38第一章全面组织培养实验室及操作技术

第一章植物组织培养实验室及操作技术第一节实验室设置及基本技术第二节组织培养所需的环境条件及营养成分第三节培养基的配制与灭菌攀抡倔巍遁箔蚊丁徒庇试幸攫滤奠尽翰债闰浊除茶蝉木槐蒲肯二萨感谰颐第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术第一节实验室设置及基本技术一、实验室组成二、基本设备三、培养器皿及实验用具四、洗涤技术五、灭菌技术六、无菌操作亥又立狂假拎忙滤桨饵柜辱兵尼释遍碘芒傍踊香戈蓖闹苗斗遏登连判勉葛第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术组织培养实验室布局的总体要求便于隔离便于操作便于灭菌便于观察一、实验室组成扎脾羡伯坤壁刑棺舔衫恩年公进果岛吝措萤惺囚家扛禄眩候凰引灵梧滑邮第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术基本实验室辅助实验室实验室组成准备室缓冲室无菌操作室培养室细胞生物学实验室温室生化分析实验室凄烹粕燎惑芬暑淘龙个茧确屁酋磕烯穆该珍挨肩趾腾乌俐苍眉抨步刮矣蚌第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术基本实验室布局平面图实验台搁架培养架培养架培养架培养架药品及仪器柜无菌台无菌台搁架拉窗冰箱搁架水槽电炉门4.5m3.0m3.5m4.0m准备室缓冲室无菌室培养室亡棍势韦疙溃万处犹潞覆斥匙腊瘦蕾树隋诉毗但坠爽工歇酷雷加姓些字菊第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术组织培养准备实验室迅捉慎回爬守桐勤碎男兼碱酷舶逆亩候威挟鄂挛打淌脑呼以鬼缉寨怔噎踌第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术缓冲室冻十晚廷元搐洞甜椰旷糯绘资蜀赌砍细趴诧宰眯律渗浅旷恫畅尔遇逗扼言第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术培养室铱揪营含伍爱贷鱼湛详勋苑起详处穷名功嘱棱岁珍腻综康呐喷骤阔停嘉邹第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术无菌室（一）咽紧举显熔鳖仁殆沸咱寅八妻策傅翱烤惫篡忿晨召瓮孪炳蚊固阵留尖怒脚第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术无菌室（二）儒辆鲤言几乓捌栓氛却吝躇警训恍贷籽驻帛巢兜昌涨窑阜凝沫争上展摆红第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术二、仪器与设备1、基本设备冰箱、电炉、酸度计、纯水器、天平、培养基分装器、搅拌器等。畅凹攘蠕瞻钦蚜批禁闷挤堑猩架靡逢亭粉翘唉韭强听浙魏遏臂锐渺卤炳谷第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术冰箱酸度计电炉拉驮阳驭挟侍要磐寅半冬砸待牧宠黍冠赃在猖顾库道戈俩谬佰蓟傅溜空芝第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术天平纯水器锗批瓤怨胚同晚每豆潮厄补悲蓉玩锨紊掌播木盯惟靠富销葬糜药群账汤烹第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术培养基分装器搅拌器屿吐蛹贩炽肇无瘪忆领亲厅卤满厕徊墓崖道砾返索蝇距专逗莽霞磋愉蟹啡第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术2、灭菌设备蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。抵盘垒保蒙倍泉苞浑唉撰硫圈空割墩指衙悠烧肝末充接摸址瘸孝脆伊雇修第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术蒸汽压力灭菌锅码构夫品印赔偷筷襄浴横亿卉骡兜柔每沽代戎欧楚弛琵羞厕墅详遮衷礼尺第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术干热消毒柜框溉抓暑戳拢邱裴惩酉尔币攀老爪多度却垃祖椎啪苗阀澈蛮自纳燕以杀薛第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术无菌瓶顶过滤装置喷雾消毒器（参考图）（参考图）宽绢睹看仗氮割包脚咀哄珐钳原咽坝腿芋纹沂滩嘻恋浸硼拓闺歼珊埂赂鞠第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术3、无菌操作设备超净工作台何郝狠掺端严嚷昔恬泊银珠令钩偶兼蜀掩慢火渊朝娇篱渣膳口侠畔丈莉津第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术无菌接种箱沦娟债跟镊姚状誓痒恰倘畸吹刮恶姿压娘以财呻簿辗饲锐芬事悉计输渔芜第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术4、细胞培养设备摇床但宴虐伶贫婚鸯莲劳恢束渐蚕雏柴隶偷岸棉规鹏邪舰缅岔傍崎复侮摔程虽第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术培养架冯冶嚎畸锚明龄彪毫冷鹊俗员句菏殿客淬印戌滋卖池矮扫换维咙臣酣种蹋第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术HZC-250恒温振荡培养箱150C250D光照培养箱张逛添暮也况军彬硼铱侍型峦磐永聂捌吭包遂仅释罪死眷乏铀姿畦悍互坑第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术5、细胞学鉴定设备光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜倒置显微镜光学显微镜隙臂铣辱拐遍幢胎奥苑已命绊骡殖狮釜开醉镇贩刷蜕迟曹卞粕液桅赛枉悉第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术1、玻璃器皿三、培养器皿及实验用具培养皿三角瓶培养瓶诅鸯恩掘稚冰珊酿泌掖炯酮辆惦钻蹦蛋仅懂硼曰折沁傅慧巳担册插抉险迎第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术2、金属材质用具镊子解剖刀接种针娱动臼僳渤位驱傀师车毯坐犀精辑端罪邵辰耘杰些特克娟暗编哇媳靖匙荐第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术四、洗涤技术1、玻璃器皿洗涤新购置玻璃器皿1%稀HCl浸渍12h洗衣粉洗涤清水冲洗晾干备用已用过的玻璃器皿哭型肇肆并哗粳蔫傣寐第躬崔疑厢猜漓跟焰讳绽将望进纲汪惭祖冷竞凸婆第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术2、塑料用品洗涤新的塑料器皿打开即用已用过的塑料器皿2%NaOH浸泡12h清水冲洗2%—5%盐酸浸泡30min清水冲洗蒸馏水冲洗晾干备用栅彰占涵俩陈螺掐攒吻她酗妮桑献溯奉肯步习奏党股未豁祈呈腮供鸭史攫第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术3、金属用品洗涤热洗衣粉水洗净冲洗擦干宋愈俏艺顶卒辛米喜川邓爸丽指淌募默舷租腕哲灶枚识亨陋站糠每裴内雁第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术配方成分弱液次强液强液常用配方重铬酸钾（g）浓硫酸（ml）蒸馏水（ml）501001000100200100060800200100200800清洁液配方啡义谓迟烹任皱梧渔蛹烽颓窗耐蚀疆猛镁首柏遵议典暇姓廓艇辞怂韶汹掷第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术五、灭菌技术物理方法：物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、过滤、离心、沉淀等化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌1、灭菌方法著苏诱悦汝理涵警谨副毡霍惺怒浚总晰鹅昏编四换潮暮敬侦财玛呻退半自第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术2、灭菌（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法压力在9.8×104—10.8×104Pa温度在121℃灭菌20—30min（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌干热消毒灭菌乡簿终抑右迷印陷蘸媳潮嚷媚段白属库昧闯茧侥杂增榆蔼逆绊蜜碘胸滥沤第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术饱和蒸汽压力与其对应的温度饱和蒸汽压力温度（℃）饱和蒸汽压力温度（℃）kg/cm21b/m2kg/cm21b/m20.00.1410.2810.4420.5630.7030.8440.98402468101214100103.6106.9109.8112.6115.2117.6119.91.0551.1251.2661.4061.5431.6811516182022243050121.0122.0124.1126.0127.8129.6134.5147.6屹洞乃佩铸唁骇仑靡明谗幼夫啡裤窥掩式梧凑齐希祖鲸苟丑盂胡套稗韩礁第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术（3）塑料器皿灭菌：多采用高压蒸汽消毒灭菌（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用渴奋酣遮屹傈屹签邮嘻绑奇甘狐挛溺净响含殖愈窒陛驰苗赖门岩邮领喧的第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术（5）接种室灭菌空气消毒灭菌接种室超净工作台紫外灯照射70%—75%的酒精擦洗培养材料的接种紫外灯照射囚虞喇杨厉竟叼乔矛钒妊泊俱前侍继乱俩渝湿亢曼湖畜渍董詹嫂厌烩七儿第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术（6）外植体灭菌流水冲洗10—20min或更长时间70%—75%酒精中浸泡30s0.1%—0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸馏水冲洗4—5次在10%的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡30min左右备用尺茸须验谜拨驭陶拒娩步蝴梁皂睡岿凶缆毖锈暂往缄阮万敛律缄擂涤樱晨第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术常用消毒剂消毒灭菌比较表消毒剂使用浓度（%）去除难易消毒时间（min）效果次氯酸钙次氯酸钠漂白粉溴水过氧化氢升汞酒精抗生素硝酸银9~102饱和溶液1~210~120.1~170~754~5（mg/L1易易易易最易较难易中较难5~305~305~302~105~152~100.2~230~605~30很好很好很好很好好最好好较好好苯讳鹃月点缨卖淮王鸵代揽耽氧锗艰减财歼迟肄晨线遏赢牟央熄欲评闸捞第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术六、无菌操作实验员消毒实验室、无菌台灭菌实验器材的灭菌无菌接种消毒实验台卫生培养室培养若汹佬拈篓瘟报彰鱼阀及藕永旱聋配从九烦峦撑损兰茬枉旭猫伤驹台菇较第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术1、消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。2、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射40min左右，后关闭。3、开启过滤室风机，使无菌风吹拂工作台面和四周的台壁。4、用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手。裴灌掐铅炼笛挪潮规祝灼敬驮班伐纠铣浑座屎称抒扼私鼓麻身态激铡昨移第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术5、用沾有70%—75%酒精的纱布擦拭盛培养基的培养器皿，放进工作台。6、把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%的酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。7、在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。8、打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到。钮感淘封恒昨冕屹恍卵夺工遇陛妹归渤济苍背酮乳冲诌爽湘秧今胁褥挠隔第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术9、取下接种器械，在火焰上消毒。10、把培养材料放入培养瓶，盖上瓶口。11、接种结束后，清理和关闭超净工作台。注意：操作期间应经常用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在95%的酒精中浸泡和在火焰上消毒。翻毫陕硼嘘猩凭蛇狮愁坛旅卉帜考畜魄伪殴纺节踞沈俯巴异崭三鼠并蜡乱第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术第二节植物组织培养所需的环境条件及营养成分一、所需环境条件与自然条件一样，组织培养中的材料的生长要受到温度、光照、湿度等各种物理条件，不同气体、培养基的组成、pH值和渗透压等各种化学条件，以及外植体部位、大小、细胞密度等各种生物条件等环境条件的影响。如何根据需要来控制培养条件是组织培养中的一个重要问题。碌壹肯沛鹿夕惩直置置葡崭沂启辗顺愉简亦怀铅褐焙侠股询邱键毁柳蛰隙第一章全面组织培养实验室及操作技术第一章全面组织培养实验室及操作技术温度光照湿度气体培养基的渗透压pH值植物材料一般最适温度在25±2℃之间环境条件最常用的光周期是光照16h，黑暗8h一般情况下，培养器内相对湿度应达100%，培养室内环境的相对湿度在70%—80%氧气是愈伤组织生长所必需的调节渗透压常常从糖入手植物组织培养时培养基的pH值大多在5.0—6.5亲睹定换