净工作台是一种提供局部无尘,无菌工作环境的空气净化设备,并能将工作区已被污染的空气通过专门的过滤通道人为地控制排放，避免对人和环境造成危害，是一种安全的微生物专用洁净工作台。二．供微生物学实验、分子生物实验、发酵学实验、细胞学实验等学科。细菌生理生化反应31原理及使用方法一．原理通过风机将空气吸入预过滤器，经由静压箱进入高效过滤器过滤，将过滤后的空气以垂直或水平气流的状态送出，使操作区域达到百级洁净度，保证生产对环境洁净度的要求。细菌生理生化反应32一．使用方法“1.作业前准备：打开位于右下侧的“总电源开关（绿色）”按动“风机开关”连续按动“照明/杀菌紫外灯”。（保持设备运行20min）2.正式作业：按动“照明/杀菌紫外灯”开启荧光灯，保持风机在“标准（中速）状态下运行。3.结束作业：保持风机运行10min后，按动“风机开关”停止风机运行按动“照明开关”或“照明/杀菌紫外灯“关闭荧光灯关闭“总电源开关（绿色）”。细菌生理生化反应33注意事项1.新安装的或长期未使用的工作台，建议使用前用超净真空吸尘器或不产生纤维脱落的物品认真进行清洁工作。2.带移门工作台操作时，移门开启的高度虽无明确规定，但一般不宜开启过高或关至过低，以免影响风速和洁净度。3.工作台面上禁止存放无关的物品，以保持工作区的洁净气流不受干扰。4.禁止在工作台面上记录书写，工作时应尽量避免作明显干扰气流的动作。5.禁止在预过滤器进风口部位放置物品，以免挡住进风口造成进风量减少，降低净化能力。细菌生理生化反应34培养箱适用于生化、生物、医药、食品加工等行业对微生物、细菌等方面的培养实验。供微生物实验、药用微生物实验和发酵学实验课程使用。细菌生理生化反应35培养箱开机通电放入培养物品打开电源（仪表显示盘亮并能听到风机运转声音）控温仪经4秒自检程序后进入工作模式（注：PV-测量温度，SV-设定温度）温度设定1.按一下OK键，使PV显示“SP”，SV显示出厂时设定温度（产品出厂时设定SV=37℃2.按←移位键，闪烁数据位为修改位，再按住↓或↑，将SV显示的数值修改为所需要的工作温度值后按“OK”键确认。3.再按确认键，使仪表返回工作模式，产品进入工作状态。细菌生理生化反应36定时功能使用1.按二下OK键后，PV显示符号“ST”时，SV显示“O”时，产品无定时功能（出厂设定值）。2.当用←、↑键设定时间后（定时设定范围：1~9999分），再按一下？键，控温仪进入工作模式，当PV温度达到SV值，定时即开始运行计时时间。定时结束时，显示SV，End产品停止加热输出，蜂鸣器叫4次以示提醒；如需重新启动则同时按↓、↑键。按←键一下，PV显示的数值即为已运行的时间，SV的数值即为设定工作的全部时间。细菌生理生化反应37注意事项注意事项1.每次使用结束后，先关电源。打开箱门待箱内温度冷却后，再取出被培养物品。2.若长期停止使用，必须对产品进行内外清洁工作。3.若存放环境湿度大，应定期（1个左右）通电加湿进行驱潮处理。一．4.重新使用前或工艺要求改变。应进行控温精度的核对工作。细菌生理生化反应38实验要求一．能够熟练器材包扎；二．独立运用高压蒸汽灭菌锅、培养箱、无菌工作台等设备；三．实验报告：讲授设备的工作原理及操作方法